Mitotic Chromosome StabilityMitotic

Mitotic Chromosome Stability
Mitotic chromosome transmission is sensitive to the stoichiometry
of the histone gene loci. Overexpression of either
an H3-H4 or H2A-H2B gene set from high copy number
plasmids, or from a strong inducible promoter, can increase
the frequency of chromosome loss by an order of magnitude
(31). To test the effect of the H3-H4 deletions on chromosome
stability, we used the color colony assay of Hieter et al. (23)











using the plasmid pAB9SEG, a CEN4-ARS derivative of
YRpl4 (3). When a single copy of pAB9SEG is transformed
into diploid cells homozygous for the ochre allele ade2-101
the color phenotype of the colonies is pink on low adenine
medium. The loss of the plasmid during mitosis can be
scored as a pink/red half-sectored colony, the result of a 1:0
plasmid segregation event. Replication of the plasmid followed
by nondisjunction gives a white/red half-sectored
colony resulting from a 2:0 event. The plasmid pAB9SEG
was used to transform each of the diploid strains and several
individualtransformants were selected and tested for the stability
of the plasmid minichromosome. The results of these
assays are present in Table V.
The wild-type diploid MSY167 and the copy-I deletion
diploid MSY164 transformed normally and gave similar colony
growth and morphology. Independent transformants
were isolated and assayed for plasmid stability. When plated
on low adenine indicator plates,

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

โครโมโซม mitotic เสถียรภาพส่ง mitotic โครโมโซมเป็นการ stoichiometryของยีน loci ฮิสโตน Overexpression ของอย่างใดอย่างหนึ่งยีนมี H3 H4 หรือ H2A H2B จากจำนวนสำเนาสูงplasmids หรือจากโปรโมเตอร์ inducible ที่แข็ง สามารถเพิ่มความถี่ของการสูญเสียโครโมโซมโดยมีความ(31) . การทดสอบผลของการลบ H3 H4 บนโครโมโซมความมั่นคง เราใช้ทดสอบอาณานิคมสีของ Hieter et al. (23)ใช้ plasmid pAB9SEG, CEN4 ARS อนุพันธ์ของYRpl4 (3) เมื่อแปลงสำเนา pAB9SEGเป็นพฤติกรรมมักเซลล์หลักสำหรับอัลลีเหลือง ade2-101กนินสีของอาณานิคมเป็นสีชมพูบนต่ำคือกลาง การสูญเสียของ plasmid ระหว่างเซลล์ได้ทำเป็นสีชมพู/แดง sectored ครึ่งอาณานิคม ผล 1:0เหตุการณ์แบ่งแยก plasmid การจำลองแบบของ plasmid ตามโดย nondisjunction ให้ขาว/แดงครึ่ง