- ข้อความ
- ประวัติศาสตร์
Histology and electron microscopyFo
Histology and electron microscopy
For LM, a mid-sagittal cut was performed on infected shrimp
which were then fixed in Davidsons’ seawater fixative for 24 h,
processed routinely for histology, sectioned at 5 lm and stained
with haemotoxylin and eosin (H&E), Giemsa, and Chromotrope
2R modified trichrome (Weber et al., 1992). For TEM, small pieces
(2 mm3) of hepatopancreatic tissue from the same shrimp specimens
were fixed in 2.5% glutaraldehyde and 4% paraformaldehyde,
or 6% glutaraldehyde, in Millonig buffer followed by washing in
three changes of 0.1 M sodium cacodylate buffer and stained en
bloc in 0.5% aqueous uranyl acetate for 1 h. The fixed tissues were
embedded in epoxy resin 812 (Agar Scientific-pre-mix kit 812) following
dehydration through a graded acetone series. Thick sections
were stained with Toluidine Blue for viewing with a light microscope
to identify sections with suitable target areas. Ultra thin sections
(70–90 nm) of these samples were mounted on uncoated
copper grids and stained with uranyl acetate and Reynolds’ lead
citrate. Sections were examined using a JEOL 1210 transmission
electron microscope.
2.3. DNA extraction, PCR and sequencing
Total DNA was extracted from the hepatopancreas using a commercial
tissue extraction kit (Qiagen, Germany). DNA was amplified
using PCR primers designed from the alignment of 11
microsporidian SSU rRNA gene sequences at GenBank in such a
manner that the primers were based in highly conserved regions
of the gene but amplified a fragment from a highly variable region.
The primers were MF1 (forward) 50-CCG GAG AGG GAG CCT GAG
A-30 and MR1 (reverse) 50-GAC GGG CGG TGT GTA CAA A-30 , relative
to positions 242–260 and 1165–1183, respectively, of the
small subunit (SSU) rRNA gene of Enterocytozoon bieneusi (Genbank
accession No. AF024657). Based on the 11 sequences used, expected
amplicons would be in the range of approximately 900–
1000 bp. The PCR process was carried out in 50 lm reaction mixtures
containing PCR buffer, 200 mM dNTP, 2 mMMgCl2, 1.25 units
Taq polymerase, 1 mM primers and 1 ll template. Reactions were
followed by 35 cycles of denaturation for 30 s at 94 C, annealing
for 30 s at 55 C, and extension at 72 C for 90 s, followed by a 5-
min final extension at 72 C. An SSU fragment of 1200 bp in length
was amplified and inserted into a TOPO Cloning Kit (Invitrogen,
USA). Plasmids were checked for inclusion of the desired insert
and subsequently purified with NucleoSpin Extract Kit (Qiagen,
Germany). Following hybridization with shrimp genomic DNA,
clones that did not show signals were further processed for DNA
sequence determination (Macrogen, South Korea). The insert from
one of these clones (final length 848 bp minus the primer sequences)
gave high sequence identity to microsporidian rRNA sequences
in the GenBank database using a BLASTn (http://
www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST) search and was sequenced from
both strands. It was aligned with sequences of other microsporidians
in the database using CLUSTALW 1.7 multiple alignment software
(Thompson et al., 1994). The phylogenic tree was constructed
using CLUSTAL W 1.75 program with the microsporidian Amblyospora
canadensis as an out-group since Amblyospora is from Clade 1
of the microsporidians (Vossbrinck and Debrunner-Vossbrinck,
2005). Tree topology was evaluated by bootstrap analysis using
the neighbour joining method with the program parameter set
for 1000 replicates.
For LM, a mid-sagittal cut was performed on infected shrimp
which were then fixed in Davidsons’ seawater fixative for 24 h,
processed routinely for histology, sectioned at 5 lm and stained
with haemotoxylin and eosin (H&E), Giemsa, and Chromotrope
2R modified trichrome (Weber et al., 1992). For TEM, small pieces
(2 mm3) of hepatopancreatic tissue from the same shrimp specimens
were fixed in 2.5% glutaraldehyde and 4% paraformaldehyde,
or 6% glutaraldehyde, in Millonig buffer followed by washing in
three changes of 0.1 M sodium cacodylate buffer and stained en
bloc in 0.5% aqueous uranyl acetate for 1 h. The fixed tissues were
embedded in epoxy resin 812 (Agar Scientific-pre-mix kit 812) following
dehydration through a graded acetone series. Thick sections
were stained with Toluidine Blue for viewing with a light microscope
to identify sections with suitable target areas. Ultra thin sections
(70–90 nm) of these samples were mounted on uncoated
copper grids and stained with uranyl acetate and Reynolds’ lead
citrate. Sections were examined using a JEOL 1210 transmission
electron microscope.
