AbstractTo differentiate prenatal e

Abstract

To differentiate prenatal effects of plasmid growth hormone-releasing hormone (GHRH) treatment from maternal effects mediated by lactation on long-term growth of offspring, a cross-fostering study was designed. Pregnant sows (n = 12) were untreated (n = 6) or received either a Wt-GHRH (n = 2) or HV-GHRH (n = 4) plasmid. At birth, half of each litter was cross-fostered (treated to controls and controls to treated only). Piglets from plasmid-injected sows were heavier at birth (HV-GHRH, 1.65 ± 0.07 kg; Wt-GHRH, 1.46 ± 0.05 kg vs. Controls, 1.27 ± 0.03 kg; P ≥ 0.001) and at weaning (Wt-GHRH, 6.01 ± 0.21 kg and HV-GHRH, 6.34 ± 0.15 kg vs. Controls, 5.37 ± 0.14 kg; P ≥ 0.02, respectively). Control piglets cross-fostered to plasmid-injected sows grew faster to weaning (Wt-GHRH, 5.61 ± 0.15 kg and HV-GHRH, 5.70 ± 0.29 kg vs. Controls, 5.08 ± 0.22 kg; P > 0.05, respectively). Piglets from plasmid-injected sows that suckled on control sows were larger than control piglets on control sows (Wt-GHRH, 5.93 ± 0.20 kg and HV-GHRH, 6.2 ± 0.19 kg vs. Controls, 5.08 ± 0.22 kg; P > 0.05, respectively), but smaller than their littermates left on their treated mothers. The observed improvements were maintained until the end of the study when the offspring were 170-day-old. The results suggest that the improved growth of offspring of GHRH plasmid-treated sows pre-weaning is attributable to improved maternal performance, while after weaning the effects on the pituitary component are relevant.







Keywords
Electroporation;
Gene therapy;
Growth hormone releasing hormone;
Plasmid;
Swine


1. Introduction

A gene therapy approach in combination with electroporation (EP) offers an alternative or complimentary approach to conventional treatment strategies for modulation of growth, development and health. Indeed, we have previously demonstrated that the single administration of a commercially available plasmid that encodes a growth hormone-releasing hormone (GHRH) (LifeTide™SW5), when administered to pregnant sows increased survival and production parameters in their offspring for three sequential parities [1]. Furthermore, we have shown that plasmid GHRH administration with half of the dose previously used alone or in combination with porcine somatotrophin (pST) was effective in improving survivability and production parameters (Person, in review, BMC Vet. Res.).

It is likely that multiple mechanisms are responsible for these effects of increased maternal GHRH production on offspring survival and growth. The GHRH/growth hormone (GH)/insulin-like growth factor-I (IGF-I) axis plays an important role in the regulation of growth and development [2], as well as in the physiology of pregnancy and lactation [3]. In previous studies, we have shown that there is transplacental transfer of GHRH from mother to fetus that can directly impact fetal development [4]. We have also demonstrated that in the offspring of plasmid GHRH-treated pregnant animals there is a change in pituitary lineage as demonstrated by an increased number of somatotrophs and lactotrophs [5], without pituitary hyperplasia. It is also known that GHRH treatment improves lactation [6] and we have shown that the injection of cows with plasmid GHRH results in improved lactation performance [7]. However, the extent to which the improved growth and survivability of the offspring is attributable to improvements in maternal physiology during pregnancy and lactation vs. those resulting from the changes to the offspring themselves is uncertain.

In order to differentiate between the effects of plasmid GHRH administration on the mother vs. the indirect effects on offspring we carried out a cross-fostering study in which offspring born to treated sows were cross-fostered to untreated control sows at birth and vice versa. The offspring were then followed to 170 days of age when they were euthanized and body compositions compared. We demonstrate that administration of plasmid GHRH to gestating gilts improved offspring survival and body composition and that this could be attributed to both a prenatal benefit on offspring intrauterine growth and development, and improved post-natal performance linked to better maternal lactation performance.

2. Materials and methods

2.1. Animals and study design

This study followed 140 pigs born to 12 first parity sows of which six served as untreated controls, two were treated with a plasmid encoding the wild-type GHRH peptide (Wt-GHRH), and four were administered a plasmid encoding a protease-resistant GHRH (HV-GHRH) [8]. The dam line was from a commercially available Landrace X Yorkshire crossbred female mated to a commercial terminal line Duroc crossbred boar. Newborn piglets were subdivided into a total of seven groups according to the cross-fostering plan summarized in Table 1. At birth, approximately half of each litter was cross-fostered, so that treated and control sows nursed both their own offspring and offspring from an alternative treatment (i.e. half the piglets from four control sows were replaced with piglets from the four HV-GHRH-treated sows and vice versa and half the piglets from the remaining two control sows received half the litter of the two Wt-GHRH-treated sows and vice versa). Sows were housed in groups of 6–8 animals per pen during the gestation period and then individually in farrowing crates during lactation. At birth piglets were tagged for identification. Males were castrated at 5–7 days of age. Piglets were suckled until they were 21 days of age, when they were weaned and group housed in pens. The offspring were weighed at birth and at routine intervals until the end of the study when they were 170-days-old. All studies were carried out at a Research and Development farm (Burton, TX) and animals were maintained in accordance with National Institutes of Health Guide, U.S. Department of Agriculture, and Animal Welfare Act guidelines.



Table 1.
Grouping of cross-fostered offspring. There were 6 control sows with 63 offspring, 2 Wt-GHRH-treated sows with 18 offspring and 4 HV-GHRH-treated sows with 42 offspring. Of the control offspring, 15 were cross-fostered to Wt-GHRH and 17 were cross-fostered to HV-GHRH sows; the remaining 31 stayed within their treatment group. Of the Wt-GHRH offspring 10 were cross-fostered to control sows; the remaining 8 stayed within their treatment group. Of the HV-GHRH offspring 22 were cross-fostered to control sows; the remaining 20 stayed within their treatment group.






Groups

Sow treatment

Cross-fostered to:


1 Control Control
2 Control Wt-GHRH
3 Control HV-GHRH
4 Wt-GHRH Wt-GHRH
5 Wt-GHRH Control
6 HV-GHRH HV-GHRH
7 HV-GHRH Control

Table options








2.2. Diet and food intake

All diets were fed ad libitum (base mixes from Suidae, Greensburg, Indiana, mixed at Ludemann Grocery and Mill, Brenham, Texas). The sows were fed a gestation diet containing 14% protein from the time they were treated until parturition. After parturition, the sows were transferred to a lactation diet containing 16% protein. For the offspring, a creep-feed diet of 23% protein with high lysine was introduced 1 week prior to weaning and maintained until 4–5 days after weaning. A prestarter diet of 21% protein was then introduced for a period of 10 days, followed by a starter diet of 18% protein until the offspring reached approximately 20 kg. The animals were then maintained on a grower diet of 16% protein until the end of the study. Food intake was measured per pen and is calculated over a 106-day period from study days 64–170.

