MethodsPreparation of de-oiled alga

Methods
Preparation of de-oiled algal residue
The following algae samples were obtained in pure form
from the University of Texas Culture Collection of Algae
(UTEX) Austin, TX, USA: S. capricornutum, Scenedesmus
sp. and S. dimorphus. Thalassiosira weissflogii, a diatom,
was obtained from the Provasoli-Guillard National Center
for Marine Algae and Microbiota, East Boothbay, ME,
USA. Common Chlorella species collected in Baton Rouge,
Louisiana, USA was also cultivated. All species were initially
grown indoors in triplicate 1 L flasks in an incubation
chamber at 25°C ± 2°C with a 12 h photoperiod
illuminated to 500 μmol photons/m2/s with fluorescent
lights. Guillard’s (F/2) marine water enrichment solution
(Sigma-Aldrich, Cat# G0154) was used as a cultural
media. For T. weissflogii, a marine species, Instant Ocean™
was used bring the salinity to 35 ppt. After one week, cultures
were moved outdoors into 55 L vessels and grown
for two additional weeks. Culture density was monitored
at 8 h intervals and optimum harvest time was determined
after two successive “no growth” biomass measurement
recordings. The cultures were centrifuged at 3,000 rpm to
concentrate the solids content to approximately 2% ds,
and then further concentrated to 10% ds by centrifuging
at 7,000 rpm for 10 min. Harvested algal biomass paste
was dried on aluminum weigh pans in a forced-air oven at
55°C for 48 h until no further weight loss was measured.
Since the study goal is to estimate feed supplement value
of algae byproduct, the de-oiling process was applied to
dried algae simulating the algal residue utilization after
biodiesel extraction. Oil was extracted from the dried algal
biomass using a SoxTec 2050 (FOSS, Eden Prairie, MN,
USA) with hexane (99.9% HPLC grade) as the solvent for
a 12 h reflux time. Residual solvent in biomass was evaporated
under a laminar flow hood for 48 h to leave de-oiled
algal residue.
Analysis of crude protein (CP), neutral detergent fiber
(NDF), and mineral in samples
De-oiled algae samples, commercially available soybean
meal, and alfalfa hay were ground through a 1-mm
screen and analyzed for Kjeldahl N and P in an automated
colorimetric assay adapted for flow-injection
analyzer (QuickChem 8000 FIA, Lachat Instruments,
Milwaukee, WI, USA) according to [10] procedures.
The CP in samples was calculated as total N × 6.25 and
NDF was determined with an Ankom Model 200 fiber
analyzer (Ankom Technology, Macedon, NY, USA) using
a sodium sulphite procedure [11]. Mineral concentration
was determined by flame atomic absorption spectrophotometry
(Perkin-Elmer Analyst 300, Norwalk, CT, USA)
after dry ashing at 500°C overnight in porcelain crucibles.
Determination of coefficient for in vitro fermentation
gas production
The protocol used in this research was approved by the
Louisiana State University Agricultural Center Protocol
for Animal Care and Use Committee (IACUC Approval #
A2012-14). The rumen fluid was collected from a cannulated
Holstein heifer fed mixed alfalfa hay and grass hay.
Quadruplicate 0.50-g samples were analyzed for in vitro
fermentation gas analysis according to [12]. The whole incubation
was processed at 39°C, and gas readings for each
incubation bottle were recorded at 30 min intervals using
Ankom Gas Module (Ankom Technology, Macedon, NY,
USA). Rate and extent of fermentation gas production
were determined for each sample by fitting the gas production
data to the dual pool logistic equation [13]:
V ¼ VF1ð1 þ expð2 þ 4 μm1=VF1  ðλ1−tÞÞÞ−1
þ VF2 1 þ exp 2 þ 4 μm2=VF2 ð ð  ðλ2−tÞÞÞ−1
where V is the amount of gas production at time t, and
VF1 and VF2 are the final gas production volumes corresponding
to complete substrate digestion for a rapidly fermenting
pool and a slowly fermenting pool, respectively.
μm1 and μm2 are the points of inflection of the gas curve
for the two pools, respectively. λ1 and λ2 are the lag times
of the two pools.
Statistical analysis
Data for various algal residues were analyzed using the
Proc Glimmix of SAS version 9.2 [14]. Differences between
least square means were tested using Satterthwaite
approximation for the denominator degrees of freedom as
an option. Quadruplicate laboratory analyses were conducted
for in vitro gas production analysis. Four runs of
gas measurements within variation less than ± 5% at
72 h incubation were used for the analysis. Data fitting a
non-linear model were analyzed using Proc NLIN of
SAS [14], which was developed by Dr. P. J. Weimer
(personal communication).
Results and discussion
Crude protein in de-oiled algal residue

