2.2. Enzyme activity assayThe GPX a

2.2. Enzyme activity assay
The GPX activity was measured by using the method of Livingstone et al.
(1992) and expressed as mmol/mg p./min. The activity was calculated estimating
the decrease of NADPH at 340 nm for 1 min. The reaction buffer contained
100 mM phosphate buffer (pH 7.4), 2 mM GSH, 0.12 mM NADPH, 2 U Glutathione
reductase, supernatant and 3 mM Cumene hydroperoxide in a final volume of
1 mL. The GR activity was also calculated by decrease of NADPH at 340 nm for
1 min and expressed as mmol/mg p./min (Carlberg and Mannervik, 1975). The
reaction medium contained 100 mM phosphate buffer (7.4), 0.1 mM NADPH,
supernatant and 1 mM GSSG in a final volume of 1 mL. SOD activity was measured
by the indirect method involving the inhibition of cytochrome c reduction at
550 nm for 1 min (McCord and Fridovich, 1969). The reaction buffer in a final
volume of 1 mL contained 50 mM Potassium phosphate buffer (pH 7.8), 0.1 mM
EDTA, 10 mM cytochrome c, 0.05 mM hypoxanthine, supernatant and 1.87 mU/ml
Xanthine oxidase. The SOD activity was expressed as Unit/mg p. The GST activity
was measured by absorbance increase at 340 nm resulting from the conjugation of
reduced glutathione (GSH) and CDNB (1-chloro-2,4-dinitrobenzene) (Habig et al.,
1974) and expressed as mmol/mg prot/min. The reaction buffer contained 100 mM
potassium phosphate buffer (pH 7.4), 1 mM GSH, 1 mM CDNB and supernatant in
a final volume of 1 mL. GSH levels were measured following the method of Beutler
et al., (1963). The reaction buffer contained 0.3 M Na2HPO4 solution, supernatant
and 0.5 mM DTNB (5,50
-dithiobis-2-nitrobenzoic acid) in a final volume 5 mL. GSH
was measured as the difference in the absorbance values of samples in the
presence and the absence of DTNB at 412 nm. GSH value was calculated as nmol
GSH/mg protein. The protein contents of the homogenates were determined by
the method of Lowry et al. (1951) using bovine serum albumin as a standard.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.2 การวิเคราะห์กิจกรรมของเอนไซม์
กิจกรรม GPX ถูกวัดโดยใช้วิธีการของลิฟวิงสเอตอัล.
(1992) และแสดงเป็นมิลลิโมล / มก. พี. / นาที กิจกรรมที่คำนวณได้ประมาณ
ลดลงของ NADPH ที่ 340 นาโนเมตรเป็นเวลา 1 นาที บัฟเฟอร์ปฏิกิริยาที่มี
100 มิลลิเมตรฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.4), 2 มิลลิเมตร gsh 0.12 มม. NADPH 2 u
กลูตาไธโอน reductase,ใสและ 3 มม. ไฮโดร cumene ในเล่มสุดท้ายของ
1 มิลลิลิตร กิจกรรมกรัมก็ยังคำนวณโดยการลดลงของ NADPH ที่ 340 นาโนเมตรเพื่อ
1 นาทีและแสดงเป็นมิลลิโมล / มก. พี. / นาที (Carlberg และ mannervik, 1975)
กลางปฏิกิริยาที่มี 100 มิลลิเมตรฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (7.4), 0.1 มม. NADPH
ใสและ 1 มม. GSSG ในเล่มสุดท้ายของ 1 มิลลิลิตร กิจกรรมสดวัด
โดยวิธีทางอ้อมที่เกี่ยวข้องกับการยับยั้งการลดค cytochrome ที่ 550 นาโนเมตร
1 นาที (McCord และ fridovich, 1969) บัฟเฟอร์ปฏิกิริยาใน
เล่มสุดท้ายของ 1 มล. ที่มี 50 มม. บัฟเฟอร์โพแทสเซียมฟอสเฟต (ph 7.8), 0.1 มม.
EDTA, 10 มม. cytochrome C, 0.05 มม. hypoxanthine, ใสและ 1.87 mu / ml
xanthine oxidase กิจกรรมสดได้แสดงออกเป็นหน่วย / มก. พี กิจกรรมภาษีมูลค่าเพิ่ม
โดยวัดจากการเพิ่มขึ้นของการดูดกลืนแสงที่ 340 นาโนเมตรที่เกิดจากการเชื่อมต่อกันของ
ลดลงกลูตาไธโอน (GSH) และ cdnb (1-คลอโร-2 ,4-dinitrobenzene) (Habig ตอัล.