2.3. DNA construct

The myogenic plasmid expressing porcine GHRH was previously described [1] and [9]. Briefly, plasmid expression was driven from a muscle-specific SPc5-12 synthetic promoter [10]. Wild-type porcine GHRH cDNA was cloned into the BamHI/HindIII sites of pSPc5-12, to generate pSP-GHRH [8]. The 3′ polyadenylation and untranslated region of human (h)GH was cloned downstream of GHRH cDNA. The plasmid was produced under good manufacturing practices (GMP) (VGX Pharmaceuticals, Inc., The Woodlands, TX) and formulated in sterile water for injection with 1% HPLC purified low molecular weight poly-l-glutamate sodium salt. To obtain pSP-HV-GHRH, the porcine GHRH cDNA modified to render the resulting peptide (HV-GHRH) more protease resistant and extend its half-life, was cloned into the BamHI/HindIII sites of pSP-GHRH, followed by the 3′-untranslated region and poly(A) signal of the hGH gene. HV-GHRH is a GHRH analog with amino acids His1 and Val2 substituted with Tyr1 and Ala2, Gly15 substituted with Ala15, and Met27 and Ser28 with Leu27 and Asn28

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

บทคัดย่อการศึกษาข้ามอุปถัมภ์ถูกออกแบบเพื่อแบ่งแยกผลก่อนคลอดของ plasmid ปล่อยฮอร์โมนเจริญเติบโตฮอร์โมน (GHRH) รักษาจากผลแม่ mediated โดยด้านการให้นมในการเติบโตของลูกหลาน Sows ตั้งครรภ์ (n = 12) ถูกไม่ถูกรักษา (n = 6) หรือได้รับ Wt GHRH (n = 2) หรือ HV GHRH (n = 4) plasmid แรกเกิด ครึ่งแต่ละกระบะได้ข้ามเด็ก ๆ (ถือว่าการควบคุมและควบคุมการปฏิบัติเท่านั้น) ทรูดจาก sows ฉีด plasmid ถูกหนักแรกเกิด (GHRH HV, 1.65 ± 0.07 กิโลกรัม Wt-GHRH, 1.46 ± 0.05 kg เทียบกับควบคุม 1.27 ± 0.03 กก. P ≥ 0.001) และ ในการ weaning (Wt-GHRH, 6.01 ± 0.21 kg และ HV-GHRH, 6.34 ± 0.15 กิโลกรัมเปรียบเทียบกับตัวควบคุม 5.37 ± 0.14 kg ≥ P 0.02 ตามลำดับ) ควบคุมทรูดข้ามเด็ก ๆ ไปฉีด plasmid sows เติบโตเร็วการ weaning (Wt-GHRH, 5.61 ± 0.15 กิโลกรัมและ HV-GHRH แบบ 5.70 ± 0.29 กก.เทียบกับควบคุม 5.08 ± 0.22 กิโลกรัม P > 0.05 ตามลำดับ) ทรูดจาก sows ฉีด plasmid ที่ suckled บน sows ควบคุมได้มากกว่าทรูดควบคุมบนตัวควบคุม sows (Wt-GHRH, 5.93 ± 0.20 กก.และ HV-GHRH, 6.2 ± 0.19 กิโลกรัมเทียบกับควบคุม 5.08 ± 0.22 กิโลกรัม P > 0.05 ตามลำดับ), แต่มีขนาดเล็กกว่า littermates ของพวกเขาซ้ายบนแม่การบำบัด ปรับปรุงสังเกตได้รักษาจนจบการศึกษาเมื่อลูกหลานมีอายุ 170 วัน ผลการแนะนำในการปรับปรุงการเจริญเติบโตของลูกหลานของ GHRH รับ plasmid sows weaning ก่อนว่ารวมเพื่อปรับปรุงประสิทธิภาพแม่ ในขณะที่หลังจาก weaning ผลการคอมโพเนนต์การค้นที่เกี่ยวข้องคำสำคัญElectroporation ยีนบำบัด ปล่อยฮอร์โมน ฮอร์โมนการเจริญเติบโต Plasmid สุกร1. บทนำวิธีการรักษาด้วยยีนร่วมกับ electroporation (EP) มีวิธีการอื่น หรือฟรีกลยุทธ์แซลมอนเอ็มของการเจริญเติบโต พัฒนา และสุขภาพ แน่นอน เรามีก่อนหน้านี้แสดงว่า บริหารเดียวของ plasmid ใช้ได้ในเชิงพาณิชย์ที่จแมปการปล่อยฮอร์โมนเจริญเติบโตฮอร์โมน (GHRH) (LifeTide ™ SW5), เมื่อจัดการ sows ตั้งครรภ์เพิ่มความอยู่รอดและผลิตพารามิเตอร์ในลูกหลานของพวกเขาสำหรับ parities สามตามลำดับ [1] นอกจากนี้ เราได้แสดงว่า plasmid GHRH จัดการกับครึ่งหนึ่ง ของปริมาณที่เคย ใช้คนเดียว หรือรวมกับช่วง somatotrophin (pST) มีประสิทธิภาพในการปรับปรุงพารามิเตอร์ดันและผลิตคน ใน เรื่องน่ารู้ของบีเอ็มซี Res)เป็นไปได้ที่หลายกลไกรับผิดชอบเหล่านี้ผลของการเพิ่มผลิต GHRH แม่ลูกหลานอยู่รอดและเจริญเติบโต ฮอร์โมน GHRH การเติบโต (GH) / อินซูลินเช่นปัจจัยการเจริญเติบโต-ฉัน (IGF-ฉัน) แกนมีบทบาทสำคัญ ในข้อบังคับของการเจริญเติบโตและการพัฒนา [2], รวม ทั้ง ในสาขาสรีรวิทยาของการตั้งครรภ์และด้านการให้นม [3] ในการศึกษาก่อนหน้านี้ เราได้แสดงว่า มี transplacental โอนย้ายของ GHRH จากแม่ไปอ่อนที่สามารถส่งผลกระทบโดยตรงและทารกในครรภ์พัฒนา [4] เรามียังแสดงว่า ในลูกหลานของ GHRH รักษาสัตว์ตั้งครรภ์ plasmid มีเป็นการเปลี่ยนแปลงในลินเนจใต้สมองโดยการเพิ่มจำนวน somatotrophs และ lactotrophs [5], โดยการเจริญเกินค้น เป็นที่รู้จักว่า GHRH รักษาปรับปรุงด้านการให้นม [6] และเราได้แสดงให้เห็นว่า การฉีดวัวมี plasmid GHRH ส่งผลประสิทธิภาพด้านการให้นมดีขึ้น [7] อย่างไรก็ตาม ขอบเขตที่เจริญเติบโตดีขึ้นและดันของลูกหลานรวมปรับปรุงในสรีรวิทยาของแม่ในระหว่างตั้งครรภ์ และด้านการให้นมกับที่เกิดกับลูกหลานตัวเองจากการเปลี่ยนแปลงไม่แน่นอนเพื่อแยกความแตกต่างระหว่างผลของ plasmid GHRH ดูแลบนแม่เทียบกับผลกระทบทางอ้อมกับลูกหลานที่เราดำเนินการศึกษาข้ามทำนุบำรุงในลูกหลานที่เกิดมา บำบัด sows ถูกข้ามเด็ก ๆ จะไม่ถูกรักษาควบคุม sows ที่เกิด และในทางกลับกัน ลูกหลานแล้วตามวันที่ 170 ของอายุเมื่อพวกเขาได้ euthanized และร่างกายเท่าที่เปรียบเทียบ เราแสดงให้เห็นถึงการจัดการของ plasmid GHRH ไป gestating แม่สุกรลูกหลานดีขึ้นอยู่รอด และองค์ประกอบของร่างกาย และว่า นี้อาจเกิดจากสวัสดิการทั้งก่อนคลอดลูกหลาน intrauterine เจริญเติบโตและพัฒนา ปรับปรุงประสิทธิภาพการทำงานเกี่ยวกับการเกิดหลังกับประสิทธิภาพด้านการให้นมแม่2. วัสดุและวิธีการ2.1. สัตว์และการออกแบบการศึกษาศึกษาตาม 140 สุกรเกิด sows 12 แรกพาริตี้ของหกซึ่งเป็นตัวควบคุมไม่ถูกรักษา 2 ได้รับการรักษา มี plasmid ที่เข้ารหัสเพปไทด์ GHRH ชนิดป่า (Wt-GHRH), และสี่ได้จัดการ plasmid ที่เข้ารหัส GHRH รติเอสทน (HV-GHRH) [8] เส้นดำจากการใช้ได้ในเชิงพาณิชย์แม่ X ยอร์คเชียร์เพศหญิงผลิต mated กับหมูผลิต Duroc รายการค้าเทอร์มินัลได้ ทารกทรูดมีปฐมภูมิเป็นจำนวน 7 กลุ่มตามแผนการทำนุบำรุงข้ามสรุปในตารางที่ 1 แรกเกิด ประมาณครึ่งหนึ่งของแต่ละแคร่มีข้ามเด็ก ๆ นั้นถือว่า และควบคุม sows nursed ทั้งตัวเองลูกหลานและลูกหลานจากการรักษาทางเลือก (เช่นครึ่งทรูดจากควบคุมสี่ sows ถูกแทนที่ ด้วยทรูด sows HV-GHRH-ถือว่าสี่ และในทางกลับกันและทรูดครึ่งจาก sows ควบคุมสองเหลือรับครึ่งแคร่ sows Wt-GHRH-ถือสอง และในทางกลับกัน) Sows ได้ห้องพักในกลุ่มของสัตว์ 6 – 8 ต่อปากกาช่วงครรภ์ และจากนั้น ในแต่ละ farrowing ลังในด้านการให้นม ที่เกิด ทรูดมีแท็กสำหรับการระบุ ชายมีตอนที่ 5 – 7 วันของอายุ ทรูดมี suckled จน กระทั่งพวกเขาอายุ 21 วัน เมื่อมีการหย่านมถึงกลุ่มแห่งปากกา ลูกหลานมีน้ำหนัก แรกเกิด และ ในช่วงเวลาประจำจนจบการศึกษาเมื่อพวกเขาอายุ 170 วัน ศึกษาทั้งหมดได้ดำเนินการในการวิจัย และพัฒนาฟาร์ม (เบอร์ตัน TX) และสัตว์ที่รักษาตามแนวทางสถาบันแห่งชาติเพื่อสุขภาพแนะนำ กรมวิชาการ เกษตรสหรัฐฯ และพระราช บัญญัติสวัสดิการสัตว์ตารางที่ 1 การจัดกลุ่มของขนเด็ก ๆ ลูกหลาน มี 6 sows ควบคุม ด้วยลูกหลาน 63, sows Wt-GHRH-ถือว่า 2 กับ 18 ลูกหลานและ sows HV-GHRH-ถือ 4 กับลูกหลานที่ 42 ลูกหลานควบคุม 15 ได้ข้ามเด็ก ๆ จะละเว้น GHRH และ 17 มีเด็ก ๆ ข้ามไป HV GHRH sows 31 ที่เหลืออยู่ภายในกลุ่มการรักษา Wt-GHRH ลูกหลาน 10 มีเด็ก ๆ ข้ามการควบคุม sows 8 ที่เหลืออยู่ภายในกลุ่มการรักษา ของ HV GHRH 22 ลูกหลานถูกเด็ก ๆ ข้ามการควบคุม sows 20 ที่เหลืออยู่ภายในกลุ่มการรักษากลุ่มรักษาเสาเด็ก ๆ ขนเพื่อ:ควบคุมควบคุม 1 ควบคุม 2 Wt GHRH ควบคุม 3 HV GHRH 4 wt-GHRH Wt GHRH ควบคุม 5 wt-GHRH HV 6-GHRH HV GHRH ควบคุม 7 HV-GHRH ตัวเลือกตาราง2.2. อาหาร และรับประทานอาหารอาหารทั้งหมดถูกเลี้ยง ad libitum (พื้นฐานออกแบบผสมผสานจาก Suidae, Greensburg, Indiana ผสมใน Ludemann ร้านขายของชำและโรงสี สติ เท็กซัส) Sows ถูกเลี้ยงครรภ์อาหารที่ประกอบด้วยโปรตีน 14% จากเวลาที่พวกเขาได้รับการรักษาจนกระทั่ง parturition หลัง parturition, sows ถูกโอนย้ายไปที่ด้านการให้นมอาหารที่ประกอบด้วยโปรตีน 16% สำหรับลูกหลาน อาหารคืบอาหารโปรตีน 23% มีไลซีนสูงถูกนำ 1 สัปดาห์ก่อนการ weaning และรักษาจนถึง 4 – 5 วันหลังจากการ weaning อาหาร prestarter โปรตีน 21% ถูกนำมาใช้เป็นระยะเวลา 10 วัน ตาม ด้วย starter อาหารโปรตีน 18% จนลูกหลานถึงประมาณ 20 กิโลกรัมแล้ว แล้วสัตว์มีอยู่ในอาหาร grower โปรตีน 16% จนจบการศึกษา รับประทานอาหารที่วัดต่อปากกา และคำนวณระยะเวลา 106 วันที่จากศึกษา 64 – 170 วัน2.3. ดีเอ็นเอก่อสร้างPlasmid myogenic ที่แสดง GHRH ช่วงอธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [1] และ [9] สั้น ๆ นิพจน์ plasmid ถูกขับเคลื่อนจากการกล้ามเนื้อเฉพาะ SPc5 12 สังเคราะห์โปรโมเตอร์ [10] ชนิดป่าช่วง GHRH cDNA ถูกโคลนลงในเว็บไซต์ BamHI/HindIII pSPc5-12 สร้าง pSP-GHRH [8] 3′ polyadenylation และภูมิภาค untranslated มนุษย์ (h) ที่พักถูกโคลนปลายน้ำของ GHRH cDNA Plasmid ถูกผลิตภายใต้แนวทางการผลิตที่ดี (GMP) (VGX Pharmaceuticals, Inc. เดอะวู้ดแลนด์ TX) และสูตรน้ำกระบอกสำหรับฉีดด้วยเกลือ 1% HPLC บริสุทธิ์น้ำหนักโมเลกุลต่ำโซเดียมโพลี-l-glutamate รับ pSP HV GHRH, cDNA GHRH ช่วงปรับเปลี่ยนผลลัพธ์ได้เพปไทด์ (HV-GHRH) ทนมากขึ้นรติเอส และขยายของ half-life ถูกโคลนลงในเว็บไซต์ BamHI/HindIII ของ pSP GHRH ตาม 3′ untranslated ภูมิภาคและ poly(A) สัญญาณของยีน hGH HV GHRH เป็นแอนะล็อก GHRH กับกรดอะมิโน His1 Val2 แทน ด้วย Tyr1 และ Ala2, Gly15 แทน Ala15, Met27 และ Ser28 Leu27 และ Asn28

