Random mutagenesis in a plant viral

Random mutagenesis in a plant viral genome is valuable for generating attenuated strains or for analyzing viral
gene function at the molecular level. A DNA repair-deficient mutator Escherichia coli strain was used for random
mutagenesis of a plant viral genome. A full-length infectious cDNA clone of Citrus tatter leaf
irus (genus
Capillo
irus) L strain (CTLV-L) genomic RNA under the T7 promoter sequence (pITCL) was introduced into the
mutator E. coli strain XL1-Red and mutagenized overnight. To fix mutations, the mixture of plasmid DNA isolated
from colonies of the mutator bacteria was introduced into another E. coli strain, JM109, which has normal DNA
repair function. Infectious viral genomic RNA was transcribed in vitro from each mutagenized pITCL clone and
inoculated on host plants. Phenotypic mutants were selected for altered pathogenicity in the inoculated plants.
Nucleotide sequence analysis of each mutant revealed that mutations were introduced randomly into the CTLV-L
genome regardless of the function of the viral gene. The nucleotide substitutions were biased towards single point
mutations, which consisted of more transitions than transversions or single-base frameshifts. These mutations were
preserved stably in plants subject to sequential mechanical inoculation. The strategy presented below is a simple and
very efficient way to generate virus mutants for analyzing the functions of viral genes. © 2001 Elsevier Science B.V.
All rights reserved.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Mutagenesis สุ่มในจีโนมเป็นไวรัสพืชจะมีประโยชน์ สำหรับการสร้างสายพันธุ์ไฟฟ้าเคร... หรือวิเคราะห์ไวรัสฟังก์ชันยีนในระดับโมเลกุล Mutator การซ่อมไม่ดีเอ็นเอต้องใช้ Escherichia coli ใช้สำหรับสุ่มmutagenesis ของจีโนมเป็นไวรัสพืช โคลน cDNA ปราศจากโรคติดเชื้อของส้ม tatter irus ใบไม้ (พืชสกุลCapillo irus) L ต้องใช้ (CTLV L) อาร์เอ็นเอ genomic ภายใต้ลำดับที่โปรโมเตอร์ T7 (pITCL) ถูกนำมาใช้ในการmutator E. coli สายพันธุ์สีแดง XL1 และ mutagenized ค้างคืน การแก้ไขปัญหาการกลายพันธุ์ ผสมของ plasmid DNA แยกต่างหากจากอาณานิคมของแบคทีเรีย mutator ถูกนำเข้าต้องใช้ E. coli อื่น JM109 ซึ่งมีดีเอ็นเอปกติซ่อมแซมฟังก์ชัน ติดเชื้อไวรัส genomic อาร์เอ็นเอเป็นทับศัพท์ที่เพาะเลี้ยงจากโคลนแต่ละ mutagenized pITCL และinoculated บนโฮสต์พืช สายพันธุ์ไทป์ถูกเลือกสำหรับการเปลี่ยนแปลง pathogenicity ในพืช inoculatedการวิเคราะห์หาลำดับนิวคลีโอไทด์ของ mutant ละเปิดเผยว่า กลายพันธุ์ได้นำโดยการสุ่มเข้าสู่ CTLV-Lกลุ่ม โดยการทำงานของยีนไวรัส แทนนิวคลีโอไทด์มีความโน้มเอียงไปทางจุดเดียวกลายพันธุ์ ซึ่งประกอบด้วยช่วงการเปลี่ยนภาพที่เพิ่มมากขึ้นกว่า transversions หรือ frameshifts ฐานเดียว กัน กลายพันธุ์เหล่านี้ได้รักษา stably ในพืชอาจ inoculation กลตามลำดับ กลยุทธ์ที่แสดงด้านล่างเป็นง่าย และวิธีที่มีประสิทธิภาพมากเพื่อสร้างไวรัสสายพันธุ์สำหรับการวิเคราะห์หน้าที่ของยีนไวรัส © 2001 Elsevier วิทยาศาสตร์ b.vสงวนลิขสิทธิ์ทั้งหมด