1974) และแสดงเป็นมิลลิโมล / มก. ลูกศิษย์ / นาที . บัฟเฟอร์ปฏิกิริยาที่มีบัฟเฟอร์ 100 มิลลิเมตร
โพแทสเซียมฟอสเฟต (ph 7.4) 1 มิลลิเมตร gsh, 1 มิลลิเมตร cdnb และใสใน
เล่มสุดท้ายของ 1 มิลลิลิตร ระดับ gsh ถูกวัดต่อไปนี้วิธีการ Beutler
และคณะ. (1963) บัฟเฟอร์ปฏิกิริยาที่มี 0.3 เมตรทางออก Na2HPO4, ใส
และ 0.5 มม. dtnb (5,50 กรด
dithiobis-2-nitrobenzoic) ในเล่มสุดท้าย 5 ml gsh
วัดเป็นความแตกต่างในค่าการดูดกลืนแสงของกลุ่มตัวอย่างใน
การแสดงตนและการขาดของ dtnb ที่ 412 นาโนเมตร gsh ค่าที่คำนวณได้เป็นโปรตีน nmol
gsh / มิลลิกรัม ปริมาณโปรตีนของ homogenates ได้รับการพิจารณาโดย
วิธีการของโลว์รีย์และอัล (1951) โดยใช้ซีรั่มอัลบูมิวัวเป็นมาตรฐาน.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.2. เอนไซม์กิจกรรมทดสอบ
กิจกรรม GPX ถูกวัด โดยใช้วิธีของลิฟวิงสโตน et al.
(1992) และแสดงเป็นพี mmol/mg/min มีคำนวณกิจกรรมประเมิน
ลดของ NADPH ที่ 340 nm ใน 1 นาที บัฟเฟอร์ปฏิกิริยาอยู่
100 มม.ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.4), 2 มม. GSH, 0.12 มม. NADPH กลูตาไธโอน U 2
reductase supernatant และ 3 มม. Cumene hydroperoxide ในปริมาณ final
1 mL ยังมีคำนวณกิจกรรม GR โดยลด NADPH ที่ 340 nm สำหรับ
1 นาที และแสดงเป็น mmol/มิลลิกรัม p./min (Carlberg และ Mannervik, 1975) ใน
ปฏิกิริยาปานกลางอยู่ 100 มม.ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (7.4), NADPH 0.1 มม.,
supernatant และ 1 มม. GSSG ปริมาณ final ของ 1 mL เป็นวัดกิจกรรมสด
โดยวิธีทางอ้อมที่เกี่ยวข้องกับการยับยั้ง cytochrome c ลดที่
550 nm ใน 1 นาที (McCord และ Fridovich, 1969) บัฟเฟอร์ปฏิกิริยาในการ final
ปริมาตร 1 mL ประกอบด้วยโพแทสเซียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.8), 0.1 mM 50 mM
EDTA, 10 มม. cytochrome c, hypoxanthine 0.05 mM, supernatant และหมู่ 1.87 ml
Xanthine oxidase กิจกรรมสดถูกแสดงเป็นหน่วย มิลลิกรัม/p กิจกรรม GST
ถูกวัด โดยเพิ่ม absorbance ที่ 340 nm เกิดจาก conjugation ของ
ลดกลูตาไธโอน (GSH) และ CDNB (1-chloro-2, 4-dinitrobenzene) (Habig et al.,
1974) และแสดงเป็น prot mmol/mg/min บัฟเฟอร์ปฏิกิริยาอยู่ 100 มม.
โพแทสเซียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.4), GSH, 1 มม. CDNB และ supernatant ใน 1 mM
เสียง final ของ 1 mL ระดับ GSH ถูกวัดตามวิธีของ Beutler
al. ร้อยเอ็ด, (1963) บัฟเฟอร์ปฏิกิริยาอยู่ 0.3 M Na2HPO4 โซลูชัน supernatant
0.5 มม. DTNB และ (5, 50
- dithiobis - 2-กรด nitrobenzoic) ปริมาณ final 5 mL GSH
ถูกวัดเป็นความแตกต่างในค่า absorbance ของตัวอย่างในการ
สถานะการออนไลน์และการขาดงานของ DTNB ที่ 412 nm คำนวณค่า GSH เป็น nmol
GSH/มิลลิกรัม โปรตีน เนื้อหาโปรตีนของ homogenates ถูกกำหนดโดย
วิธีการของ Lowry et al. (1951) ใช้วัว serum albumin เป็นมาตรฐาน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.2 . การทำงานของเอนไซม์สอบ
GPX กิจกรรมวัดได้โดยใช้วิธีการของลีฝ - อิงซทัน et al .