2.3. DNA extraction, PCR and sequencing
Total DNA was extracted from the hepatopancreas using a commercial
tissue extraction kit (Qiagen, Germany). DNA was amplified
using PCR primers designed from the alignment of 11
microsporidian SSU rRNA gene sequences at GenBank in such a
manner that the primers were based in highly conserved regions
of the gene but amplified a fragment from a highly variable region.
The primers were MF1 (forward) 50-CCG GAG AGG GAG CCT GAG
A-30 and MR1 (reverse) 50-GAC GGG CGG TGT GTA CAA A-30 , relative
to positions 242–260 and 1165–1183, respectively, of the
small subunit (SSU) rRNA gene of Enterocytozoon bieneusi (Genbank
accession No. AF024657). Based on the 11 sequences used, expected
amplicons would be in the range of approximately 900–
1000 bp. The PCR process was carried out in 50 lm reaction mixtures
containing PCR buffer, 200 mM dNTP, 2 mMMgCl2, 1.25 units
Taq polymerase, 1 mM primers and 1 ll template. Reactions were
followed by 35 cycles of denaturation for 30 s at 94 C, annealing
for 30 s at 55 C, and extension at 72 C for 90 s, followed by a 5-
min final extension at 72 C. An SSU fragment of 1200 bp in length
was amplified and inserted into a TOPO Cloning Kit (Invitrogen,
USA). Plasmids were checked for inclusion of the desired insert
and subsequently purified with NucleoSpin Extract Kit (Qiagen,
Germany). Following hybridization with shrimp genomic DNA,
clones that did not show signals were further processed for DNA
sequence determination (Macrogen, South Korea). The insert from
one of these clones (final length 848 bp minus the primer sequences)
gave high sequence identity to microsporidian rRNA sequences
in the GenBank database using a BLASTn (http://
www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST) search and was sequenced from
both strands. It was aligned with sequences of other microsporidians
in the database using CLUSTALW 1.7 multiple alignment software
(Thompson et al., 1994). The phylogenic tree was constructed
using CLUSTAL W 1.75 program with the microsporidian Amblyospora
canadensis as an out-group since Amblyospora is from Clade 1
of the microsporidians (Vossbrinck and Debrunner-Vossbrinck,
2005). Tree topology was evaluated by bootstrap analysis using
the neighbour joining method with the program parameter set
for 1000 replicates.
0/5000
Histology and electron microscopy
For LM, a mid-sagittal cut was performed on infected shrimp
which were then fixed in Davidsons’ seawater fixative for 24 h,
processed routinely for histology, sectioned at 5 lm and stained
with haemotoxylin and eosin (H&E), Giemsa, and Chromotrope
2R modified trichrome (Weber et al., 1992). For TEM, small pieces
(2 mm3) of hepatopancreatic tissue from the same shrimp specimens
were fixed in 2.5% glutaraldehyde and 4% paraformaldehyde,
or 6% glutaraldehyde, in Millonig buffer followed by washing in
three changes of 0.1 M sodium cacodylate buffer and stained en
bloc in 0.5% aqueous uranyl acetate for 1 h. The fixed tissues were
embedded in epoxy resin 812 (Agar Scientific-pre-mix kit 812) following
dehydration through a graded acetone series. Thick sections
were stained with Toluidine Blue for viewing with a light microscope
to identify sections with suitable target areas. Ultra thin sections
(70–90 nm) of these samples were mounted on uncoated
copper grids and stained with uranyl acetate and Reynolds’ lead
citrate. Sections were examined using a JEOL 1210 transmission
electron microscope.
2.3. DNA extraction, PCR and sequencing
Total DNA was extracted from the hepatopancreas using a commercial
tissue extraction kit (Qiagen, Germany). DNA was amplified
using PCR primers designed from the alignment of 11
microsporidian SSU rRNA gene sequences at GenBank in such a
manner that the primers were based in highly conserved regions
of the gene but amplified a fragment from a highly variable region.