sectoredอาณานิคมที่เป็นผลมาจากเหตุการณ์ 2:0 Plasmid pAB9SEGใช้ในการเปลี่ยนแปลงของสายพันธุ์พฤติกรรมมักและหลายindividualtransformants เลือก และทดสอบความเสถียรของ plasmid minichromosome ผลลัพธ์เหล่านี้assays อยู่ในตาราง VMSY167 พฤติกรรมมักชนิดป่าและการคัดลอก-ฉันลบMSY164 พฤติกรรมมักเปลี่ยนตามปกติ และให้คล้ายอาณานิคมเจริญเติบโตและสัณฐานวิทยา Transformants อิสระมี plasmid แยก และ assayed สำหรับเสถียรภาพ เมื่อชุบบนแผ่นตัวบ่งชี้คือต่ำ < % 20 ของอาณานิคมสีแดงทั้งหมด แสดงส่วนใหญ่ของเซลล์รักษาสำเนาไว้ของ pAB9SEG ที่ทำการชุบ ความถี่ halfsectored1:0 และ 2:0 อาณานิคมจากนั้นได้มา ด้วยความเคารพการอาณานิคมชมพู และ sectored ทั้งหมด ใน MSY167 ป่าชนิดเป็นความถี่ของการสูญเสียโครโมโซม, ~ 2% และความถี่aberrant แบ่งแยกถูก ~0.2% รุ่นนี้ เหล่านี้ผลลัพธ์คล้ายกับที่รายงานก่อนหน้านี้ (3, 23) การสำเนา-ผมสายพันธุ์ลบแสดงให้เห็นว่าเพิ่มขึ้นเพียงเล็กน้อยในความถี่สูญเสียโครโมโซม (1:0 เหตุการณ์) ใกล้ 3% ต่อการสร้างและความถี่ต่ำของ segregations 2:0ความเครียดการลบสำเนาที่สองมีข้อบกพร่องมากใน mitotic minichromosome ส่ง Plasmid pAB-9SEG แปลง MSY165 พฤติกรรมมักที่ความถี่ปกติแต่อาณานิคมเปลี่ยนขนาดเล็ก และเติบโตช้าลงกว่าป่าชนิดหรือคัดลอก-ฉันลบ transformantsและให้มีส่วนผสมของอาณานิคมขนาดคล้ายกับบกพร่อง ARSอนุพันธ์ของ YRpl4CEN4 (3) Transformants อิสระ 5มี plasmid แยก และ assayed สำหรับเสถียรภาพ เมื่อปลูกบนแผ่นตัวบ่งชี้คือต่ำกว่า 75% ของทั้งหมดอาณานิคมถูกสีแดงหมด คะแนนเป็นเศษส่วนของจำนวนสีชมพู และ sectored อาณานิคม ความถี่ของโครโมโซมขาดทุนใน transformants เหล่านี้แตกต่างจาก 19 65% ต่อรุ่นนำมารวมกันผลเหล่านี้ระบุความถี่สูงการสูญเสียของ plasmid ใน H3 II สำเนา-H4 ลบพฤติกรรมมักดังนั้น การทดลองเหล่านี้สนับสนุนรูปแบบซึ่งอัตราการของหลัก histones เป็นสิ่งสำคัญสำหรับโครโมโซมปกติdynamics (31)โครโมโซม mitotic เสถียรภาพส่ง mitotic โครโมโซมเป็นการ stoichiometryของยีน loci ฮิสโตน Overexpression ของอย่างใดอย่างหนึ่งยีนมี H3 H4 หรือ H2A H2B จากจำนวนสำเนาสูงplasmids หรือจากโปรโมเตอร์ inducible ที่แข็ง สามารถเพิ่มความถี่ของการสูญเสียโครโมโซมโดยมีความ(31) . การทดสอบผลของการลบ H3 H4 บนโครโมโซมความมั่นคง เราใช้ทดสอบอาณานิคมสีของ Hieter et al. (23)ใช้ plasmid pAB9SEG, CEN4 ARS อนุพันธ์ของYRpl4 (3) เมื่อแปลงสำเนา pAB9SEGเป็นพฤติกรรมมักเซลล์หลักสำหรับอัลลีเหลือง ade2-101กนินสีของอาณานิคมเป็นสีชมพูบนต่ำคือกลาง การสูญเสียของ plasmid