( 1992 )และแสดงเป็น/ P .มก.มิลลิโมล/นาที การทำงานจะคำนวณการประเมิน
ซึ่งจะช่วยลดลงของ nadph ที่ 340 NM สำหรับ 1 นาทีที่กำลังบัฟเฟอร์ที่อยู่
100 มม.ฟอสเฟต Buffer ( PH 7.4 ), 2 ม.ม.คุณลักษณะเฉพาะของ Su , 0.12 มม. nadph , 2 U glutathione
reductase ,hydroperoxide cumene 3 ม.ม.และ supernatant ในระดับเสียง final ของ
1 มล. กรัมกิจกรรมที่จะคำนวณโดยการลด nadph ที่ 340 NM สำหรับนาที
1 และแสดงเป็นมิลลิโมล/ P มก./นาที( carlberg และ mannervik . 1975 ) มีขนาดกลาง
ปฏิกริยาที่มีอยู่ 100 มม.ฟอสเฟต Buffer ( 7.4 ) 0.1 มม.
supernatant nadph และ 1 มม. gssg ในระดับเสียง final 1 มล. การทำงานของหญ้าวัดได้
ตามมาตรฐานโดยใช้วิธีการทางอ้อมที่เกี่ยวข้องกับข้อห้ามของการลด cytochrome C ที่
550 nm สำหรับ 1 นาที( mccord และ fridovich 1969 ) การตอบสนองที่บัฟเฟอร์ใน final
ซึ่งจะช่วยลดระดับเสียงของ 1 มล.มีอยู่ 50 มม.,โปแตสเซียมฟอสเฟต Buffer ( PH 7.8 ), 0.1 มม.
edta , 10 มม. cytochrome C , 0.05 มม. hypoxanthine , supernatant และ 1.87 หมู่/ ML
xanthine oxidase . กิจกรรมสอดอยู่ได้แสดงออกมาเป็นชุดมก./ P .กิจกรรม GST
วัดได้โดย absorbance เพิ่มขึ้นที่ 340 NM เป็นผลมาจากที่ผัน(คำกริยา)ของ
ซึ่งจะช่วยลด glutathione (คุณลักษณะเฉพาะของ Su )และ cdnb ( 1 - chloro -2,4 - dinitrobenzene )( habig et al .,
ค.ศ. 1974 )และหน่วยเป็นมิลลิโมล/มก. prot /นาที บัฟเฟอร์สำหรับการตอบสนองที่มีอยู่ 100 มม.
,โปแตสเซียมฟอสเฟต Buffer ( PH 7.4 )คุณลักษณะเฉพาะของ Su supernatant 1 มม.และ 1 มม.ที่อยู่ใน cdnb final
ซึ่งจะช่วยลดระดับเสียงของ 1 มล. ระดับคุณลักษณะเฉพาะของ Su อยู่วัดต่อไปนี้วิธีการที่ของ beutler
ตามมาตรฐานet al .( 1963 ). บัฟเฟอร์สำหรับการตอบสนองที่อยู่ในโซลูชัน 0.3 ม.นา 2 hpo 4 supernatant
และ 0.5 มม. dtnb (กรด 5,50
- dithiobis 2 - nitrobenzoic )ในระดับเสียงที่ final 5 มล. คุณลักษณะเฉพาะของ Su
มีหน่วยวัดเป็นความแตกต่างในค่า absorbance ตัวอย่าง
ซึ่งจะช่วยในการมีอยู่และการขาด dtnb ที่ 412 นิวตันเมตร คุณลักษณะเฉพาะของ Su จะคำนวณมูลค่าเป็นโปรตีนมก.
คุณลักษณะเฉพาะของ Su / nmol เนื้อหาโปรตีนของ homogenates ที่ถูกกำหนดโดย
ตามมาตรฐานวิธีการของ' s Lowry et al . ( 1951 )โดยใช้ไข่ขาวเจลมาสก์มอยเจอร์ไรเซอร์วัวอีกเป็นอุปกรณ์มาตรฐานที่.