The primers were MF1 (forward) 50-CCG GAG AGG GAG CCT GAG
A-30 and MR1 (reverse) 50-GAC GGG CGG TGT GTA CAA A-30 , relative
to positions 242–260 and 1165–1183, respectively, of the
small subunit (SSU) rRNA gene of Enterocytozoon bieneusi (Genbank
accession No. AF024657). Based on the 11 sequences used, expected
amplicons would be in the range of approximately 900–
1000 bp. The PCR process was carried out in 50 lm reaction mixtures
containing PCR buffer, 200 mM dNTP, 2 mMMgCl2, 1.25 units
Taq polymerase, 1 mM primers and 1 ll template. Reactions were
followed by 35 cycles of denaturation for 30 s at 94 C, annealing
for 30 s at 55 C, and extension at 72 C for 90 s, followed by a 5-
min final extension at 72 C. An SSU fragment of 1200 bp in length
was amplified and inserted into a TOPO Cloning Kit (Invitrogen,
USA). Plasmids were checked for inclusion of the desired insert
and subsequently purified with NucleoSpin Extract Kit (Qiagen,
Germany). Following hybridization with shrimp genomic DNA,
clones that did not show signals were further processed for DNA
sequence determination (Macrogen, South Korea). The insert from
one of these clones (final length 848 bp minus the primer sequences)
gave high sequence identity to microsporidian rRNA sequences
in the GenBank database using a BLASTn (http://
www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST) search and was sequenced from
both strands. It was aligned with sequences of other microsporidians
in the database using CLUSTALW 1.7 multiple alignment software
(Thompson et al., 1994). The phylogenic tree was constructed
using CLUSTAL W 1.75 program with the microsporidian Amblyospora
canadensis as an out-group since Amblyospora is from Clade 1
of the microsporidians (Vossbrinck and Debrunner-Vossbrinck,
2005). Tree topology was evaluated by bootstrap analysis using
the neighbour joining method with the program parameter set
for 1000 replicates.
For LM, a mid-sagittal cut was performed on infected shrimp
which were then fixed in Davidsons’ seawater fixative for 24 h,
processed routinely for histology, sectioned at 5 lm and stained
with haemotoxylin and eosin (H&E), Giemsa, and Chromotrope
2R modified trichrome (Weber et al., 1992). For TEM, small pieces
(2 mm3) of hepatopancreatic tissue from the same shrimp specimens
were fixed in 2.5% glutaraldehyde and 4% paraformaldehyde,
or 6% glutaraldehyde, in Millonig buffer followed by washing in
three changes of 0.1 M sodium cacodylate buffer and stained en
bloc in 0.5% aqueous uranyl acetate for 1 h. The fixed tissues were
embedded in epoxy resin 812 (Agar Scientific-pre-mix kit 812) following
dehydration through a graded acetone series. Thick sections
were stained with Toluidine Blue for viewing with a light microscope
to identify sections with suitable target areas. Ultra thin sections
(70–90 nm) of these samples were mounted on uncoated
copper grids and stained with uranyl acetate and Reynolds’ lead
citrate. Sections were examined using a JEOL 1210 transmission
electron microscope.
2.3. DNA extraction, PCR and sequencing
Total DNA was extracted from the hepatopancreas using a commercial
tissue extraction kit (Qiagen, Germany). DNA was amplified
using PCR primers designed from the alignment of 11
microsporidian SSU rRNA gene sequences at GenBank in such a
manner that the primers were based in highly conserved regions
of the gene but amplified a fragment from a highly variable region.
The primers were MF1 (forward) 50-CCG GAG AGG GAG CCT GAG
A-30 and MR1 (reverse) 50-GAC GGG CGG TGT GTA CAA A-30 , relative
to positions 242–260 and 1165–1183, respectively, of the
small subunit (SSU) rRNA gene of Enterocytozoon bieneusi (Genbank
accession No. AF024657). Based on the 11 sequences used, expected
amplicons would be in the range of approximately 900–
1000 bp. The PCR process was carried out in 50 lm reaction mixtures
containing PCR buffer, 200 mM dNTP, 2 mMMgCl2, 1.25 units
Taq polymerase, 1 mM primers and 1 ll template. Reactions were
followed by 35 cycles of denaturation for 30 s at 94 C, annealing
for 30 s at 55 C, and extension at 72 C for 90 s, followed by a 5-
min final extension at 72 C. An SSU fragment of 1200 bp in length
was amplified and inserted into a TOPO Cloning Kit (Invitrogen,
USA). Plasmids were checked for inclusion of the desired insert
and subsequently purified with NucleoSpin Extract Kit (Qiagen,
Germany). Following hybridization with shrimp genomic DNA,
clones that did not show signals were further processed for DNA
sequence determination (Macrogen, South Korea). The insert from
one of these clones (final length 848 bp minus the primer sequences)
gave high sequence identity to microsporidian rRNA sequences
in the GenBank database using a BLASTn (http://
www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST) search and was sequenced from
both strands. It was aligned with sequences of other microsporidians
in the database using CLUSTALW 1.7 multiple alignment software
(Thompson et al., 1994). The phylogenic tree was constructed
using CLUSTAL W 1.75 program with the microsporidian Amblyospora
canadensis as an out-group since Amblyospora is from Clade 1
of the microsporidians (Vossbrinck and Debrunner-Vossbrinck,
2005). Tree topology was evaluated by bootstrap analysis using
the neighbour joining method with the program parameter set
for 1000 replicates.