ระหว่างเซลล์ได้ทำเป็นสีชมพู/แดง sectored ครึ่งอาณานิคม ผล 1:0เหตุการณ์แบ่งแยก plasmid การจำลองแบบของ plasmid ตามโดย nondisjunction ให้ขาว/แดงครึ่ง sectoredอาณานิคมที่เป็นผลมาจากเหตุการณ์ 2:0 Plasmid pAB9SEGใช้ในการเปลี่ยนแปลงของสายพันธุ์พฤติกรรมมักและหลายindividualtransformants เลือก และทดสอบความเสถียรของ plasmid minichromosome ผลลัพธ์เหล่านี้assays อยู่ในตาราง VMSY167 พฤติกรรมมักชนิดป่าและการคัดลอก-ฉันลบMSY164 พฤติกรรมมักเปลี่ยนตามปกติ และให้คล้ายอาณานิคมเจริญเติบโตและสัณฐานวิทยา Transformants อิสระมี plasmid แยก และ assayed สำหรับเสถียรภาพ เมื่อชุบบนแผ่นตัวบ่งชี้คือต่ำ < % 20 ของอาณานิคมสีแดงทั้งหมด แสดงส่วนใหญ่ของเซลล์รักษาสำเนาไว้ของ pAB9SEG ที่ทำการชุบ ความถี่ halfsectored1:0 และ 2:0 อาณานิคมจากนั้นได้มา ด้วยความเคารพการอาณานิคมชมพู และ sectored ทั้งหมด ใน MSY167 ป่าชนิดเป็นความถี่ของการสูญเสียโครโมโซม, ~ 2% และความถี่aberrant แบ่งแยกถูก ~0.2% รุ่นนี้ เหล่านี้ผลลัพธ์คล้ายกับที่รายงานก่อนหน้านี้ (3, 23) การสำเนา-ผมเครียดลบแสดงโหมดการ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ทิคส์โครโมโซมเสถียรภาพ
ทิคส์ส่งโครโมโซมมีความไวต่อปริมาณสารสัมพันธ์
ของตำแหน่งยีนสโตน แสดงออกอย่างใดอย่างหนึ่ง
H3-H4 หรือยีน H2A-H2B ตั้งจำนวนสำเนาสูง
พลาสมิดหรือจากผู้ก่อการ inducible แข็งแกร่งสามารถเพิ่ม
ความถี่ของการสูญเสียโครโมโซมโดยลำดับความสำคัญ
(31) เพื่อทดสอบผลกระทบของการลบ H3-H4 บนโครโมโซม
ความมั่นคงที่เราใช้ในการทดสอบสีอาณานิคมของ Hieter et al, (23) การใช้พลาสมิด pAB9SEG อนุพันธ์ CEN4-ARS ของYRpl4 (3) เมื่อสำเนาเดียวของ pAB9SEG จะเปลี่ยนเข้าสู่เซลล์ซ้ำ homozygous สำหรับอัลลีลสีเหลือง ade2-101 ฟีโนไทป์สีของอาณานิคมเป็นสีชมพูบน adenine ต่ำกลาง การสูญเสียของพลาสมิดระหว่างเซลล์สามารถทำแต้มเป็นสีชมพู / สีแดงอาณานิคมครึ่ง Sectored ผลของ 1: 0 เหตุการณ์แยกพลาสมิด การจำลองแบบของพลาสมิดที่ใช้โดย nondisjunction ให้สีขาว / สีแดงครึ่ง Sectored อาณานิคมเกิดจาก 2: 0 เหตุการณ์ พลาสมิด pAB9SEG ถูกใช้ในการเปลี่ยนแต่ละสายพันธุ์ซ้ำและอีกหลายindividualtransformants ได้รับการคัดเลือกและผ่านการทดสอบสำหรับความมั่นคงของ minichromosome พลาสมิด ผลของการเหล่านี้ชุดตรวจที่มีอยู่ในตารางโวลต์ชนิดป่า MSY167 ซ้ำและลบสำเนาฉันซ้ำ MSY164 เปลี่ยนได้ตามปกติและให้อาณานิคมที่คล้ายกันการเจริญเติบโตและลักษณะทางสัณฐานวิทยา transformants อิสระถูกแยกและ assayed เพื่อความมั่นคงพลาสมิด เมื่อชุบต่ำแผ่นตัวบ่งชี้ adenine, <20% ของอาณานิคมเป็นสีแดงทั้งหมดแสดงให้เห็นว่าส่วนใหญ่ของเซลล์สะสมสำเนาของ pAB9SEG ในเวลาของการชุบ ความถี่ของ halfsectored 1: 0 และ 2: 0 อาณานิคมนั้นให้คะแนนด้วยความเคารพเป็นสีชมพูทั้งหมดและอาณานิคม Sectored ในป่าชนิด MSY167 ความถี่ของการสูญเสียโครโมโซมเป็น ~ 2% และความถี่ของการแยกจากกันผิดปกติคือ ~ รุ่น 0.2% เหล่านี้ผลจะคล้ายกับที่รายงานก่อนหน้านี้ (3, 23) ความเครียดลบสำเนาฉันพบว่าเพิ่มขึ้นเล็กน้อยในความถี่ของการสูญเสียโครโมโซม (1: 0 เหตุการณ์) ใกล้ 3% ต่อรุ่นและความถี่ต่ำของ. 2: 0 segregations ความเครียดลบสำเนา-II มีข้อบกพร่องอย่างมากในทิคส์ ส่ง minichromosome พลาสมิด pAB- 9SEG เปลี่ยน MSY165 ซ้ำที่ความถี่ปกติแต่อาณานิคมเปลี่ยนมีขนาดเล็กและการเจริญเติบโตช้ากว่าชนิดป่าหรือสำเนา-I transformants ลบและให้มีส่วนผสมของโคโลนีขนาดคล้ายกับ ARS ข้อบกพร่องของอนุพันธ์ของ YRpl4CEN4 (3 ) ห้า transformants อิสระถูกแยกและ assayed เพื่อความมั่นคงพลาสมิด เมื่อปลูกในแผ่นต่ำบ่งชี้ adenine กว่า 75% ของทั้งหมดอาณานิคมแดงสมบูรณ์ คะแนนเป็นส่วนของการรวมสีชมพูและ Sectored อาณานิคมความถี่ของโครโมโซมขาดทุนใน transformants เหล่านี้แตกต่างกัน 19-65% ต่อรุ่น. ร่วมกันผลลัพธ์เหล่านี้บ่งบอกว่ามีความถี่สูงของการสูญเสียของพลาสมิดในสำเนา-II H3-H4 การลบซ้ำ. ดังนั้นการทดลองเหล่านี้สนับสนุนรูปแบบซึ่งในอัตราส่วนที่ของ histones หลักมีความสำคัญสำหรับโครโมโซมปกติDynamics (31). ทิคส์โครโมโซมเสถียรภาพทิคส์ส่งโครโมโซมมีความไวต่อปริมาณสารสัมพันธ์ของตำแหน่งยีนสโตน แสดงออกอย่างใดอย่างหนึ่งH3-H4 หรือยีน H2A-H2B ตั้งจำนวนสำเนาสูงพลาสมิดหรือจากผู้ก่อการ inducible แข็งแกร่งสามารถเพิ่มความถี่ของการสูญเสียโครโมโซมโดยลำดับความสำคัญ(31) เพื่อทดสอบผลกระทบของการลบ H3-H4 บนโครโมโซมความมั่นคงที่เราใช้ในการทดสอบสีอาณานิคมของ Hieter et al, (23) การใช้พลาสมิด pAB9SEG อนุพันธ์ CEN4-ARS ของYRpl4 (3) เมื่อสำเนาเดียวของ pAB9SEG จะเปลี่ยนเข้าสู่เซลล์ซ้ำ homozygous สำหรับอัลลีลสีเหลือง ade2-101 ฟีโนไทป์สีของอาณานิคมเป็นสีชมพูบน adenine ต่ำกลาง การสูญเสียของพลาสมิดระหว่างเซลล์สามารถทำแต้มเป็นสีชมพู / สีแดงอาณานิคมครึ่ง Sectored ผลของ 1: 0 เหตุการณ์แยกพลาสมิด การจำลองแบบของพลาสมิดที่ใช้โดย nondisjunction ให้สีขาว / สีแดงครึ่ง Sectored อาณานิคมเกิดจาก 2: 0 เหตุการณ์ พลาสมิด pAB9SEG ถูกใช้ในการเปลี่ยนแต่ละสายพันธุ์ซ้ำและอีกหลายindividualtransformants ได้รับการคัดเลือกและผ่านการทดสอบสำหรับความมั่นคงของ minichromosome พลาสมิด