3. Results and discussion3.1. Devel

3. Results and discussion3.1. Development of the cell-free enzyme systemA number of methods for the extraction of cellular proteins havebeen evaluated [22,27–29], and the lysis of yeast cells with glassbeads has been shown to be one of the most reliable approaches,particularly when dealing with small sample volumes [21,29]. Acell-free enzyme system was developed by extracting the yeast cel-lular proteins by yeast cell rupture, and cell viability experimentsconfirmed that the yeast cells had been completely destroyed.Specifically, the initial CFU of the dense culture was found tobe 4.53 × 107per mL, decreasing continuously with increasedbead-beating times (Table 1, supplementary data). After 5 min ofbead-beating, 97.83% of the yeast cells lost their viability, and thisincreased to 99.84% and 99.98% after 10 and 15 min, respectively(Table 1, supplementary data).Supplementary material related to this article can be found, inthe online version, at doi:10.1016/j.procbio.2013.12.019.In addition to viability, the morphology of the yeast cells wasevaluated microscopically during bead beating. As shown in Fig. 1(supplementary data), the cell morphology progressively deterio-rated as the beating time increased, and complete morphologicaldestruction occurred after 15 min of bead beating. These find-ings are in agreement with the results of the cell viability tests.After bead beating, the cell-free enzyme solution was collectedand concentrated by high-speed centrifugation (13,000 rpm) usinga specially designed 10-kD spin column. The absence of any livecells in the cell-free enzyme system confirmed that the cells wereno longer viable.Supplementary material related to this article can be found, inthe online version, at doi:10.1016/j.procbio.2013.12.019.As shown in Table 1, the total protein content secreted intothe medium increased with an increased beating time (supple-mentary data). The fresh yeast culture broth contained 0.46 mg/mL

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

3. ผลลัพธ์ และ discussion3.1 พัฒนาจำนวน systemA ฟรีเซลล์เอนไซม์วิธีสกัดโปรตีนโทรศัพท์มือถือของมีค่า [22,27-29], และได้รับการแสดง lysis ของเซลล์ยีสต์ glassbeads เป็นหนึ่งวิธีที่น่าเชื่อถือมากที่สุด โดยเฉพาะอย่างยิ่งเมื่อทำงานกับไดรฟ์ข้อมูลตัวอย่างขนาดเล็ก [21,29] ระบบเอนไซม์ฟรี Acell ได้รับการพัฒนา โดยแยกโปรตีน cel lular ยีสต์ โดยยีสต์เซลล์แตก และ experimentsconfirmed ชีวิตเซลล์ว่า เซลล์ยีสต์มีการถูกทำลายอย่างสมบูรณ์โดยเฉพาะ CFU เริ่มต้นวัฒนธรรมหนาแน่นพบ tobe 4.53 × 107per mL ลดลงอย่างต่อเนื่องกับเวลาเต้น increasedbead (ตารางที่ 1 ข้อมูลเพิ่มเติม) หลังจาก 5 นาที ofbead-เต้น 97.83% ยีสต์เซลล์สูญเสียของชีวิต และ thisincreased 99.84% และ 99.98% หลังจากนาทีที่ 10 และ 15 ตามลำดับ (ตาราง 1 เพิ่มเติมข้อมูล)วัสดุเสริมที่เกี่ยวข้องกับบทความนี้สามารถพบ รุ่นออนไลน์ ที่นี้ doi:10.1016/j.procbio.2013.12.019.In ชีวิต สัณฐานวิทยาของ wasevaluated เซลล์ยีสต์ในระหว่างเต้นลูกปัด microscopically ตามที่แสดงใน Fig. 1 (ข้อมูลเสริม), สัณฐานวิทยาของเซลล์ที่ความก้าวหน้า deterio-คะแนนเวลาเต้นเพิ่มขึ้น และ morphologicaldestruction สมบูรณ์เกิดขึ้นหลังจาก 15 นาทีปัดตี Ings ค้นหาเหล่านี้มีข้อตกลงกับผลลัพธ์ของการทดสอบนี้เซลล์หลังจากตีลูกปัด โซลูชั่นฟรีเซลล์เอนไซม์ถูก collectedand เข้มข้นตามคอลัมน์หมุน 10-kD usinga ที่ออกแบบมา centrifugation ความเร็วสูง (13000 รอบต่อนาที) การขาดงานของ livecells ใด ๆ ในระบบฟรีเซลล์เอนไซม์ยืนยันว่า wereno เซลล์ทำงานได้อีกต่อไปวัสดุเสริมที่เกี่ยวข้องกับบทความนี้สามารถพบ รุ่นออนไลน์ ที่ doi:10.1016/j.procbio.2013.12.019.As แสดงในตารางที่ 1 โปรตีนรวมเนื้อหาสื่อ secreted intothe เพิ่มเวลาการเต้นเพิ่มขึ้น (ข้อมูล mentary นุ่ม) ซุปวัฒนธรรมยีสต์สดอยู่ 0.46 mg/mL