การแปล กรุณารอสักครู่..
Histology and electron microscopy
For LM, a mid-sagittal cut was performed on infected shrimp
which were then fixed in Davidsons’ seawater fixative for 24 h,
processed routinely for histology, sectioned at 5 lm and stained
with haemotoxylin and eosin (H&E), Giemsa, and Chromotrope
2R modified trichrome (Weber et al., 1992). For TEM, small pieces
(2 mm3) of hepatopancreatic tissue from the same shrimp specimens
were fixed in 2.5% glutaraldehyde and 4% paraformaldehyde,
or 6% glutaraldehyde, in Millonig buffer followed by washing in
three changes of 0.1 M sodium cacodylate buffer and stained en
bloc in 0.5% aqueous uranyl acetate for 1 h. The fixed tissues were
embedded in epoxy resin 812 (Agar Scientific-pre-mix kit 812) following
dehydration through a graded acetone series. Thick sections
were stained with Toluidine Blue for viewing with a light microscope
to identify sections with suitable target areas. Ultra thin sections
(70–90 nm) of these samples were mounted on uncoated
copper grids and stained with uranyl acetate and Reynolds’ lead
citrate. Sections were examined using a JEOL 1210 transmission
electron microscope.
2.3. DNA extraction, PCR and sequencing
Total DNA was extracted from the hepatopancreas using a commercial
tissue extraction kit (Qiagen, Germany). DNA was amplified
using PCR primers designed from the alignment of 11
microsporidian SSU rRNA gene sequences at GenBank in such a
manner that the primers were based in highly conserved regions
of the gene but amplified a fragment from a highly variable region.
The primers were MF1 (forward) 50-CCG GAG AGG GAG CCT GAG
A-30 and MR1 (reverse) 50-GAC GGG CGG TGT GTA CAA A-30 , relative
to positions 242–260 and 1165–1183, respectively, of the
small subunit (SSU) rRNA gene of Enterocytozoon bieneusi (Genbank
accession No. AF024657). Based on the 11 sequences used, expected
amplicons would be in the range of approximately 900–
1000 bp. The PCR process was carried out in 50 lm reaction mixtures
containing PCR buffer, 200 mM dNTP, 2 mMMgCl2, 1.25 units
Taq polymerase, 1 mM primers and 1 ll template. Reactions were
followed by 35 cycles of denaturation for 30 s at 94 C, annealing
for 30 s at 55 C, and extension at 72 C for 90 s, followed by a 5-
min final extension at 72 C. An SSU fragment of 1200 bp in length
was amplified and inserted into a TOPO Cloning Kit (Invitrogen,
USA). Plasmids were checked for inclusion of the desired insert
and subsequently purified with NucleoSpin Extract Kit (Qiagen,
Germany). Following hybridization with shrimp genomic DNA,
clones that did not show signals were further processed for DNA
sequence determination (Macrogen, South Korea). The insert from
one of these clones (final length 848 bp minus the primer sequences)
gave high sequence identity to microsporidian rRNA sequences
in the GenBank database using a BLASTn (http://
www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST) search and was sequenced from
both strands. It was aligned with sequences of other microsporidians
in the database using CLUSTALW 1.7 multiple alignment software
(Thompson et al., 1994). The phylogenic tree was constructed
using CLUSTAL W 1.75 program with the microsporidian Amblyospora
canadensis as an out-group since Amblyospora is from Clade 1
of the microsporidians (Vossbrinck and Debrunner-Vossbrinck,
2005). Tree topology was evaluated by bootstrap analysis using
the neighbour joining method with the program parameter set
for 1000 replicates.
For LM, a mid-sagittal cut was performed on infected shrimp
which were then fixed in Davidsons’ seawater fixative for 24 h,
processed routinely for histology, sectioned at 5 lm and stained
with haemotoxylin and eosin (H&E), Giemsa, and Chromotrope
2R modified trichrome (Weber et al., 1992). For TEM, small pieces
(2 mm3) of hepatopancreatic tissue from the same shrimp specimens
were fixed in 2.5% glutaraldehyde and 4% paraformaldehyde,
or 6% glutaraldehyde, in Millonig buffer followed by washing in
three changes of 0.1 M sodium cacodylate buffer and stained en
bloc in 0.5% aqueous uranyl acetate for 1 h. The fixed tissues were
embedded in epoxy resin 812 (Agar Scientific-pre-mix kit 812) following
dehydration through a graded acetone series. Thick sections
were stained with Toluidine Blue for viewing with a light microscope
to identify sections with suitable target areas. Ultra thin sections
(70–90 nm) of these samples were mounted on uncoated
copper grids and stained with uranyl acetate and Reynolds’ lead
citrate. Sections were examined using a JEOL 1210 transmission
electron microscope.