ผลของการเหล่านี้ชุดตรวจที่มีอยู่ในตารางโวลต์ชนิดป่า MSY167 ซ้ำและลบสำเนาฉันซ้ำ MSY164 เปลี่ยนได้ตามปกติและให้อาณานิคมที่คล้ายกันการเจริญเติบโตและลักษณะทางสัณฐานวิทยา transformants อิสระถูกแยกและ assayed เพื่อความมั่นคงพลาสมิด เมื่อชุบต่ำแผ่นตัวบ่งชี้ adenine, <20% ของอาณานิคมเป็นสีแดงทั้งหมดแสดงให้เห็นว่าส่วนใหญ่ของเซลล์สะสมสำเนาของ pAB9SEG ในเวลาของการชุบ ความถี่ของ halfsectored 1: 0 และ 2: 0 อาณานิคมนั้นให้คะแนนด้วยความเคารพเป็นสีชมพูทั้งหมดและอาณานิคม Sectored ในป่าชนิด MSY167 ความถี่ของการสูญเสียโครโมโซมเป็น ~ 2% และความถี่ของการแยกจากกันผิดปกติคือ ~ รุ่น 0.2% เหล่านี้ผลจะคล้ายกับที่รายงานก่อนหน้านี้ (3, 23) ความเครียดลบสำเนาฉันพบโหมด

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เสถียรภาพของเส้นใยส่งไวต่อสารเส้นใยโครโมโซมของฮิสโตนยีนตำแหน่ง . overexpression ของทั้งการ h3-h4 หรือยีน h2a-h2b ชุดคัดลอกตัวเลขสูงพลาสมิด หรือแข็งแรง inducible โปรโมเตอร์สามารถเพิ่มความถี่ของโครโมโซมสูญเสียโดยคำสั่งของขนาด( 31 ) เพื่อทดสอบผลของ h3-h4 ลบบนโครโมโซมความมั่นคง เราใช้สีในอาณานิคมของ hieter et al . ( 23 )การใช้ pab9seg พลาสมิด , cen4-ars อนุพันธ์ของyrpl4 ( 3 ) เมื่อสำเนาเดียวของ pab9seg เป็นแปลงเป็นเซลล์ดิพลอยด์ชม ade2-101 อัลลีลยีนสีที่มีในอาณานิคมเป็นสีชมพูและต่ำปานกลาง การสูญเสียของพลาสมิดในเซลล์ สามารถคะแนนเป็นสีชมพู / แดงครึ่ง sectored อาณานิคม , ผลของ 1 : 0เหตุการณ์แยกพลาสมิด การจำลองแบบของพลาสมิด ตามโดยนอนดิสจังชันให้ครึ่ง sectored สีขาว / แดงอาณานิคมที่เกิดจาก 2 : 0 เหตุการณ์ การ pab9seg พลาสมิดใช้แปลงของแต่ละสายพันธุ์ ชาวจีน และหลาย ๆindividualtransformants การคัดเลือกและทดสอบความมั่นคงของ minichromosome พลาสมิด ผลลัพธ์เหล่านี้พยายามอยู่ในโต๊ะ .ของการเกิด msy167 และการลบ copy-iเกิด msy164 เปลี่ยนตามปกติและให้อาณานิคมคล้ายคลึงกันการเจริญเติบโตและรูปร่าง . พลาสมิด อิสระแยกซีรั่มและเสถียรภาพพลาสมิด เมื่อชุบบนแผ่นตัวบ่งชี้และต่ำ < 20% ของอาณานิคมคือสีแดงทั้งหมด แสดงให้เห็นว่าส่วนใหญ่ของการคัดลอกเซลล์ของ pab9seg ในเวลาของการชุบ ความถี่ของ halfsectored1 : 0 คะแนน 2 : 0 และอาณานิคมแล้ว ด้วยความเคารพรวมสีชมพูและ sectored อาณานิคม ในส่วนของ msy167ความถี่ของโครโมโซมลดลง , ~ 2 % และความถี่ของปกติแยกเป็น ~ รุ่น 0.2% เหล่านี้ผลลัพธ์จะคล้ายกับผู้ที่รายงานก่อนหน้านี้ ( 3 , 23 ) ที่copy-i การลบความเครียดพบเพิ่มขึ้นเจียมเนื้อเจียมตัวในความถี่การสูญเสียของโครโมโซม ( 1 : 0 เหตุการณ์ ) ใกล้ 3% ต่อรุ่นและความถี่ต่ำของ 2 : 0 segregations .