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ฉับสุ่มในจีโนมของไวรัสพืชที่มีคุณค่าในการสร้างสายพันธุ์เชื้อหรือการวิเคราะห์ไวรัสหน้าที่ของยีนในระดับโมเลกุล
สายพันธุ์ DNA ซ่อมแซมขาด Mutator
อีโคที่ใช้ในการสุ่มฉับของจีโนมของไวรัสพืช ความยาวเต็มรูปแบบโคลน cDNA ติดเชื้อของใบส้มเศษผ้า Irus? (ประเภท
Capillo? Irus) สายพันธุ์ L (CTLV-L) อาร์เอ็นเอจีโนมภายใต้ลำดับโปรโมเตอร์ T7 (pITCL) ถูกนำเข้าสู่
Mutator เชื้อ E. coli สายพันธุ์ XL1 สีแดงและ mutagenized ค้างคืน ในการแก้ไขปัญหาการกลายพันธุ์ที่มีส่วนผสมของพลาสมิดดีเอ็นเอที่แยกจากอาณานิคมของแบคทีเรีย Mutator ถูกนำเข้าสู่อีกสายพันธุ์อีโคไล, JM109 ซึ่งมีดีเอ็นเอปกติฟังก์ชั่นการซ่อมแซม ติดเชื้อไวรัสอาร์เอ็นเอจีโนมได้รับการคัดลอกในหลอดทดลองจากแต่ละ mutagenized pITCL โคลนและเชื้อในพืช การกลายพันธุ์ฟีโนไทป์ได้รับเลือกสำหรับการเปลี่ยนแปลงทำให้เกิดโรคในพืชเชื้อได้. การวิเคราะห์ลำดับเบสของแต่ละกลายพันธุ์เปิดเผยว่าการกลายพันธุ์ที่ถูกนำมาสุ่มเข้าไปใน CTLV-L จีโนมโดยไม่คำนึงถึงฟังก์ชั่นของยีนของไวรัส แทนเบื่อหน่ายถูกลำเอียงต่อจุดเดียวกลายพันธุ์ซึ่งประกอบไปด้วยการเปลี่ยนมากกว่า transversions หรือ frameshifts เดียวฐาน การกลายพันธุ์เหล่านี้ถูกเก็บรักษาไว้อย่างถาวรในโรงงานอาจมีการฉีดวัคซีนกลลำดับ กลยุทธ์ที่นำเสนอดังต่อไปนี้คือการที่ง่ายและวิธีที่มีประสิทธิภาพมากในการสร้างไวรัสกลายพันธุ์สำหรับการวิเคราะห์การทำงานของยีนของไวรัส © 2001 เอลส์วิทยาศาสตร์ BV สงวนลิขสิทธิ์

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การสุ่มในพืชไวรัสจีโนมมีคุณค่าสำหรับการสร้างบางสายพันธุ์หรือวิเคราะห์ฟังก์ชันยีนไวรัส
ระดับโมเลกุล ซ่อมแซมดีเอ็นเอที่ขาด mutator Escherichia coli สายพันธุ์ที่ใช้ในการสุ่ม
ไวรัสจีโนมของพืช . full-length cDNA โคลนส้ม ( ใบ irus ( สกุล

ผ้าขี้ริ้ว .capillo
irus ) สายพันธุ์ ( ctlv-l ) ซึ่งภายใต้การลำดับจีโนม * * 3 ( pitcl ) ใช้เป็น
mutator Escherichia coli สายพันธุ์ xl1 สีแดงและ mutagenized ค้างคืน เพื่อแก้ไขความผิดปกติ , ส่วนผสมของพลาสมิดดีเอ็นเอแยก
จากอาณานิคมของ mutator แบคทีเรียเข้าไปอีก E . coli สายพันธุ์ที่มีซึ่งมีฟังก์ชันการซ่อมแซมดีเอ็นเอ
ปกติโรคติดเชื้อไวรัสจีโนม rna ถูกถ่ายทอดในหลอดทดลองจากแต่ละ mutagenized pitcl โคลนและปลูกพืช
บนโฮสต์ ฟีโนไทป์กลายพันธุ์ถูกเลือกสำหรับการเปลี่ยนแปลงในการปลูกพืช การวิเคราะห์ลำดับนิวคลีโอไทด์ของแต่ละ
กลายพันธุ์เปิดเผยว่า การกลายพันธุ์ ถูกนํามาสุ่มใน ctlv-l
จีโนมโดยไม่คำนึงถึงการทำงานของยีนไวรัสแทนยีนที่เป็นอคติกับการกลายพันธุ์จุด
เดี่ยว ซึ่งประกอบด้วย การเปลี่ยนมากกว่า transversions หรือ frameshifts ฐานเดียว การกลายพันธุ์เหล่านี้
รักษาอย่างถาวรในพืชภายใต้ระบบเครื่องจักรกล การฉีดวัคซีน กลยุทธ์ที่แสดงด้านล่างเป็นง่ายและมีประสิทธิภาพมากวิธีการสร้าง
สายพันธุ์ไวรัสในการวิเคราะห์การทำงานของไวรัส ยีนสงวนลิขสิทธิ์ 2001 Elsevier Science นอกจากนี้
สงวนสิทธิ์ทั้งหมด