2.3. DNA extraction, PCR and sequencing
Total DNA was extracted from the hepatopancreas using a commercial
tissue extraction kit (Qiagen, Germany). DNA was amplified
using PCR primers designed from the alignment of 11
microsporidian SSU rRNA gene sequences at GenBank in such a
manner that the primers were based in highly conserved regions
of the gene but amplified a fragment from a highly variable region.
The primers were MF1 (forward) 50-CCG GAG AGG GAG CCT GAG
A-30 and MR1 (reverse) 50-GAC GGG CGG TGT GTA CAA A-30 , relative
to positions 242–260 and 1165–1183, respectively, of the
small subunit (SSU) rRNA gene of Enterocytozoon bieneusi (Genbank
accession No. AF024657). Based on the 11 sequences used, expected
amplicons would be in the range of approximately 900–
1000 bp. The PCR process was carried out in 50 lm reaction mixtures
containing PCR buffer, 200 mM dNTP, 2 mMMgCl2, 1.25 units
Taq polymerase, 1 mM primers and 1 ll template. Reactions were
followed by 35 cycles of denaturation for 30 s at 94 C, annealing
for 30 s at 55 C, and extension at 72 C for 90 s, followed by a 5-
min final extension at 72 C. An SSU fragment of 1200 bp in length
was amplified and inserted into a TOPO Cloning Kit (Invitrogen,
USA). Plasmids were checked for inclusion of the desired insert
and subsequently purified with NucleoSpin Extract Kit (Qiagen,
Germany). Following hybridization with shrimp genomic DNA,
clones that did not show signals were further processed for DNA
sequence determination (Macrogen, South Korea). The insert from
one of these clones (final length 848 bp minus the primer sequences)
gave high sequence identity to microsporidian rRNA sequences
in the GenBank database using a BLASTn (http://
www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST) search and was sequenced from
both strands. It was aligned with sequences of other microsporidians
in the database using CLUSTALW 1.7 multiple alignment software
(Thompson et al., 1994). The phylogenic tree was constructed
using CLUSTAL W 1.75 program with the microsporidian Amblyospora
canadensis as an out-group since Amblyospora is from Clade 1
of the microsporidians (Vossbrinck and Debrunner-Vossbrinck,
2005). Tree topology was evaluated by bootstrap analysis using
the neighbour joining method with the program parameter set
for 1000 replicates.
การแปล กรุณารอสักครู่..
และเนื้อเยื่อ กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอน
สำหรับ LM , แซกตัดกลางมีการติดเชื้อกุ้ง
ซึ่งได้รับการแก้ไขแล้วใน Davidsons ' น้ำทะเลฟิกเซทีฟ 24 H ,
การประมวลผลตรวจสำหรับเนื้อเยื่อแบ่ง 5 อิมกับ haemotoxylin และ eosin คราบ
( H & E ) , จิมซา และ chromotrope
2R ดัดแปลงเทคนิค ( เวเบอร์ et al . , 1992 ) สำหรับทีมเล็กชิ้น
( 2 มม. ) ของ hepatopancreatic เนื้อเยื่อจากตัวอย่างกุ้ง
ถูกกำหนดในแบบดี 2.5 % และ 4 % พาราฟอร์มาลดิไฮด์ หรือ 6 %
, กลูตารัลดีไฮด์ ใน millonig บัฟเฟอร์ตามด้วยล้าง
3 การเปลี่ยนแปลงของ 0.1 โมลาร์โซเดียมเฟอร์คราบ EN
จากนั้นนำหมู่ 0.5% สารละลายยูเรนิลอะซิเตต เป็นเวลา 1 ชั่วโมง เนื้อเยื่อถาวรคือ
ฝังตัวอยู่ในอีพอกซีเรซิน 812 ( วุ้นทางวิทยาศาสตร์ก่อนผสมชุด 812 ) ต่อไปนี้
ผ่านระดับ dehydration ) ชุด ความหนาส่วน
ถูกย้อมด้วยโทลูอิดีนสีฟ้าสำหรับการดูด้วยกล้องจุลทรรศน์แบบแสง
ระบุส่วนที่มีพื้นที่เป้าหมายที่เหมาะสม พิเศษบางส่วน
( 70 – 90 nm ) ของตัวอย่างเหล่านี้ถูกติดตั้งบนกริดและย้อมด้วยสีเคลือบ
ทองแดงและตะกั่วอะซิเตทยูเรนิล Reynolds '
ซิเตรต . ส่วนมีการใช้จอลส่ง
ห๊ากล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอน .
2.3 การสกัด DNA PCR DNA sequencing
และรวมสารสกัดจากตับและตับอ่อนใช้ในเชิงพาณิชย์
เนื้อเยื่อการสกัดชุด ( เพิ่ม , เยอรมัน ) ดีเอ็นเอโดยใช้ PCR ไพรเมอร์ที่ออกแบบมาจาก
แนว 11 ไมโครสปอริเดียนซื่อ rRNA ลำดับยีนที่พบในเช่น
ลักษณะที่ใช้ในสูง โดยบริเวณอนุรักษ์
อัตราของยีน แต่ขยายส่วนจากตัวแปรอย่างสูงในภูมิภาค โดย mf1
( ต่อ ) 50-ccg แก๊ก มุขมุข
a-30 agg ซีซี และ mr1 ( ย้อนกลับ ) 50-gac GGG CGG TGT GTA caa a-30 สัมพัทธ์
ตำแหน่ง 242 – 260 และ 1009 – 945 ตามลำดับของ
ใบเล็ก ( ซื่อ ) rRNA ยีนของ enterocytozoon bieneusi ( ขนาด
สนธิไม่ af024657 ) ตามคาด
11 ลำดับ ใช้amplicons จะอยู่ในช่วงประมาณ 900 -
1 , 000 BP . กระบวนการ PCR พบว่าใน 50 โดยปฏิกิริยาผสม
ที่มี PCR buffer , 200 มม. dntp 2 mmmgcl2 1.25 หน่วย
แทคใช้ไพรเมอร์ 1 มม. และ 1 จะแม่แบบ ปฏิกิริยา
ตาม 3 รอบ ( 30 s ที่ 94 C annealing
30 S 55 C , และส่วนขยายที่ 72 นาน 90 วินาที ตามด้วย 5 -
Min สุดท้ายนามสกุลที่ 72 C เป็นซื่อเบสของ 1200 BP ในความยาว
คืออัตรา และแทรกลงในสถานที่การโคลนนิ่ง Kit ( Invitrogen
, USA ) พลาสมิดถูกตรวจสอบสำหรับการรวมของที่ต้องการแทรก
และต่อมาให้บริสุทธิ์ด้วยชุดสกัด ( เพิ่ม
nucleospin , เยอรมนี ) ต่อไปนี้ hybridization กับดีเอ็นเอกุ้ง
โคลนที่ไม่ได้แสดงสัญญาณได้นำดีเอ็นเอ
การกำหนดลำดับ ( macrogen , เกาหลีใต้ ) แทรกจาก
หนึ่งของโคลนเหล่านี้ ( สุดท้ายความยาว 848 BP ลบรองพื้นลำดับ )
ให้ตัวตนลำดับสูงกับไมโครสปอริเดียน rRNA ลำดับ
ในขนาดฐานข้อมูลโดยใช้ blastn ( http : / /
www.ncbi . nlm . NIH . gov / ระเบิด ) ค้นหาและลำดับจาก
ทั้งเส้น . มันสอดคล้องกับลำดับของ microsporidians
อื่น ๆในฐานข้อมูลโดยใช้ clustalw 1.7 หลายแนวซอฟต์แวร์
( Thompson et al . , 1994 ) ต้นไม้วิวัฒนาการถูกสร้างขึ้นโดยใช้ clustal
w 1.75 กับโปรแกรมไมโครสปอริเดียน amblyospora
canadensis เป็นกลุ่มตั้งแต่ amblyospora จาก clade 1
ของ microsporidians ( vossbrinck และ debrunner vossbrinck
, 2005 ) เครือข่ายแบบต้นไม้ที่ประเมินโดยการวิเคราะห์โดยใช้
บูเพื่อนบ้านร่วมวิธีกับพารามิเตอร์โปรแกรม
1000 ชุด ได้แก่
สำหรับ LM , แซกตัดกลางมีการติดเชื้อกุ้ง
ซึ่งได้รับการแก้ไขแล้วใน Davidsons ' น้ำทะเลฟิกเซทีฟ 24 H ,
การประมวลผลตรวจสำหรับเนื้อเยื่อแบ่ง 5 อิมกับ haemotoxylin และ eosin คราบ
( H & E ) , จิมซา และ chromotrope
2R ดัดแปลงเทคนิค ( เวเบอร์ et al . , 1992 ) สำหรับทีมเล็กชิ้น
( 2 มม. ) ของ hepatopancreatic เนื้อเยื่อจากตัวอย่างกุ้ง
ถูกกำหนดในแบบดี 2.5 % และ 4 % พาราฟอร์มาลดิไฮด์ หรือ 6 %
, กลูตารัลดีไฮด์ ใน millonig บัฟเฟอร์ตามด้วยล้าง
3 การเปลี่ยนแปลงของ 0.1 โมลาร์โซเดียมเฟอร์คราบ EN