การลบสำเนา 2 สายพันธุ์มีความบกพร่องอย่างมากในการส่ง minichromosome เส้นใย . โดย pab พลาส -9seg เปลี่ยน msy165 ชาวจีนที่ความถี่ปกติแต่เปลี่ยนโคโลนีเล็กๆเติบโตกว่าของพลาสมิด copy-i การลบหรือและให้ส่วนผสมของอาณานิคมขนาดคล้ายกับ ARS บกพร่องอนุพันธ์ของ yrpl4cen4 ( 3 ) ห้า transformants อิสระแยกซีรั่มและเสถียรภาพพลาสมิด เมื่อที่ปลูกบนแผ่น ตัวบ่งชี้ และน้อย กว่า 75% ของทั้งหมดอาณานิคมเป็นสีแดงทั้งหมด คะแนนเป็นส่วนของทั้งหมดโคโลนีสีชมพูและ sectored ความถี่ของโครโมโซมการสูญเสียใน transformants เหล่านี้แตกต่างจาก 19 ถึง 65 % ต่อรุ่นที่ถ่ายด้วยกันผลลัพธ์เหล่านี้บ่งชี้ความถี่สูงการสูญเสียของพลาสมิดในสำเนา 2 h3-h4 การลบซ้ำ .ดังนั้นการทดลองนี้สนับสนุนรูปแบบซึ่งในอัตราส่วนหลักของฮิสโตนสําคัญ คือ โครโมโซมปกติพลศาสตร์ ( 31 )เสถียรภาพของเส้นใยส่งไวต่อสารเส้นใยโครโมโซมของฮิสโตนยีนตำแหน่ง . overexpression ของทั้งการ h3-h4 หรือยีน h2a-h2b ชุดคัดลอกตัวเลขสูงพลาสมิด หรือแข็งแรง inducible โปรโมเตอร์สามารถเพิ่มความถี่ของโครโมโซมสูญเสียโดยคำสั่งของขนาด( 31 ) เพื่อทดสอบผลของ h3-h4 ลบบนโครโมโซมความมั่นคง เราใช้สีในอาณานิคมของ hieter et al . ( 23 )การใช้ pab9seg พลาสมิด , cen4-ars อนุพันธ์ของyrpl4 ( 3 ) เมื่อสำเนาเดียวของ pab9seg เป็นแปลงเป็นเซลล์ดิพลอยด์ชม ade2-101 อัลลีลยีนสีที่มีในอาณานิคมเป็นสีชมพูและต่ำปานกลาง การสูญเสียของพลาสมิดในเซลล์ สามารถคะแนนเป็นสีชมพู / แดงครึ่ง sectored อาณานิคม , ผลของ 1 : 0เหตุการณ์แยกพลาสมิด การจำลองแบบของพลาสมิด ตามโดยนอนดิสจังชันให้ครึ่ง sectored สีขาว / แดงอาณานิคมที่เกิดจาก 2 : 0 เหตุการณ์ การ pab9seg พลาสมิดใช้แปลงของแต่ละสายพันธุ์ ชาวจีน และหลาย ๆindividualtransformants การคัดเลือกและทดสอบความมั่นคงของ minichromosome พลาสมิด ผลลัพธ์เหล่านี้พยายามอยู่ในโต๊ะ .ของการเกิด msy167 และการลบ copy-iเกิด msy164 เปลี่ยนตามปกติและให้อาณานิคมคล้ายคลึงกันการเจริญเติบโตและรูปร่าง . พลาสมิด อิสระแยกซีรั่มและเสถียรภาพพลาสมิด เมื่อชุบบนแผ่นตัวบ่งชี้และต่ำ < 20% ของอาณานิคมคือสีแดงทั้งหมด แสดงให้เห็นว่าส่วนใหญ่ของการคัดลอกเซลล์ของ pab9seg ในเวลาของการชุบ ความถี่ของ halfsectored1 : 0 คะแนน 2 : 0 และอาณานิคมแล้ว ด้วยความเคารพรวมสีชมพูและ sectored อาณานิคม ในส่วนของ msy167ความถี่ของโครโมโซมลดลง , ~ 2 % และความถี่ของปกติแยกเป็น ~ รุ่น 0.2% เหล่านี้ผลลัพธ์จะคล้ายกับผู้ที่รายงานก่อนหน้านี้ ( 3 , 23 ) ที่copy-i การลบความเครียดพบโหมด