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วิธีการเตรียมความพร้อมของสาหร่ายที่เหลือเดอทาน้ำมันกลุ่มตัวอย่างสาหร่ายดังต่อไปนี้ที่ได้รับในรูปแบบบริสุทธิ์จากมหาวิทยาลัยเท็กซัสของวัฒนธรรมการเก็บสาหร่าย(UTEX) ออสติน, เท็กซัส, สหรัฐอเมริกา: เอส capricornutum, Scenedesmus SP และ S. dimorphus Thalassiosira weissflogii, ไดอะตอมที่ได้รับจากProvasoli-Guillard ศูนย์แห่งชาติทางทะเลสาหร่ายและmicrobiota ตะวันออก Boothbay, ME, สหรัฐอเมริกา สายพันธุ์ Chlorella ทั่วไปเก็บใน Baton Rouge, ลุยเซียนาสหรัฐอเมริกานอกจากนี้ยังได้รับการปลูกฝัง ทุกสายพันธุ์ครั้งแรกที่ปลูกในบ้านเพิ่มขึ้นสามเท่าใน 1 ขวดลิตรในบ่มในห้องที่อุณหภูมิ25 องศาเซลเซียส± 2 องศาเซลเซียสที่มีแสง 12 ชั่วโมงสว่างถึง500 ไมโครโมลโฟตอน / m2 / s พร้อมด้วยเรืองแสงไฟ Guillard ของ (F / 2) การเพิ่มคุณค่าการแก้ปัญหาน้ำทะเล(Sigma-Aldrich แมว # G0154) ถูกใช้เป็นทางวัฒนธรรมสื่อ สำหรับที weissflogii ชนิดทะเลทันทีมหาสมุทร™ถูกใช้นำความเค็ม35 พีพีทีไป หลังจากหนึ่งสัปดาห์วัฒนธรรมที่ถูกย้ายนอกเข้าไปในเรือ 55 L และเติบโตขึ้นเป็นเวลาสองสัปดาห์เพิ่มเติม ความหนาแน่นของวัฒนธรรมได้รับการตรวจสอบในช่วงเวลา 8 ชั่วโมงและเวลาการเก็บเกี่ยวที่เหมาะสมถูกกำหนดหลังจากที่สองต่อเนื่อง"ไม่เจริญเติบโต" วัดชีวมวลบันทึก วัฒนธรรมที่ถูกหมุนเหวี่ยงที่ 3,000 รอบต่อนาทีเพื่อมุ่งเน้นเนื้อหาของแข็งประมาณ2% ds, และจากนั้นความเข้มข้นต่อไปถึง 10% โดย ds เหวี่ยงที่7,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 10 นาที ชีวมวลสาหร่ายเก็บเกี่ยววางแห้งอลูมิเนียมน้ำหนักกระทะในเตาอบบังคับอากาศที่55 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 48 ชั่วโมงจนกว่าจะไม่มีการสูญเสียน้ำหนักต่อไปวัด. เนื่องจากเป้าหมายการศึกษาคือการประเมินมูลค่าผลิตภัณฑ์เสริมอาหารของพลอยสาหร่ายกระบวนการ de-เอาอกเอาใจ ถูกนำไปใช้สาหร่ายแห้งจำลองการใช้สาหร่ายที่เหลือหลังจากการสกัดไบโอดีเซล น้ำมันสกัดจากสาหร่ายแห้งชีวมวลใช้ SoxTec 2050 (ฟอสส์, Eden Prairie, MN, USA) กับเฮกเซน (99.9% เกรด HPLC) เป็นตัวทำละลายสำหรับ12 ชั่วโมงเวลากรดไหลย้อน ตัวทำละลายที่เหลือในชีวมวลได้รับการระเหยภายใต้เครื่องดูดควันไหลเป็นเวลา 48 ชั่วโมงที่จะออกเดทาน้ำมันตกค้างสาหร่าย. การวิเคราะห์โปรตีน (CP) เส้นใยผงซักฟอกที่เป็นกลาง(NDF) และแร่ธาตุในตัวอย่างDe ทาน้ำมันตัวอย่างสาหร่ายถั่วเหลืองใช้ได้ในเชิงพาณิชย์อาหารและหญ้าชนิตหญ้าแห้งมาบดผ่าน 1 มิลลิเมตรหน้าจอและวิเคราะห์Kjeldahl ไนโตรเจนและฟอสฟอรัสในอัตโนมัติทดสอบสีเหมาะสำหรับการไหลฉีดวิเคราะห์(QuickChem 8000 FIA, LACHAT เครื่องมือ, Milwaukee, WI, สหรัฐอเมริกา) ตาม [10] ขั้นตอน. ซีพีในตัวอย่างที่คำนวณได้เป็นปริมาณไนโตรเจนทั้งหมด× 6.25 และNDF ถูกกำหนดด้วย Ankom รุ่น 200 เส้นใยวิเคราะห์(Ankom เทคโนโลยีมาซีโดเนีย, นิวยอร์ก, สหรัฐอเมริกา) โดยใช้ขั้นตอนโซเดียมซัลไฟต์[11] ความเข้มข้นของแร่ถูกกำหนดโดยการดูดซึมอะตอมเปลวไฟ spectrophotometry (นักวิเคราะห์เพอร์กินเอลเมอ 300, วอล์ค, CT, USA) หลังจาก ashing แห้งที่ 500 ° C ค้างคืนในถ้วยพอร์ซเลน. การกำหนดค่าสัมประสิทธิ์สำหรับในหลอดทดลองหมักผลิตก๊าซโปรโตคอลที่ใช้ในการวิจัยครั้งนี้ได้รับอนุมัติจากมหาวิทยาลัยแห่งรัฐหลุยเซียพิธีสารศูนย์การเกษตรสำหรับการดูแลสัตว์และคณะกรรมการการใช้งาน(IACUC อนุมัติ # A2012-14) ของเหลวในกระเพาะรูเมนที่ถูกเก็บรวบรวมจาก cannulated วัวสาวโฮเลี้ยงหญ้าแห้งหญ้าชนิตผสมและหญ้าแห้งหญ้า. quadruplicate ตัวอย่าง 0.50 กรัมมาวิเคราะห์ในห้องปฏิบัติการวิเคราะห์ก๊าซหมักตาม[12] บ่มทั้งได้รับการประมวลผลที่ 39 องศาเซลเซียสและการอ่านก๊าซสำหรับแต่ละขวดบ่มถูกบันทึกไว้ณ วันที่ 30 ช่วงเวลานาทีใช้Ankom ก๊าซ Module (Ankom เทคโนโลยีมาซีโดเนีย, นิวยอร์ก, สหรัฐอเมริกา) อัตราและขอบเขตของการผลิตก๊าซหมักได้รับการพิจารณาสำหรับแต่ละตัวอย่างโดยการปรับการผลิตก๊าซข้อมูลไปยังสระว่ายน้ำคู่สมการโลจิสติก[13]: V ¼VF1ð1þexpð2ที่ 4 μm1 = VF1? ðλ1-tÞÞÞ-1 þ VF2 1 þประสบการณ์ 2 ที่ 4 μm2 = VF2 ð D? ðλ2-tÞÞÞ-1 ที่ V เป็นจำนวนเงินของการผลิตก๊าซที่เวลา t และVF1 และ VF2 เป็นปริมาณการผลิตก๊าซสุดท้ายที่สอดคล้องกันที่จะเสร็จสิ้นการย่อยสารตั้งต้นสำหรับการหมักอย่างรวดเร็วสระว่ายน้ำและสระว่ายช้าหมักตามลำดับ. μm1และμm2เป็น จุดของโรคติดเชื้อของเส้นโค้งก๊าซสำหรับสองสระว่ายน้ำตามลำดับ λ1และλ2เป็นเวลาล่าช้าของทั้งสองสระว่ายน้ำ. การวิเคราะห์ทางสถิติข้อมูลสำหรับการตกค้างสาหร่ายต่างๆถูกนำมาวิเคราะห์โดยใช้พรGlimmix รุ่น 9.2 เอสเอ [14] ความแตกต่างระหว่างวิธีการอย่างน้อยตารางได้มีการทดสอบการใช้ Satterthwaite ประมาณสำหรับองศาส่วนของเสรีภาพเป็นตัวเลือก การวิเคราะห์ในห้องปฏิบัติการ quadruplicate ได้ดำเนินการสำหรับในหลอดทดลองการวิเคราะห์การผลิตก๊าซ สี่วิ่งของการตรวจวัดก๊าซที่อยู่ในรูปแบบที่น้อยกว่า± 5% ใน 72 ชั่วโมงบ่มถูกนำมาใช้ในการวิเคราะห์ กระชับข้อมูลรูปแบบไม่ใช่เชิงเส้นได้รับการวิเคราะห์โดยใช้พร NLIN ของเอสเอ[14] ซึ่งได้รับการพัฒนาโดยดร. PJ Weimer (การสื่อสารส่วนบุคคล). ผลและการอภิปรายโปรตีนตกค้างในสาหร่ายเดอทาน้ำมัน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วิธีการเตรียม เดอ น้ำมันสาหร่าย
กาก
ต่อไปนี้สาหร่ายจำนวนได้ในรูปแบบบริสุทธิ์
จากมหาวิทยาลัยเท็กซัสวัฒนธรรมคอลเลกชันของสาหร่าย
( utex Austin , TX , USA ) : S . capricornutum ซีนเดสมัส
, sp . และ S . dimorphus . thalassiosira weissflogii , ไดอะตอม
ได้จาก provasoli guillard แห่งชาติศูนย์
สาหร่ายทะเลและไมโครไบโ ้า ตะวันออก boothbay ผม
.รวบรวมสายพันธุ์สาหร่ายที่พบในแบตันรูช , หลุยเซียน่า สหรัฐอเมริกายัง
, เพาะปลูก ชนิดเริ่มแรก
โตในบ้านทั้งสามใบ 1 ขวดในการบ่มที่อุณหภูมิ 25 ° C
ห้อง± 2 องศา C ต่อช่วงแสง 12 H
สว่าง 500 μ mol โฟตอน / m2 / s พร้อมด้วยไฟเรืองแสง