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

บทคัดย่อเพื่อแยกความแตกต่างของผลกระทบก่อนคลอดพลาสมิดฮอร์โมนปล่อยฮอร์โมนการเจริญเติบโต (GHRH) การรักษาจากผลกระทบของมารดาผู้ไกล่เกลี่ยโดยการให้นมบุตรต่อการเจริญเติบโตในระยะยาวของลูกหลานมีการศึกษาข้ามอุปถัมภ์ได้รับการออกแบบ แม่สุกรตั้งครรภ์ (n = 12) ได้รับการรักษา (n = 6) หรือได้รับทั้ง WT-GHRH (n = 2) หรือ HV-GHRH (n = 4) พลาสมิด ที่เกิดครึ่งหนึ่งของแต่ละครอกข้ามส่งเสริม (ได้รับการรักษากับการควบคุมและการควบคุมที่จะได้รับการรักษาเท่านั้น) ลูกสุกรจากแม่สุกรฉีดพลาสมิดมีน้ำหนักแรกเกิด (HV-GHRH, 1.65 ± 0.07 กิโลกรัม WT-GHRH, 1.46 ± 0.05 กิโลกรัมเมื่อเทียบกับการควบคุม, 1.27 ± 0.03 กิโลกรัม P ≥ 0.001) และหย่านม (WT-GHRH, 6.01 ± 0.21 กิโลกรัมและ HV-GHRH, 6.34 ± 0.15 กิโลกรัมเมื่อเทียบกับการควบคุม, 5.37 ± 0.14 กิโลกรัม P ≥ 0.02 ตามลำดับ) ลูกสุกรควบคุมข้ามเพื่อส่งเสริมสุกรพลาสมิดฉีดขยายตัวเร็วกว่าที่จะหย่านม (WT-GHRH, 5.61 ± 0.15 กิโลกรัมและ HV-GHRH, 5.70 ± 0.29 กิโลกรัมเมื่อเทียบกับการควบคุม, 5.08 ± 0.22 กิโลกรัม P> 0.05 ตามลำดับ) ลูกสุกรจากแม่สุกรฉีดพลาสมิดที่ดูดแม่สุกรในการควบคุมมีขนาดใหญ่กว่าลูกสุกรสุกรควบคุมในการควบคุม (WT-GHRH, 5.93 ± 0.20 กิโลกรัมและ HV-GHRH 6.2 ± 0.19 กิโลกรัมเมื่อเทียบกับการควบคุม, 5.08 ± 0.22 กิโลกรัม P> 0.05, ตามลำดับ) แต่มีขนาดเล็กกว่า littermates ของพวกเขาที่เหลืออยู่บนแม่ของพวกเขาได้รับการรักษา การปรับปรุงที่สังเกตได้รับการดูแลจนจบการศึกษาเมื่อลูกหลานมี 170 วันเก่า ผลการวิจัยแนะนำว่าการเจริญเติบโตที่ดีขึ้นของลูกหลานของ GHRH แม่สุกรพลาสมิดที่ได้รับก่อนหย่านมคือส่วนที่เป็นผลการดำเนินงานของมารดาที่ดีขึ้นในขณะที่หลังจากหย่านมผลกระทบในส่วนต่อมใต้สมองมีความเกี่ยวข้อง. คำElectroporation; ยีนบำบัดฮอร์โมนการเจริญเติบโตของการปล่อยฮอร์โมน; พลาสมิด; สุกร1 การแนะนำวิธียีนบำบัดร่วมกับ electroporation (EP) มีทางเลือกหรือวิธีฟรีกลยุทธ์การรักษาแบบเดิมสำหรับการปรับการเจริญเติบโตของการพัฒนาและสุขภาพ แท้จริงเราได้แสดงให้เห็นก่อนหน้านี้ว่าการบริหารงานเดียวของพลาสมิดใช้ได้ในเชิงพาณิชย์ที่ encodes ฮอร์โมนฮอร์โมนปล่อยการเจริญเติบโต (GHRH) (LifeTide ™ SW5) เมื่อบริหารให้กับแม่สุกรตั้งครรภ์เพิ่มขึ้นอยู่รอดและพารามิเตอร์การผลิตในลูกหลานของพวกเขาสาม parities ลำดับ [ 1] นอกจากนี้เราได้แสดงให้เห็นการบริหารงานของพลาสมิด GHRH กับครึ่งหนึ่งของปริมาณที่ใช้ก่อนหน้านี้เพียงอย่างเดียวหรือใช้ร่วมกับ somatotrophin สุกร (PST) มีประสิทธิภาพในการปรับปรุงการอยู่รอดและพารามิเตอร์การผลิต (คนในการตรวจสอบ, สัตวแพทย์บีเอ็มซี. Res.). มันอาจเป็นไป กลไกที่หลายมีความรับผิดชอบในผลกระทบเหล่านี้ผลิต GHRH มารดาที่เพิ่มขึ้นในการอยู่รอดและการเจริญเติบโตของลูกหลาน ฮอร์โมน GHRH / การเจริญเติบโต (GH) / อินซูลินเช่นปัจจัยผมเจริญเติบโต (IGF-I) แกนมีบทบาทสำคัญในการควบคุมของการเจริญเติบโตและการพัฒนา [2], เช่นเดียวกับในสรีรวิทยาของการตั้งครรภ์และให้นม [3] . ในการศึกษาก่อนหน้านี้เราได้แสดงให้เห็นว่ามีการโอน transplacental ของ GHRH จากแม่ไปสู่ทารกในครรภ์ที่โดยตรงสามารถส่งผลกระทบการพัฒนาของทารกในครรภ์ [4] เราได้แสดงให้เห็นว่าในลูกหลานของพลาสมิด GHRH รับการรักษาสัตว์ที่ตั้งครรภ์มีการเปลี่ยนแปลงในสายเลือดต่อมใต้สมองที่แสดงให้เห็นโดยจำนวนที่เพิ่มขึ้นของ somatotrophs และ lactotrophs [5] โดยไม่ต้อง hyperplasia ต่อมใต้สมอง เป็นที่รู้จักกันว่าการรักษา GHRH ช่วยเพิ่มการหลั่งน้ำนม [6] และเราได้แสดงให้เห็นว่าการฉีดของวัวที่มีผลพลาสมิด GHRH ในการปฏิบัติงานให้นมบุตรที่ดีขึ้น [7] แต่ขอบเขตที่การเจริญเติบโตที่ดีขึ้นและความอยู่รอดของลูกหลานเป็นผลพวงจากการปรับปรุงในสรีรวิทยาของมารดาในระหว่างตั้งครรภ์และให้นมบุตรกับผู้ที่รับผลกระทบจากการเปลี่ยนแปลงเพื่อให้ลูกหลานของตัวเองคือความไม่แน่นอน. เพื่อที่จะแยกความแตกต่างระหว่างผลกระทบของพลาสมิดบริหาร GHRH ในแม่กับผลกระทบทางอ้อมต่อลูกหลานของเราดำเนินการศึกษาข้ามอุปถัมภ์ลูกหลานที่เกิดมาเพื่อรับการรักษาที่ถูกแม่สุกรข้ามส่งเสริมการควบคุมแม่สุกรได้รับการรักษาที่เกิดและในทางกลับกัน ลูกหลานตามมาแล้วถึง 170 วันอายุเมื่อพวกเขาถูก euthanized และองค์ประกอบร่างกายเมื่อเทียบ เราแสดงให้เห็นว่าการบริหารงานของพลาสมิด GHRH สุกรเพื่อการอยู่รอดที่ดีขึ้น gestating ลูกหลานและองค์ประกอบของร่างกายและที่นี้อาจจะประกอบไปทั้งก่อนคลอดเป็นประโยชน์ในการเจริญเติบโตของลูกหลานของมดลูกและการพัฒนาและผลการดำเนินงานหลังคลอดที่ดีขึ้นเชื่อมโยงกับผลการดำเนินงานที่ดีกว่าการให้นมมารดา. 