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

3. ผลการทดลองและ discussion3.1 การพัฒนาเอนไซม์เซลล์ฟรี systemA จำนวนของวิธีการสกัดโปรตีนของเซลล์ havebeen ประเมิน [22,27-29] และสลายของเซลล์ยีสต์ที่มี glassbeads ได้รับการแสดงที่จะเป็นหนึ่งในวิธีที่เชื่อถือได้มากที่สุดโดยเฉพาะอย่างยิ่งเมื่อต้องรับมือ มีปริมาณตัวอย่างเล็ก ๆ [21,29] Acell ฟรีระบบเอนไซม์ที่ได้รับการพัฒนาโดยการสกัดโปรตีน Cel-Lular ยีสต์โดยการแตกเซลล์ยีสต์และมีชีวิตเซลล์ experimentsconfirmed ว่าเซลล์ยีสต์ที่ได้รับอย่างสมบูรณ์ destroyed.Specifically, CFU เริ่มต้นของวัฒนธรรมหนาแน่นก็พบ Tobe 4.53 × 107per มิลลิลิตร ลดลงอย่างต่อเนื่องกับครั้ง increasedbead เต้น (ตารางที่ 1 ข้อมูลเพิ่มเติม) หลังจาก 5 นาที ofbead เต้น, 97.83% ของเซลล์ยีสต์ที่หายไปมีชีวิตของพวกเขาและเพื่อ thisincreased 99.84% และ 99.98% หลังจากวันที่ 10 และ 15 นาทีตามลำดับ (ตารางที่ 1 ข้อมูลเพิ่มเติม) วัสดุ .Supplementary เกี่ยวข้องกับบทความนี้สามารถพบได้ inthe รุ่นออนไลน์ที่ดอย: 10.1016 / j.procbio.2013.12.019.In นอกจากจะมีชีวิต, การเปลี่ยนรูปร่างของเซลล์ยีสต์ wasevaluated กล้องจุลทรรศน์ในระหว่างการเต้นลูกปัด ดังแสดงในรูป 1 (ข้อมูลเพิ่มเติม) สัณฐานวิทยาเซลล์ก้าวหน้า deterio-การจัดอันดับเป็นเวลาตีเพิ่มขึ้นและ morphologicaldestruction สมบูรณ์เกิดขึ้นหลังจาก 15 นาทีของลูกปัดเต้น เหล่านี้หา-Ings อยู่ในข้อตกลงกับผลของการมีชีวิตเซลล์ tests.After เต้นลูกปัด, การแก้ปัญหาการทำงานของเอนไซม์เซลล์ฟรีเข้มข้น collectedand โดยการหมุนเหวี่ยงความเร็วสูง (13,000 รอบต่อนาที) usinga ออกแบบมาเป็นพิเศษคอลัมน์หมุน 10 kD กรณีที่ไม่มีการ livecells ใด ๆ ในระบบเอนไซม์เซลล์ฟรีได้รับการยืนยันว่าเซลล์ wereno วัสดุ viable.Supplementary อีกต่อไปเกี่ยวข้องกับบทความนี้สามารถพบได้ inthe รุ่นออนไลน์ที่ดอย: 10.1016 / j.procbio.2013.12.019.As แสดงใน ตารางที่ 1 ปริมาณโปรตีนรวมหลั่ง intothe กลางเพิ่มขึ้นด้วยเวลาที่ตีเพิ่มขึ้น (ข้อมูลนุ่ม-mentary) น้ำซุปเชื้อยีสต์สดมี 0.46 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