guillard ( F / 2 ) น้ำทะเลเสริมโซลูชั่น
( ซิกม่า Aldrich แมว# g0154 ) ถูกใช้เป็นวัฒนธรรม
สื่อ สำหรับ ต.weissflogii , ทะเลชนิด
มหาสมุทร™ทันทีใช้เอาความเค็ม 30 ส่วนในพัน หลังจากหนึ่งสัปดาห์วัฒนธรรม
ย้ายกลางแจ้งเป็น 55 ลิตรภาชนะปลูก
สำหรับอีกสองสัปดาห์ ความหนาแน่นของวัฒนธรรมการ
8 H และช่วงเวลาเก็บเกี่ยวที่เหมาะสม คือ มุ่งมั่น
หลังจากที่สองต่อเนื่อง " ไม่โต " วัด
3 บันทึก วัฒนธรรมเป็นระดับที่ 3 , 000 รอบต่อนาที

มุ่งของแข็งประมาณร้อยละ 2 DS
แล้วต่อไปเข้มข้น 10 % DS โดยวรรณนา
7 , 000 รอบต่อนาที เป็นเวลา 10 นาทีแล้วเก็บเกี่ยวสาหร่ายชีวมวลแห้งวางในกระทะอลูมิเนียม
ชั่งในอากาศแบบบังคับเตาอบที่อุณหภูมิ 55 องศา C
48 ชั่วโมงจนไม่มีการสูญเสียน้ำหนักเพิ่มเติมคือวัด .
ตั้งแต่การศึกษา เป้าหมายคือการประมาณค่า
อาหารเสริมสาหร่าย byproduct de เอาอกเอาใจกระบวนการประยุกต์

การใช้สาหร่าย สาหร่ายแห้งผิวที่ตกค้างหลังจาก
สกัดไบโอดีเซล น้ำมันสกัดจากสาหร่ายแห้ง
ชีวมวลโดยใช้ soxtec 2050 ( ฟอส , Eden Prairie , MN ,
USA ) เฮกเซน ( 99.9% เกรด HPLC ) เป็นตัวทำละลายสำหรับ
12 H ย้อนเวลา ตกค้างในชีวมวลเป็นตัวทำละลายระเหย
ภายใต้เครื่องดูดควันสำหรับการไหลแบบราบเรียบ 48 H ไปเดอทา