2 วัสดุและวิธีการ2.1 สัตว์และการออกแบบการศึกษาการศึกษาครั้งนี้ใช้ 140 หมูเกิด 12 แม่สุกรเท่าเทียมกันคนแรกที่หกทำหน้าที่เป็นผู้ควบคุมการรับการรักษาทั้งสองได้รับการรักษาด้วยพลาสมิดเข้ารหัสป่าชนิดเปปไทด์ GHRH (WT-GHRH) และสี่เป็นยาเข้ารหัสพลาสมิด โปรติเอสทน GHRH (HV-GHRH) [8] บรรทัดเขื่อนมาจากใช้ได้ในเชิงพาณิชย์แลนด์เรซ X ยอร์คลูกผสมเพศหญิงแต่งงานแล้วกับขั้วสายพาณิชย์ Duroc ลูกผสมหมูป่า ลูกสุกรแรกเกิดถูกแบ่งออกเป็นทั้งหมดเจ็ดกลุ่มตามแผนข้ามอุปถัมภ์สรุปไว้ในตารางที่ 1 ที่เกิดประมาณครึ่งหนึ่งของแต่ละครอกข้ามส่งเสริมเพื่อให้ได้รับการรักษาและการควบคุมดูแลแม่สุกรทั้งลูกหลานของตัวเองและลูกหลานจาก การรักษาทางเลือก (เช่นลูกสุกรครึ่งจากสี่แม่สุกรควบคุมถูกแทนที่ด้วยลูกสุกรจากสี่ HV-GHRH รับการรักษาแม่สุกรและในทางกลับกันและลูกสุกรครึ่งหนึ่งจากที่เหลืออีกสองแม่สุกรควบคุมได้รับครึ่งหนึ่งครอกของทั้งสองแม่สุกร WT-GHRH รับการรักษา และในทางกลับกัน). แม่สุกรที่ได้รับอยู่ในกลุ่ม 6-8 ตัวต่อปากกาในช่วงระยะเวลาการตั้งครรภ์แล้วเป็นรายบุคคลในลังคลอดในช่วงให้นมบุตร ในลูกสุกรแรกเกิดถูกแท็กเพื่อระบุตัวตน เพศผู้ถูกตอนที่ 5-7 วันอายุ ลูกสุกรถูกดูดจนกว่าพวกเขา 21 วันอายุเมื่อพวกเขาถูกหย่านมและกลุ่มที่ตั้งอยู่ในปากกา ลูกหลานได้รับการชั่งน้ำหนักที่เกิดและในช่วงเวลากิจวัตรประจำวันไปจนถึงวันสิ้นสุดของการศึกษาเมื่อพวกเขา 170 วันเก่า การศึกษาทั้งหมดได้รับการดำเนินการที่ฟาร์มวิจัยและพัฒนา (เบอร์ตัน, เท็กซัส) และสัตว์ที่ได้รับการดูแลให้สอดคล้องกับสถาบันแห่งชาติของคู่มือสุขภาพกระทรวงเกษตรของสหรัฐและสวัสดิภาพสัตว์แนวทางพระราชบัญญัติ. ตารางที่ 1 การจัดกลุ่มของลูกหลานข้ามส่งเสริม แม่สุกรมี 6 การควบคุมที่มีลูกหลาน 63 คน 2 WT-GHRH รับการรักษาแม่สุกรกับ 18 ลูกและ 4 HV-GHRH รับการรักษาแม่สุกรที่มี 42 ลูกหลาน ลูกหลานควบคุม 15 ถูกข้ามส่งเสริมการ WT-GHRH และ 17 ถูกข้ามไปส่งเสริมสุกร HV-GHRH; ส่วนที่เหลืออีก 31 อยู่ในกลุ่มรักษาของพวกเขา ของ GHRH WT-10 ถูกลูกหลานข้ามส่งเสริมในการควบคุมสุกร; ส่วนที่เหลืออีก 8 อยู่ภายในกลุ่มรักษาของพวกเขา ของลูกหลาน HV-22 ถูก GHRH ข้ามส่งเสริมในการควบคุมสุกร; ส่วนที่เหลืออีก 20 อยู่ในกลุ่มรักษาของพวกเขา. กลุ่มหว่านรักษาข้ามส่งเสริมการ: 1 การควบคุมการควบคุม2 ควบคุมน้ำหนัก-GHRH 3 การควบคุม HV-GHRH 4 WT-GHRH WT-GHRH 5 WT-GHRH ควบคุม6 HV-GHRH HV-GHRH 7 HV-GHRH ควบคุมตัวเลือกตารางที่2.2 อาหารและการรับประทานอาหารอาหารทั้งหมดได้รับการเลี้ยงดูกินอย่างเต็มที่ (ผสมฐาน Suidae, กรีนอินดีแอนาผสมที่Lüdemannร้านขายของชำและมิลล์, เบรนแฮม, เท็กซัส) แม่สุกรได้รับการเลี้ยงดูการตั้งครรภ์อาหารที่มีโปรตีน 14% จากเวลาที่พวกเขาได้รับการรักษาจนคลอด หลังจากคลอด, แม่สุกรที่ถูกถ่ายโอนไปยังอาหารที่ให้นมที่มีโปรตีน 16% สำหรับลูกหลานอาหารคืบฟีดของโปรตีนที่มีไลซีนสูง 23% ได้รับการแนะนำ 1 สัปดาห์ก่อนที่จะหย่านมและการบำรุงรักษาจนกว่า 4-5 วันหลังจากหย่านม อาหาร prestarter ของโปรตีน 21% ได้รับการแนะนำจากนั้นเป็นระยะเวลา 10 วันตามด้วยการรับประทานอาหารที่เริ่มต้นของโปรตีน 18% จนถึงลูกหลานถึงประมาณ 20 กิโลกรัม สัตว์ที่ได้รับการดูแลจากนั้นในอาหารที่ปลูกของโปรตีน 16% จนกว่าจะสิ้นสุดของการศึกษา การบริโภคอาหารที่ถูกวัดต่อปากกาและมีการคำนวณในช่วงระยะเวลา 106 วันจากวันที่การศึกษา 64-170. 2.3 ดีเอ็นเอสร้างพลาสมิด myogenic แสดง GHRH สุกรถูกอธิบายไว้ก่อนหน้า [1] และ [9] สั้น ๆ , การแสดงออกของพลาสมิดได้รับแรงหนุนจากกล้ามเนื้อเฉพาะ SPc5-12 ก่อการสังเคราะห์ [10] สุกรป่าชนิด GHRH cDNA เป็นโคลนเข้าไปใน BamHI / HindIII เว็บไซต์ของ pSPc5-12 เพื่อสร้าง PSP-GHRH [8] 3 'Polyadenylation และภูมิภาคไม่ได้แปลของมนุษย์ (ซ) GH เป็นโคลนล่อง GHRH ยีน พลาสมิดที่ถูกผลิตภายใต้การปฏิบัติผลิตที่ดี (GMP) (VGX Pharmaceuticals, Inc, วู้ดแลนด์, เท็กซัส) และสูตรที่ผ่านการฆ่าเชื้อในน้ำสำหรับฉีด 1% HPLC บริสุทธิ์น้ำหนักโมเลกุลต่ำเกลือโซเดียมโพลี l-กลูตาเมต ที่จะได้รับ PSP-HV-GHRH ที่ cDNA สุกร GHRH แก้ไขเพื่อทำให้เปปไทด์ที่เกิด (HV-GHRH) โปรติเอสทนและขยายครึ่งชีวิตของตนเป็นโคลนเข้าไปใน BamHI / เว็บไซต์ HindIII ของ PSP-GHRH ตามด้วย 3 'ภูมิภาค -untranslated และโพลี (A) สัญญาณของยีน hGH HV-GHRH เป็นอะนาล็อก GHRH ที่มีกรดอะมิโนและ His1 VAL2 แทนด้วย Tyr1 และ Ala2, Gly15 แทนด้วย Ala15 และ Met27 และ Ser28 กับ Leu27 และ Asn28