จากนั้นนำหมู่ 0.5% สารละลายยูเรนิลอะซิเตต เป็นเวลา 1 ชั่วโมง เนื้อเยื่อถาวรคือ
ฝังตัวอยู่ในอีพอกซีเรซิน 812 ( วุ้นทางวิทยาศาสตร์ก่อนผสมชุด 812 ) ต่อไปนี้
ผ่านระดับ dehydration ) ชุด ความหนาส่วน
ถูกย้อมด้วยโทลูอิดีนสีฟ้าสำหรับการดูด้วยกล้องจุลทรรศน์แบบแสง
ระบุส่วนที่มีพื้นที่เป้าหมายที่เหมาะสม พิเศษบางส่วน
( 70 – 90 nm ) ของตัวอย่างเหล่านี้ถูกติดตั้งบนกริดและย้อมด้วยสีเคลือบ
ทองแดงและตะกั่วอะซิเตทยูเรนิล Reynolds '
ซิเตรต . ส่วนมีการใช้จอลส่ง
ห๊ากล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอน .
2.3 การสกัด DNA PCR DNA sequencing
และรวมสารสกัดจากตับและตับอ่อนใช้ในเชิงพาณิชย์
เนื้อเยื่อการสกัดชุด ( เพิ่ม , เยอรมัน ) ดีเอ็นเอโดยใช้ PCR ไพรเมอร์ที่ออกแบบมาจาก
แนว 11 ไมโครสปอริเดียนซื่อ rRNA ลำดับยีนที่พบในเช่น
ลักษณะที่ใช้ในสูง โดยบริเวณอนุรักษ์
อัตราของยีน แต่ขยายส่วนจากตัวแปรอย่างสูงในภูมิภาค โดย mf1
( ต่อ ) 50-ccg แก๊ก มุขมุข
a-30 agg ซีซี และ mr1 ( ย้อนกลับ ) 50-gac GGG CGG TGT GTA caa a-30 สัมพัทธ์
ตำแหน่ง 242 – 260 และ 1009 – 945 ตามลำดับของ
ใบเล็ก ( ซื่อ ) rRNA ยีนของ enterocytozoon bieneusi ( ขนาด
สนธิไม่ af024657 ) ตามคาด
11 ลำดับ ใช้amplicons จะอยู่ในช่วงประมาณ 900 -
1 , 000 BP . กระบวนการ PCR พบว่าใน 50 โดยปฏิกิริยาผสม
ที่มี PCR buffer , 200 มม. dntp 2 mmmgcl2 1.25 หน่วย
แทคใช้ไพรเมอร์ 1 มม. และ 1 จะแม่แบบ ปฏิกิริยา
ตาม 3 รอบ ( 30 s ที่ 94 C annealing
30 S 55 C , และส่วนขยายที่ 72 นาน 90 วินาที ตามด้วย 5 -
Min สุดท้ายนามสกุลที่ 72 C เป็นซื่อเบสของ 1200 BP ในความยาว
คืออัตรา และแทรกลงในสถานที่การโคลนนิ่ง Kit ( Invitrogen
, USA ) พลาสมิดถูกตรวจสอบสำหรับการรวมของที่ต้องการแทรก
และต่อมาให้บริสุทธิ์ด้วยชุดสกัด ( เพิ่ม
nucleospin , เยอรมนี ) ต่อไปนี้ hybridization กับดีเอ็นเอกุ้ง
โคลนที่ไม่ได้แสดงสัญญาณได้นำดีเอ็นเอ
การกำหนดลำดับ ( macrogen , เกาหลีใต้ ) แทรกจาก
หนึ่งของโคลนเหล่านี้ ( สุดท้ายความยาว 848 BP ลบรองพื้นลำดับ )
ให้ตัวตนลำดับสูงกับไมโครสปอริเดียน rRNA ลำดับ
ในขนาดฐานข้อมูลโดยใช้ blastn ( http : / /
www.ncbi . nlm . NIH . gov / ระเบิด ) ค้นหาและลำดับจาก
ทั้งเส้น . มันสอดคล้องกับลำดับของ microsporidians
อื่น ๆในฐานข้อมูลโดยใช้ clustalw 1.7 หลายแนวซอฟต์แวร์
( Thompson et al . , 1994 ) ต้นไม้วิวัฒนาการถูกสร้างขึ้นโดยใช้ clustal
w 1.75 กับโปรแกรมไมโครสปอริเดียน amblyospora
canadensis เป็นกลุ่มตั้งแต่ amblyospora จาก clade 1
ของ microsporidians ( vossbrinck และ debrunner vossbrinck
, 2005 ) เครือข่ายแบบต้นไม้ที่ประเมินโดยการวิเคราะห์โดยใช้
บูเพื่อนบ้านร่วมวิธีกับพารามิเตอร์โปรแกรม
1000 ชุด ได้แก่
การแปล กรุณารอสักครู่..
