2.4. Real time RT-PCR All reactions

2.4. Real time RT-PCR
All reactions were performed using Realplex4real time PCR machine (Eppendorf, Germany) using SYBR premix Ex Taq, (TaKaRaBio Inc., Japan). The PCR was set up in a 10 l reaction volume containing 5 l of 2× SYBR Premix Ex Taq master mix, 1.5 l of cDNA,1 l (10 M) of each primer and 2.5 l nuclease free water. The optimized cycling conditions were as follows: initial denaturationat 94◦C for 5 min, followed by 40 cycles of denaturation at 94◦C for 20 s, primer annealing at 56◦C for 30 s, and extension at 72◦C for 20 s. The fluorescence was measured at the end of each cycle. Amelt curve analysis was performed following amplification to verify the specificity of the amplified products. Melting curve analysis consisted

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.4 เวลาจริงที่ RT-PCR ปฏิกิริยาทั้งหมดที่ดำเนินการโดยใช้ Realplex4real เวลา PCR เครื่อง (Eppendorf เยอรมนี) ใช้ SYBR premix Ex Taq, (TaKaRaBio Inc. ญี่ปุ่น) PCR ถูกกำหนดขึ้นในไดรฟ์ข้อมูลปฏิกิริยา 10 l ประกอบด้วย 5 ลิตร 2 ซื้อ SYBR Premix Ex Taq หลักผสม 1.5 l ของ cDNA, l 1 (10 M) ของแต่ละสีรองพื้นและ 2.5 l nuclease น้ำ สภาพขี่จักรยานให้เหมาะมีดังนี้: 94◦C denaturationat เริ่มต้นสำหรับ 5 นาที ตาม ด้วยวงจร 40 การ denaturation ที่ 94◦C สำหรับ 20 s พื้นการอบเหนียวที่ 56◦C 30 s และส่วนขยายที่ 72◦C สำหรับ 20 s Fluorescence จะถูกวัดในตอนท้ายของแต่ละรอบ วิเคราะห์เส้นโค้ง Amelt ที่ดำเนินการต่อขยายตรวจสอบ specificity ผลิตภัณฑ์เอาต์ ละลายโค้งวิเคราะห์ประกอบด้วย

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.4 เรียลไทม์ RT-PCR
ปฏิกิริยาทั้งหมดถูกดำเนินการโดยใช้เวลา Realplex4real เครื่อง PCR (Eppendorf, เยอรมนี) ใช้ SYBR พรีมิกซ์ Ex Taq (TaKaRaBio Inc. , ญี่ปุ่น) PCR ถูกจัดตั้งขึ้นใน 10? ลิตรปริมาณปฏิกิริยาที่มี 5? ลิตร 2 × SYBR พรีมิกซ์ Ex Taq มาสเตอร์มิกซ์ 1.5? ลิตร cDNA 1? L (10 M?) ของแต่ละรองพื้นและ 2.5 นิวลิตรน้ำดื่มฟรี . เงื่อนไขการขี่จักรยานที่ดีที่สุดมีดังนี้94◦C denaturationat เริ่มต้นเป็นเวลา 5 นาทีตามด้วย 40 รอบของการสูญเสียสภาพธรรมชาติที่94◦C 20 วินาที, การหลอมไพรเมอร์ที่56◦Cสำหรับ 30 วินาทีและนามสกุลที่72◦C 20 S . เรืองแสงวัดในตอนท้ายของแต่ละรอบ การวิเคราะห์โค้ง Amelt ได้ดำเนินการขยายต่อไปนี้เพื่อตรวจสอบความจำเพาะของผลิตภัณฑ์ขยาย การวิเคราะห์โค้งหลอมประกอบด้วย

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.4 . เวลาจริงแสดงปฏิกิริยา RT-PCR
ทั้งหมดโดยใช้เครื่อง PCR เวลา realplex4real ( เพนดอร์ฟ , เยอรมนี ) โดยใช้ SYBR รวมอดีตได้ดี ( takarabio ( ญี่ปุ่น ) ร่วมก่อตั้งขึ้นใน 10  L ปฏิกิริยาปริมาณที่มี 5  L 2 × SYBR รวมอดีตได้ดี  Master Mix , 1.5 ลิตรยีน 1  L ( 10  m ) ของแต่ละสีและ 2.5  ลิตรนิวเคลียสฟรีน้ำ ออกแบบจักรยานเงื่อนไข ดังนี้เริ่มต้น◦ denaturationat 94 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาที ตามด้วย 40 รอบ ( ที่ 94 ◦ C เป็นเวลา 20 วินาที ก่อนการอบอ่อนที่ 56 ◦ C 30 , และส่วนขยายที่ 72 ◦ C เป็นเวลา 20 วินาที จากวัดในตอนท้ายของแต่ละรอบ การวิเคราะห์ทางโค้ง amelt แสดงตามแบบตรวจสอบความจำเพาะของการขยายผลิตภัณฑ์ จุดหลอมเหลวการวิเคราะห์ทางโค้ง ประกอบด้วย