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เพื่อแยกผลแบบนามธรรมของพลาสมิด ปล่อยฮอร์โมนฮอร์โมนการเจริญเติบโต ( ghrh ) การรักษา จากผลของมารดา ( โดยการให้นมต่อการเจริญเติบโตในระยะยาวของลูกหลาน ข้ามสาขาการศึกษาการออกแบบ แม่ตั้งครรภ์ ( n = 12 ) ดิบ ( n = 6 ) หรือได้รับอย่างใดอย่างหนึ่งโดย ghrh ( n = 2 ) หรือ hv-ghrh ( n = 4 ) พลาสมิด ที่ให้กำเนิดครึ่งหนึ่งของแต่ละครอกก็ข้ามบุญธรรม ( ได้รับการควบคุมและการควบคุมการปฏิบัติเท่านั้น ) ลูกสุกรแม่สุกรสายพันธุ์ฉีดหนักตั้งแต่เกิด ( hv-ghrh 1.65 , ± 0.07 กิโลกรัม น้ำหนัก ghrh , 1.46 ± 0.05 กิโลกรัมและการควบคุม , 1.27 ± 0.03 กิโลกรัม ; P ≥ 0.001 ) และเมื่อหย่านม ( WT ghrh 6.01 , ± 0.21 กิโลกรัม และ hv-ghrh , 6.34 ± 0.15 กิโลกรัมและการควบคุมนั้น± 0.14 กิโลกรัม ; P ≥ 0.02 ตามลำดับ )ตัว ควบคุมการฉีดพลาสมิด ( ข้ามแม่สุกรโตเร็วหย่านม ( WT ghrh 6.73 , ± 0.15 กิโลกรัม และ hv-ghrh , 5.70 ± 0.29 กิโลกรัมและการควบคุม , 5.08 ± 0.22 กิโลกรัม ; P > 0.05 ตามลำดับ ) ลูกสุกรในสุกรแม่สุกรที่ฉีดพลาส suckled ควบคุมมีขนาดใหญ่กว่าตัวควบคุมในการควบคุมแม่พันธุ์ ( WT ghrh 5.93 , ± 0.20 กก. และ hv-ghrh 6.2 ± 0.19 กก. และการควบคุม , 5.08 ± 0.22 กิโลกรัม ; P > 0.05 ,ตามลำดับ ) แต่มีขนาดเล็กกว่า littermates ของเขาไปรักษาแม่ และการปรับปรุงที่ถูกเก็บรักษาไว้จนกว่าจะจบการศึกษา เมื่อลูกหลานได้ 170 วันเก่า พบว่าอัตราการเจริญเติบโตของลูกสุกรก่อนหย่านมของ ghrh พลาสมิดที่ได้รับจากมารดาคือการปรับปรุงประสิทธิภาพในขณะที่หลังจากหย่านมผลในส่วนประกอบของต่อมใต้สมองเป็นคำหลักที่เกี่ยวข้อง