ว่ากาก การวิเคราะห์โปรตีน ( CP )ผงซักฟอก
เป็นกลางไฟเบอร์ ( NDF ) และแร่ตัวอย่าง
de น้ำมันตัวอย่างสาหร่ายในเชิงพาณิชย์ของถั่วเหลือง
อาหารและหญ้าแห้งมาบดผ่านจอ และวิเคราะห์ 1-mm
0 N และ P ในการทดสอบอัตโนมัติ
7.4 เหมาะสำหรับวิเคราะห์การไหลฉีด
( quickchem 8000 FIA lachat
มิลวอกี , เครื่องมือ , ใช่ , USA ) ตาม [ 10 ]
ขั้นตอนที่CP ในตัวอย่างคำนวณรวม n × 6.25 และ
NDF ถูกกำหนดด้วยรูปแบบ ankom 200 ไฟเบอร์
วิเคราะห์ ( ankom เทคโนโลยี , มาซิโดเนีย , NY , USA ) โดยใช้โซเดียมซัลไฟท์
ขั้นตอน [ 11 ]
ความเข้มข้นแร่ถูกกำหนดจาก Flame Atomic absorption ( เพอร์กินเอลเมอร์วิธี
นักวิเคราะห์ 300 , Norwalk , CT , สหรัฐอเมริกา )
หลังจากวิมเบิลดันที่ 500 ° C ในชั่วข้ามคืนในเครื่องเคลือบดินเผา crucibles .
การหาค่าสัมประสิทธิ์สำหรับการเพาะหมัก

ขั้นตอนการผลิตก๊าซที่ใช้ในงานวิจัยนี้ ได้รับอนุมัติจากมหาวิทยาลัยหลุยเซียน่า ( ศูนย์เกษตร

ดูแลสัตว์และใช้คณะกรรมการ ( iacuc อนุมัติ#
a2012-14 ) อาหารเหลวถูกรวบรวมจาก cannulated
โฮลชไตน์วัวเลี้ยงแห้งผสมและหญ้า Alfalfa Hay
ประกอบด้วยสี่ส่วน 0ตัวอย่าง 50-g วิเคราะห์ในหลอดทดลอง
การหมักก๊าซวิเคราะห์ตาม [ 12 ]
บ่มทั้งหมดถูกประมวลผลที่ 39 ° C และก๊าซอ่านแต่ละ
1 ขวดที่ถูกบันทึกไว้ในช่วงเวลา 30 นาที ใช้แก๊ส ankom
โมดูล ( ankom เทคโนโลยี , มาซิโดเนีย , NY ,
สหรัฐอเมริกา ) อัตราและขอบเขตของการหมักการผลิตก๊าซ
ถูกกำหนดสำหรับแต่ละตัวอย่างโดย
กระชับผลิตก๊าซธรรมชาติข้อมูล ระ สองสมการลอจิสติก [ 13 ] :
v ¼ vf1 ð 1 þ EXP ð 2 þ 4 μ M1 = vf1  ðλ 1 − 1
t ÞÞÞ−þ vf2 1 þ EXP 2 þ 4 μ M2 = vf2 ðð  ðλ 2 − 1
t ÞÞÞ−เมื่อ V คือปริมาณของการผลิต ก๊าซที่เวลา t ,
vf1 vf2 และมีปริมาณการผลิตก๊าซสุดท้ายเหมือนกัน
เพื่อให้การย่อยอาหารวัสดุหมักอย่างรวดเร็วและค่อยๆว่ายน้ําหมัก

)μ M1 และ M2 เป็นμจุดโรคติดเชื้อของเส้นโค้งแก๊ส
สำหรับประเภทสอง ตามลำดับ λ 1 และλ 2 มีความล่าช้าครั้ง
ของประเภทสอง การวิเคราะห์ข้อมูลทางสถิติสำหรับ

กากสาหร่ายต่าง ๆโดยใช้
proc SAS glimmix ของเวอร์ชั่น 9.2 [ 14 ] ความแตกต่างระหว่าง
Least Square หมายถึงจำนวน satterthwaite
ประมาณสำหรับส่วนที่องศาอิสระเป็น
ตัวเลือกการวิเคราะห์ทางห้องปฏิบัติการ ประกอบด้วยสี่ส่วนการทดลอง
สำหรับในการวิเคราะห์การผลิตก๊าซหลอด สี่วิ่ง
การวัดก๊าซภายในการเปลี่ยนแปลงน้อยกว่า 5% ที่±
72 ชั่วโมงบ่มถูกใช้เพื่อการวิเคราะห์ ข้อมูลกระชับ
ไม่เชิงเส้นแบบ วิเคราะห์ข้อมูลโดยใช้ nlin proc SAS ของ
[ 14 ] ซึ่งพัฒนาโดย ดร. พี. เจ. ไวเมอร์
( การสื่อสารส่วนบุคคลและการสนทนา

ผล )โปรตีนในกากน้ำมันสาหร่าย เดอ