ภาษาอื่น ๆ
การสนับสนุนเครื่องมือแปลภาษา: กรีก, กันนาดา, กาลิเชียน, คลิงออน, คอร์สิกา, คาซัค, คาตาลัน, คินยารวันดา, คีร์กิซ, คุชราต, จอร์เจีย, จีน, จีนดั้งเดิม, ชวา, ชิเชวา, ซามัว, ซีบัวโน, ซุนดา, ซูลู, ญี่ปุ่น, ดัตช์, ตรวจหาภาษา, ตุรกี, ทมิฬ, ทาจิก, ทาทาร์, นอร์เวย์, บอสเนีย, บัลแกเรีย, บาสก์, ปัญจาป, ฝรั่งเศส, พาชตู, ฟริเชียน, ฟินแลนด์, ฟิลิปปินส์, ภาษาอินโดนีเซี, มองโกเลีย, มัลทีส, มาซีโดเนีย, มาราฐี, มาลากาซี, มาลายาลัม, มาเลย์, ม้ง, ยิดดิช, ยูเครน, รัสเซีย, ละติน, ลักเซมเบิร์ก, ลัตเวีย, ลาว, ลิทัวเนีย, สวาฮิลี, สวีเดน, สิงหล, สินธี, สเปน, สโลวัก, สโลวีเนีย, อังกฤษ, อัมฮาริก, อาร์เซอร์ไบจัน, อาร์เมเนีย, อาหรับ, อิกโบ, อิตาลี, อุยกูร์, อุสเบกิสถาน, อูรดู, ฮังการี, ฮัวซา, ฮาวาย, ฮินดี, ฮีบรู, เกลิกสกอต, เกาหลี, เขมร, เคิร์ด, เช็ก, เซอร์เบียน, เซโซโท, เดนมาร์ก, เตลูกู, เติร์กเมน, เนปาล, เบงกอล, เบลารุส, เปอร์เซีย, เมารี, เมียนมา (พม่า), เยอรมัน, เวลส์, เวียดนาม, เอสเปอแรนโต, เอสโทเนีย, เฮติครีโอล, แอฟริกา, แอลเบเนีย, โคซา, โครเอเชีย, โชนา, โซมาลี, โปรตุเกส, โปแลนด์, โยรูบา, โรมาเนีย, โอเดีย (โอริยา), ไทย, ไอซ์แลนด์, ไอร์แลนด์, การแปลภาษา.
- I used to cry as kid but I don't now.
- ฉันไม่ได้รับการคัดเลือกในครั้งนี้ฉันไม่ร
- Introduction of arrival hall
- เมื่อกรองออกมาแล้วใช้ได้เลยไม่ต้องมีส่วน
- ฉันจะไปทำไม
- sex ทำให้ฉันรู้สึกว่าเราได้เชื่อมติดกันเ
- ขออนุญาตพูดภาษาอังกฤษกับคุณ
- Phytostanol contents were detected at am
- Lowor undetectable brassicasterol conten
- I'm sorry, but do not ask her to come ba
- And in the frosty season, when the sun W
- Games are very good for one ; on the oth
- 行動
- - เกษตรกรมีที่ดินเป็นของตัวเองต้องเช่าที
- unmöglich
- start at you
- ข้อดีเมื่อกรองออกมาแล้วใช้ได้เลยไม่ต้องม
- รายการ
- คุณาธิป ปิ่นประดับ หรือ นิก เกิดเมื่อวัน
- เกิดเมื่อวันที่ 22 เมษายน พ.ศ. 2537 นักแ
- I was never angry with you
- dictionary entry
- ข้อดีเมื่อกรองออกมาแล้วใช้ได้เลยไม่ต้องม
- Objective: To assess the effect of a 12-