electroporation

; ยีนบำบัด ;

ปล่อยฮอร์โมนฮอร์โมนการเจริญเติบโต ; สายพันธุ์ ;
2


1 บทนำ

วิธียีนบำบัดร่วมกับ electroporation ( EP ) เสนอทางเลือกหรือฟรีแบบกลยุทธ์การรักษาสำหรับการเจริญเติบโต พัฒนาการ และสุขภาพแน่นอน เราเคยแสดงให้เห็นว่าการบริหารงานเดียวของในเชิงพาณิชย์ที่มีพลาสมิดที่เข้ารหัสเป็นปล่อยฮอร์โมนฮอร์โมนการเจริญเติบโต ( ghrh ) ( lifetide ™ sw5 ) เมื่อทดสอบสุกรท้องเพิ่มขึ้นการอยู่รอดและการผลิตพารามิเตอร์ในลูกหลานของพวกเขาสาม parities ลำดับ [ 1 ] นอกจากนี้เราได้แสดงให้เห็นว่าการบริหาร ghrh พลาสมิดที่มีครึ่งหนึ่งของปริมาณเดิมที่เคยใช้คนเดียวหรือใช้ร่วมกับจากโซมาโตโทรฟิน ( PST ) คือประสิทธิภาพในการปรับปรุงความสามารถการผลิตและพารามิเตอร์ ( บุคคล , รีวิว , BMC สัตวแพทย์ ศาสตร์ ) .

มันมีแนวโน้มว่า กลไกหลายอย่างมีความรับผิดชอบเหล่านี้ผลของการผลิตที่เพิ่มขึ้นของลูกหลาน ghrh การอยู่รอดและการเจริญเติบโตการ ghrh / โกรทฮอร์โมน ( กระตุ้น ) / กลุ่มการเจริญส่วนบุคคลตามการแกนมีบทบาทสำคัญในการควบคุมการเจริญเติบโตและการพัฒนา [ 2 ] เช่นเดียวกับในสรีรวิทยาของการตั้งครรภ์และการให้นม [ 3 ] ในการศึกษาก่อนหน้านี้ เราพบว่ามี transplacental โอน ghrh จากแม่สู่ทารกที่สามารถโดยตรงต่อการพัฒนาของทารกในครรภ์ [ 4 ]นอกจากนี้เรายังพบว่าพลาสมิดในลูกหลานของ ghrh รักษาสัตว์ตั้งครรภ์จะมีการเปลี่ยนแปลงในต่อมใต้สมองวงศ์ตระกูลดังที่แสดงโดยการเพิ่มจำนวนของโซมาโตรโทรฟ และแลคโทโทรฟ [ 5 ] โดยต่อมใต้สมองโต .มันเป็นที่รู้จักกันว่า การเพิ่มปริมาณ ghrh [ 6 ] และเราได้แสดงให้เห็นว่าการฉีดของวัวที่มีพลาสมิด ghrh ผลในการปรับปรุงประสิทธิภาพการให้นม [ 7 ] อย่างไรก็ตาม ขอบเขตที่ปรับปรุงการเจริญเติบโตและความอยู่รอดของลูกหลานเป็นข้อมูลในการปรับปรุงของมารดาในระหว่างการตั้งครรภ์และการให้นมกับสรีรวิทยาที่เป็นผลจากการเปลี่ยนแปลงเพื่อลูกหลานตัวเองก็ไม่แน่ใจ

เพื่อแยกความแตกต่างระหว่างผลของการบริหาร ghrh พลาสมิดที่แม่กับทางอ้อมต่อลูกหลานเราดำเนินการข้ามการศึกษาที่ลูกเกิดแม่สุกรถูกข้าม ( เพื่อควบคุมรักษาด้วยการเกิด และในทางกลับกันลูกหลานจึงตามไป 170 วันอายุเมื่อพวกเขา euthanized และองค์ประกอบร่างกายเปรียบเทียบ เราแสดงให้เห็นว่าการบริหารงานของพลาสมิด ghrh การตั้งท้องโดยการปรับปรุงลูกหลานการอยู่รอดและร่างกายและนี้อาจจะเกิดจากทั้งก่อนคลอดประโยชน์ต่อลูกหลานมดลูกการเจริญเติบโตและการพัฒนาและการปรับปรุงโพสต์ Natal การแสดงที่เชื่อมโยงกับประสิทธิภาพที่ดีขึ้นของการให้นมแม่

