Milk progesterone and cortisol were analyzed by previously described enzyme
immunoassays (EIA; Young et al., 2004 adapted from Munro and Stabenfeldt,
1984). Each EIA utilized an antibody (monoclonal antiserum progesterone
metabolite Quidel Clone #425; or, polyclonal cortisol antiserum R4866; supplied
by CJ Munro, University of California, Davis, CA), horseradish peroxidase
conjugated label [progesterone or cortisol; prepared according to Munro and
Stabenfeldt (1984)] and standards (progesterone or cortisol; Sigma-Aldrich, UK).
The modified assay procedures were as follows: i) antiserum was diluted at
1:10,000 for progesterone, and 1:8500 for cortisol; ii) standards (progesterone, 4–
200 pg/well or cortisol, 3.9–1000 pg/well) or undiluted samples were loaded
(50 μl/well for both assays) onto each plate; and iii) the horseradish peroxidase
conjugate was used at a dilution of 1:33,000 for progesterone or 1:40,000 for
cortisol. The progesterone antiserum cross-reacted with several progesterone
metabolites including: 4-pregnen-3, 20-dione (progesterone) 100%; 4-pregnen-3α-
ol-20-one 188%; 4-pregnen-3β-ol-20-one 172%; 4-pregnen-11α-ol-3,20-dione
147%; 5α-Pregnan-3β-ol-20-one 94%; 5α-Pregnan-3α-ol-20-one 64%; 5α-
Pregnan-3, 20-dione 55%; 5β-Pregnan-3β-ol-20-one 12.5% and ≤10% for all
โปรเจสเตอโรนมและ cortisol ถูกวิเคราะห์ โดยเอนไซม์ที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้immunoassays (EIA หนุ่มร้อยเอ็ด al., 2004 ดัดแปลงจากจู๋และ Stabenfeldt1984) EIA แต่ใช้การแอนติบอดี (antiserum โมโนโปรเจสเตอโรmetabolite Quidel โคลน #425 หรือ polyclonal cortisol antiserum R4866 ให้มาโดย CJ จู๋ มหาวิทยาลัยแคลิฟอร์เนีย Davis, CA), horseradish peroxidaseป้ายกลวง [โปรเจสเตอโรหรือ cortisol เตรียมตามจู๋ และStabenfeldt (1984)] และมาตรฐาน (โปรเจสเตอโรหรือ cortisol Sigma-Aldrich, UK)ขั้นตอนแก้ไขวิเคราะห์ได้ดังนี้: ฉัน) antiserum ถูกทำให้เจือจางที่1:10,000 โปรเจสเตอโร และ 1:8500 สำหรับ cortisol ii) มาตรฐาน (โปรเจสเตอโร 4 –pg/ดี 200 หรือ cortisol, 3.9 – 1000 pg/ดี) หรือตัวอย่างหัวถูกโหลด(50 μl/ดี สำหรับทั้ง assays) บนแต่ละแผ่น และ iii) horseradish peroxidaseค่าสังยุคใช้ในการเจือจางของ 1:33,000 สำหรับโปรเจสเตอโรหรือ 1:40,000 สำหรับcortisol Antiserum โปรเจสเตอโร cross-reacted กับโปรเจสเตอโรหลายmetabolites ที่รวมทั้ง: 4-pregnen-3, 20-dione (โปรเจสเตอโร) 100% 4-pregnen-3α -ol-20-1 188% 4-pregnen-3β-ol-20-one 172% 4-pregnen-11α-ol-3,20-dione147% 5α-Pregnan-3β-ol-20-one 94% 5α-Pregnan-3α-ol-20-one 64% 5Α-Pregnan-3, 20 dione % 55 5β-Pregnan-3β-ol-20-one 12.5% และ ≤10% ทั้งหมด
การแปล กรุณารอสักครู่..
ฮอร์โมนคอร์ติซอนมและนำมาวิเคราะห์โดยอธิบายไว้ก่อนหน้าเอนไซม์
immunoassays (EIA. หนุ่ม et al, 2004 ดัดแปลงมาจากมันโรและ Stabenfeldt,
1984) EIA แต่ละใช้แอนติบอดี (monoclonal กระเทือน antiserum
metabolite Quidel โคลน # 425; หรือ antiserum cortisol โพลี R4866; ที่จัด
โดย CJ มันโรมหาวิทยาลัยแคลิฟอร์เนียเดวิส, CA) มะรุม peroxidase
ฉลากผัน [กระเทือนหรือ cortisol; จัดทำขึ้นตามมันโรและ
. Stabenfeldt (1984)] และมาตรฐาน (ฮอร์โมนคอร์ติซอหรือ; Sigma-Aldrich สหราชอาณาจักร)
ขั้นตอนการทดสอบการแก้ไขมีดังนี้ i) antiserum ถูกเจือจางที่
1: 10,000 กระเทือนและ 1: 8500 สำหรับ cortisol ; ii) มาตรฐาน (กระเทือน 4-
PG 200 / ดีหรือ cortisol, 3.9-1000 PG / ดี) หรือตัวอย่างเจือปนถูกโหลด
(50 ไมโครลิตร / ดีสำหรับการตรวจทั้งสอง) ลงบนแผ่นแต่ละ; และ iii) peroxidase มะรุม
ผันถูกนำมาใช้ในการลดสัดส่วนการ 1: 33,000 สำหรับกระเทือนหรือ 1: 40,000
cortisol antiserum กระเทือนข้ามปฏิกิริยากับฮอร์โมนหลาย
สารรวม: 4 pregnen-3, 20-dione (progesterone) 100%; 4 pregnen-3α-
OL-20-หนึ่ง 188%; 4 pregnen-3β-OL-20-หนึ่ง 172%; 4 pregnen-11α-OL-3,20-dione
147%; 5α-ครรภ์-3β-OL-20 หนึ่ง 94%; 5α-ครรภ์-3α-OL-20 หนึ่ง 64%; 5α-
ครรภ์-3, 20-dione 55%; 5β-ครรภ์-3β-OL-20-หนึ่ง 12.5% และ≤10% สำหรับทุก
การแปล กรุณารอสักครู่..