3 . ผล discussion3.1 . การพัฒนาการสังเคราะห์เอนไซม์โครงสร้างจำนวนวิธีการสำหรับการสกัดโปรตีนของเซลล์และทำการประเมิน 22,27 ) [ 29 ] และการสลายของเซลล์ยีสต์กับ glassbeads ได้ถูกแสดงเป็นหนึ่งในวิธีการที่เชื่อถือได้มากที่สุด โดยเฉพาะอย่างยิ่งเมื่อจัดการกับขนาดตัวอย่างมีปริมาณ [ 21,29 ]ระบบเอนไซม์ฟรี acell ถูกพัฒนาขึ้นโดยสกัดยีสต์โปรตีนโดยแยกออกบริการเคลเซลล์ยีสต์ และเซลล์ experimentsconfirmed ที่ยีสต์เซลล์ถูกทำลาย โดยเฉพาะ เซลล์เริ่มต้นของวัฒนธรรมหนาแน่นพบ Tobe 4.53 × 107per ml ลดอย่างต่อเนื่องกับ increasedbead เต้นครั้ง ( ตารางที่ 1 เสริม ข้อมูล ) หลังจาก 5 นาที ofbead เต้น97.83 % ของยีสต์เซลล์สูญเสียชีวิตของพวกเขาและ thisincreased เพื่อ 99.84 % และ 99.98 หลังจากที่ 10 และ 15 นาทีตามลำดับ ( ตารางที่ 1 เสริม ข้อมูล วัสดุเสริมที่เกี่ยวข้องกับบทความนี้สามารถพบได้ในรูปแบบออนไลน์ ที่ดอย : 10.1016/j.procbio.2013.12.019.in เพิ่มความมีชีวิตสัณฐานวิทยาของยีสต์เซลล์ระหว่างผลระหว่าง ลูกแก้วเต้น ดังแสดงในรูปที่1 ( ข้อมูลเพิ่มเติม ) , รูปร่างของเซลล์ก้าวหน้า deterio คะแนนการเต้นเพิ่มขึ้น และ morphologicaldestruction สมบูรณ์เกิดขึ้นหลังจาก 15 นาทีของลูกแก้วเต้น เหล่านี้ค้นหา ings อยู่ในข้อตกลงกับผลลัพธ์ของการทดสอบเซลล์ หลังจากลูกแก้วเต้น การสังเคราะห์เอนไซม์ในสารละลายเข้มข้น โดย collectedand ปั่นความเร็วสูง ( 13000 รอบต่อนาที ) การออกแบบเป็นพิเศษ 10 กิโลปั่นคอลัมน์ การขาดใด ๆ livecells ระบบเอนไซม์ในการสังเคราะห์ที่ยืนยันว่าเซลล์ต่ออีกต่อไปได้ วัสดุเสริมที่เกี่ยวข้องกับบทความนี้สามารถพบได้ในรูปแบบออนไลน์ ที่ดอย : 10.1016/j.procbio.2013.12.019.as แสดงดังตารางที่ 1รวมโปรตีนที่หลั่งเข้าสู่กลางเพิ่มขึ้นเพิ่มขึ้นเต้นเวลา ( ข้อมูล mentary นิ่มนวล ) วัฒนธรรมยีสต์สดซุปที่มีอยู่ 0.46 มก. / มล.