2 วัสดุและวิธีการ

2.1 . สัตว์และการศึกษานี้ศึกษาการออกแบบ

ตาม 140 หมูเกิดความเท่าเทียมกัน 12 สุกรแรกซึ่งทำหน้าที่ควบคุมหกและสองได้รับการรักษาที่มีพลาสมิดของ ghrh เปปไทด์การเข้ารหัส ( WT ghrh )และสี่ถูกทดสอบการเข้ารหัสพลาสติทน ghrh ( hv-ghrh ) [ 8 ] เขื่อนสายจากใช้ได้ในเชิงพาณิชย์แลนด์เรซ x หญิงแต่งงานกับยอร์คลูกผสมสถานีเชิงพาณิชย์สายลูกผสมดูร็อคหมูป่า ลูกสุกรแรกเกิดมีทั้งหมด 7 กลุ่ม ตามข้ามการวางแผนสรุปไว้ในตารางที่ 1 ที่ให้กำเนิดประมาณครึ่งหนึ่งของแต่ละครอกก็ข้าม ( เพื่อรักษาและการควบคุมระดับอนุบาลทั้งของตัวเองและลูกหลาน ลูกหลานจากการรักษาทางเลือก ( เช่นครึ่งลูกสุกรจากสี่ควบคุมแม่สุกรถูกแทนที่ด้วยลูกสุกรจากสี่ HV ghrh ปฏิบัติด้วย และในทางกลับกัน ครึ่งลูกสุกรได้รับการควบคุมจากอีกสองคนที่เหลือครึ่งครอกสอง WT ghrh รักษาสุกรและในทางกลับกัน ) แม่สุกรตั้งอยู่ในกลุ่มของ 6 – 8 สัตว์ต่อคอกในระหว่างการตั้งครรภ์แล้ว ทีในโรงเรือนไม้ในช่วงการให้น้ำนมการเกิดลูกสุกรที่ถูกแท็กเพื่อระบุตัวตน ผู้ชาย ตอนที่ 5 – 7 วันของอายุ สุกรเป็น suckled จนกระทั่ง 21 วันของอายุเมื่อหย่านม และกลุ่มตั้งอยู่ในปากกา ลูกหลานมีน้ำหนักเมื่อแรกเกิดและในช่วงเวลาปกติจนจบการศึกษาเมื่อ 170 วัน การศึกษาทดลองในการวิจัย และพัฒนาฟาร์ม ( เบอร์ตันTX ) และสัตว์ที่ถูกเก็บรักษาไว้ตามที่สถาบันสุขภาพแห่งชาติ , กรมวิชาการเกษตรของสหรัฐอเมริกาและแนวทางกฎหมายสวัสดิภาพสัตว์ .



โต๊ะ 1
ข้าม ( การจัดกลุ่มของลูกหลาน มี 6 ควบคุม 63 ลูกสุกร 2 WT ghrh รักษาลูกหลานสุกร 4 กับ 18 HV ghrh รักษาสุกร 42 ลูกหลาน ของลูกหลาน ควบคุมข้ามไป ghrh WT ( 15 ) และ ( 17 ) ข้ามไป hv-ghrh หว่าน ; เหลือ 31 อยู่ภายในกลุ่มของพวกเขา ของน้ำหนัก ghrh ลูกหลาน 10 ข้าม ( เพื่อควบคุมสุกร ; ที่เหลือ 8 อยู่ภายในกลุ่มของพวกเขา ของ hv-ghrh ลูกหลาน 22 คนข้าม ( เพื่อควบคุมสุกร ; เหลือ 20 อยู่ภายในกลุ่มของพวกเขา






กลุ่มการรักษา



หว่านข้ามบุญธรรม :


1
2 ควบคุม ควบคุมน้ำหนัก ghrh
3
4 hv-ghrh ควบคุมน้ำหนัก ghrh WT ghrh
5
6 hv-ghrh ควบคุมน้ำหนัก ghrh hv-ghrh
7

hv-ghrh ควบคุมตารางตัวเลือก








2.2 . อาหารและการบริโภคอาหาร

อาหารทั้งหมดได้รับอย่างเต็มที่ ( ฐานผสมจาก suidae Greensburg , Indiana , ผสม , ที่ ludemann ร้านขายของชำและโรงสี เบรนแฮม เท็กซัส )ที่แม่สุกรได้รับอาหารที่มีโปรตีน 14 % อายุจากเวลาที่พวกเขาได้รับการรักษาจนกระทั่งคลอด หลังคลอด , แม่สุกรไปโรงอาหารที่มีโปรตีน 16 % สำหรับลูกหลาน , คืบอาหารอาหารที่มี lysine สูง 23% โปรตีนแนะนำ 1 สัปดาห์ก่อนหย่านมและดูแลรักษาจนถึง 4 – 5 วัน หลังจากหย่านมเป็น prestarter อาหารโปรตีน 21% ก็แนะนำเป็นระยะเวลา 10 วัน ตามด้วยการเริ่มต้นอาหารโปรตีน 18 % จนกว่าลูกหลานถึงประมาณ 20 กิโลกรัม สัตว์ จึงรักษาปลูกอาหารโปรตีน 16 % จนกระทั่งจบการศึกษา อาหารที่บริโภคได้ต่อ ปากกาและคำนวณกว่า 106 วัน ระยะเวลาการศึกษาวัน 64 – 170 .

2.3 ดีเอ็นเอสร้าง

การ myogenic พลาสมิด การแสดงจาก ghrh เคยอธิบายไว้ [ 1 ] และ [ 9 ] สั้น ในการแสดงออกถูกขับเคลื่อนจากกล้ามเนื้อเฉพาะ spc5-12 สารสังเคราะห์ [ 10 ] ป่าประเภทสุกร ghrh cDNA ถูกโคลนเข้าไปในเว็บไซต์ของ pspc5-12 BamHI / - เพื่อสร้าง PSP ghrh [ 8 ] 3 ดูแลและเพิ่มเขตการแปลของมนุษย์ ( H ) ถูกโคลนของ cDNA ทาง GH ghrh .พลาสมิดที่ผลิตภายใต้การปฏิบัติที่ดีในการผลิต ( GMP ) ( vgx Pharmaceuticals , Inc . , วู้ดแลนด์ , เท็กซัส ) และสูตรน้ำสำหรับฉีดฆ่าเชื้อด้วย 1% โดยบริสุทธิ์ น้ำหนักโมเลกุลต่ำ poly-l-glutamate โซเดียมเกลือ รับ PSP HV ghrh , สายพันธุ์สุกรเพื่อแสดงผลการ ghrh เปปไทด์ ( hv-ghrh ) ติมากกว่าป้องกัน และขยายครึ่งชีวิตถูกโคลนเข้าไปในเว็บไซต์ของ PSP ghrh BamHI / - ตามด้วย 3 ’ - ภาคสาระและพอลิ ( HGH ) สัญญาณของยีน hv-ghrh เป็น ghrh อะนาล็อกกับกรดอะมิโนและ his1 val2 และทดแทนด้วย tyr1 ala2 gly15 , ทดแทนด้วย ala15 และ met27 ser28 leu27 asn28
และและกับ