superfamily regions using the Prime

superfamily regions using the Primer Express 5.0 Software
(AuGCT, Beijing, China) (Li et al. 2012). The standard
curve was maintained at approximately -3.4, and the
efficiencies of the amplification were [90 % using the
cDNAs of Malus xiaojinensis to ensure every primer pairs
were suit for real-time PCR. b-Actin was used as the reference
gene (Kru¨kcu¨oglu et al. 2007). The primer sets used
were listed in Table 1.
From 500 mg of leaf sample, microRNA was extracted
by using RNAiso for Small RNA kit (9753Q, Takara,
Dalian, China) following the manufacturer’s instruction. The
integrity of microRNA was monitored by electrophoresis on
3 % agarose gels and the A260/A280 ratio was performed in
spectrophotometer (Thermo Scientific, Nanodrop 2000). For
reverse transcription, 1.5 lg (5 ll) microRNA extract in
7 ll of DEPC water plus 1 ll of dNTP (10 mmol/l) and 1 ll
stem-loop primer was incubated at 65 C for 5 min. Then
4 ll of buffer (59) (Takara, Dalian, China), 1 ll RNasin
and 1 ll AMV (5U/ll) (Takara, Dalian, China) were added.
The RT-primer sequences of miR156 and 5.8 s rRNA were
CGCGAGCTCAGAATTAATACGACTCACTATACGCG
GTGCTC and CAACTTGCGTTCAAAGACTCG, respectively.
The cycling conditions consisted of an initial
denaturation step at 16 C for 30 min, followed by 60
cycles at 20 C for 30 s, 42 C for 30 s, and 50 C for 1 s.
Thereafter, a final elongation step was performed at 85 C
for 10 min. For 5.8 s rRNA, the stem-loop primer was
replaced by RT primer of 5.8 s rRNA. The quantitative
measurement of the gene expression was performed using
the cDNA samples with an AB7500 Real-time PCR System
and the SYBR Green fluorescence dye (FP401, TianGen,
Beijing, China) (Li et al. 2012). The miR156 and 5.8 s
rRNA primer sets used were listed in Table 1.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ภูมิภาค superfamily ใช้รองพื้น Express 5.0 ซอฟต์แวร์(AuGCT ปักกิ่ง จีน) (Li et al. 2012) มาตรฐานเส้นโค้งถูกเก็บรักษาไว้ที่ประมาณ -3.4 และประสิทธิภาพของการขยายสัญญาณได้ [90% ใช้การcDNAs ของ xiaojinensis Malus ให้ทุกคู่ไพรเมอร์มีชุดสำหรับ PCR แบบเรียลไทม์ แอกติน b ถูกใช้เป็นการอ้างอิงยีน (Kru¨kcu¨oglu et al. 2007) ชุดรองพื้นจะใช้แสดงไว้ในตารางที่ 1จากตัวอย่างใบ 500 มิลลิกรัม microRNA ถูกแยกโดยใช้ RNAiso สำหรับชุดเล็ก RNA (9753Q, Takaraต้าเหลียน จีน) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต การความสมบูรณ์ของ microRNA ถูกตรวจสอบ โดยอิในเจ 3% agarose และสม A260/A280 ทำในspectrophotometer (วิทยาศาสตร์เทอร์โม Nanodrop 2000) สำหรับกลับถอด 1.5 lg (5 ll) microRNA แยกใน7 ll DEPC น้ำบวก 1 ll dNTP (10 mmol/l) และ 1 llรองพื้นวนรอบลำต้นไม่ได้รับการกกที่ 65 C 5 นาทีแล้ว4 จะบัฟเฟอร์ (59) (Takara ต้าเหลียน จีน), 1 ll RNasin1 เพิ่มจะเอ็ม (5U/ll) (Takara ต้าเหลียน จีน)ลำดับ RT-รองพื้นของ miR156 และ 5.8 s rRNA ได้CGCGAGCTCAGAATTAATACGACTCACTATACGCGGTGCTC และ CAACTTGCGTTCAAAGACTCG ตามลำดับประกอบด้วยเงื่อนไขการขี่จักรยานมีการเริ่มต้นขั้นตอน denaturation ที่ 16 C 30 นาที ตาม ด้วย 60รอบที่ 20 C 30 s, 42 C สำหรับ 30 s, 50 C 1 sหลังจากนั้น ทำเป็นขั้นตอนสุดท้ายยืดที่ 85 C10 นาที สำหรับ 5.8 s rRNA รองพื้นวนรอบลำต้นได้แทนรองพื้น RT ของ 5.8 s rRNA การเชิงปริมาณดำเนินการประเมินการแสดงออกของยีนโดยใช้ตัวอย่างของ cDNA ระบบ PCR แบบเรียลไทม์ AB7500และย้อมฟลูออเรสเซนต์ SYBR Green (FP401, TianGenปักกิ่ง จีน) (Li et al. 2012) MiR156 การและ 5.8 sชุดรองพื้น rRNA ที่ใช้แสดงไว้ในตารางที่ 1

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ภูมิภาค superfamily ใช้ไพรเมอร์เอ็กซ์เพรส 5.0 ซอฟแวร์
(AuGCT, ปักกิ่ง, จีน) (Li et al. 2012) มาตรฐาน
โค้งถูกเก็บรักษาไว้ที่ประมาณ -3.4 และ
ประสิทธิภาพของการขยายได้ [90% โดยใช้
cDNAs ของ Malus xiaojinensis เพื่อให้แน่ใจว่าทุกคู่ไพรเมอร์
เป็นชุดสูทสำหรับ Real-time PCR B-โปรตีนถูกใช้เป็นข้อมูลอ้างอิง
ยีน (Kru¨kcu¨oglu et al. 2007) ชุดไพรเมอร์ที่ใช้
มีการระบุไว้ในตารางที่ 1
จาก 500 mg ของกลุ่มตัวอย่างใบ microRNA ถูกสกัด
โดยใช้ RNAiso สำหรับชุด RNA ขนาดเล็ก (9753Q, Takara,
ต้าเหลียนประเทศจีน) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต
ความสมบูรณ์ของ microRNA ได้รับการตรวจสอบโดย electrophoresis บน
3% agarose เจลและอัตรา A260 / A280 ได้ดำเนินการใน
spectrophotometer (Thermo Scientific, Nanodrop 2000) สำหรับการ
ถอดรหัสแบบย้อนกลับ 1.5 LG (5 LL) สารสกัดจาก microRNA ใน
7 LL น้ำ DEPC บวก 1 LL ของ dNTP (10 มิลลิโมล / ลิตร) และ 1 จะ
ก้านวงไพรเมอร์ได้รับการบ่มที่อุณหภูมิ 65 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาที จากนั้น
4 LL ของบัฟเฟอร์ (59) (Takara ต้าเหลียนประเทศจีน) 1 LL RNasin
และ 1 LL AMV (5U / LL) (Takara ต้าเหลียนประเทศจีน) ถูกเพิ่ม.
ลำดับ RT-ไพรเมอร์ของ miR156 และ 5.8 s rRNA อยู่
CGCGAGCTCAGAATTAATACGACTCACTATACGCG
GTGCTC และ CAACTTGCGTTCAAAGACTCG ตามลำดับ.
เงื่อนไขการขี่จักรยานประกอบด้วยเริ่มต้น
ขั้นตอน denaturation ที่ 16 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 นาทีตามด้วย 60
รอบที่ 20 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 วินาที 42 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 วินาทีและ 50? C เป็นเวลา 1 วินาที .
หลังจากนั้นเป็นขั้นตอนการยืดตัวสุดท้ายที่ได้ดำเนินการที่ 85 องศาเซลเซียส
เป็นเวลา 10 นาที สำหรับ 5.8 s rRNA, ไพรเมอร์ก้านวงถูก
แทนที่ด้วยไพรเมอร์ RT 5.8 s rRNA ปริมาณ
การวัดการแสดงออกของยีนที่ถูกดำเนินการโดยใช้
กลุ่มตัวอย่างที่มียีน AB7500 Real-time PCR ระบบ
และ SYBR สีเขียวเรืองแสงสีย้อม (FP401, TianGen,
ปักกิ่ง, จีน) (Li et al. 2012) miR156 และ 5.8 s
ชุด rRNA ไพรเมอร์ที่ใช้มีการระบุไว้ในตารางที่ 1