Determination of amino glycosides i

Determination of amino glycosides in honey by capillary
electrophoresis tandem mass spectrometry and extraction with
molecularly imprin ted polymers
David Moreno-Gonzalez
a, Francisco J. Lara a, Nikola Jurgovska
b, Laura Gamiz-Gracia
a,
Ana M. García-Campana~ a, *
a Department of Analytical Chemistry, Faculty of Sciences, University of Granada, Av. Fuentenueva s/n, E-18071 Granada, Spain
b Charles University, Faculty of Pharmacy in Hradec Kralov

e, Prague, Checz Republic
h i g h l i g h t s g r a p h i c a l a b s t r a c t

CE-MS/MS proposed the first time for
the determination of 9 aminoglycosides in honeys.

Molecularly imprinted polymer for
the selective solid phase extraction of
analytes.

High sensitivity with limits of quantification from 1.4 to 94.8 mg kg 1.

Recoveries ranged from 88.2 to 99.8%,
with RSD lower than 8%.
a r t i c l e i n f o
Article history:
Received 24 March 2015
Received in revised form
6 August 2015
Accepted 10 August 2015
Available online xxx
Keywords:
Aminoglycosides
Capillary zone electrophoresis
Tandem mass spectrometry
Stacking
Molecularly imprinted polymers
Honey
a b s t r a c t
A new analytical method based on capillary zone electrophoresis-tandem mass spectrometry is proposed
and validated for the identification and simultaneous quantification of nine aminoglycosides in honey
samples. Detection using an ion trap mass analyzer operating in the multiple reaction monitoring mode
was used. Different parameters were optimized in order to obtain an adequate separation combined with
the highest sensitivity. In order to achieve high selectivity in the sample treatment, a commerciallyavailable molecularly imprinted polymer has been used for the solid phase extraction of the analytes.
Under optimum conditions, recoveries for fortified samples ranged from 88.2 to 99.8%, with relative
standard deviations lower than 8%. The limits of detection ranged from 0.4 to 28.5 mg kg 1. Furthermore,
the decision limit and the detection capability were evaluated, ranging from 3.5 to 60.5 mg kg 1 and from
6.0 to 103.1 mg kg 1, respectively, demonstrating the sensitivity and applicability of this fast and simple
method.
© 2015 Elsevier B.V. All rights reserved.
Abbreviations: AG, Aminoglycoside; APM, Apramycin; BGE, Background electrolyte; CZE, Capillary zone electrophoresis; CCa, Decision limit; CCb, Detection capability;
DHS, Dihydrostreptomycin; EU, European Union; FASS, Field-amplified sample stacking; GENT, Gentamicin; HFBA, Heptafluorobutyric acid; HILIC, Hydrophilic interaction
chromatography; IT, Ion trap; MRLs, Maximum residue limits; MeOH, Methanol; MIPs, Molecularly imprinted polymers; MRM, Multiple reaction monitoring; NEO,
Neomycin; PRM, Paromomycin; IPA, Isopropanol; RASFF, Rapid Alert System for Food and Feed; SPE, Solid phase extraction; MISPE, Solid phase extraction with molecularly
imprinted polymers; SPC, Spectinomycin; STP, Streptomycin.
* Corresponding author.
E-mail address: [e-mail] (A.M. García-Campana).~
Contents lists available at ScienceDirect
Analytica Chimica Acta
journal homepage: www.elsevier.com /locate/aca
http://dx.doi.org/10.1016/j.aca.2015.08.003
0003-2670/© 2015 Elsevier B.V. All rights reserved.
Analytica Chimica Acta xxx (2015) 1e8
Please cite this article in press as: D. Moreno-Gonzalez, et al., Determination of aminoglycosides in honey by capillary electrophoresis tandem

mass spectrometry and extraction with molecularly imprinted polymers, Analytica Chimica Acta (2015), http://dx.doi.org/10.1016/
j.aca.2015.08.003
1. Introduction
Aminoglycoside (AG) antibiotics are widely used in veterinary
medicine. They are commonly used to treat foulbrood infection
(caused by bacteria), and Nosema disease (caused by protozoa).
Veterinary use of antibiotics is regulated by European Union (EU)
and maximum residue limits (MRLs) have been established in
different edible parts or products derived from animals, such as
muscle, kidney, fat, liver, milk, and eggs [1]. EU does not authorize
the use of antibiotics, including AGs, in beekeeping and MRLs have
not been established for these compounds in honey, applying the
so-called “zero tolerance”. However, honey and products derived
from bees coming from non-EU countries, might be contaminated
with AG residues, which is a major concern in the honey trade [2,3].
Some studies have revealed that a substantial part of the currently
marketed honey contains residues of antibiotics [4] and since 2003,
the EU's Rapid Alert System for Food and Feed (RASFF) has regularly
alerted Member States about the presence of antibiotic residues in
these products [5].
The EU Community Reference Laboratories for veterinary residues have established “action limits” for the validation of analytical
methods in relation to the control of unauthorised analytes in
different matrixes [6]. In relation to AGs in honey, a recommended
concentration of 40 mg kg 1 has been set for streptomycin (SPT),
which involves that detection capability (CCb) for screening
methods or decision limit (CCa) for confirmatory methods should
be lower than this value.
Traditionally, high performance liquid chromatography (HPLC)
methods have been applied for the determination of AGs [7],
mainly using as detection system tandem mass spectrometry (MS/
MS) with positive electrospray ionization mode (ESI þ). However,
the high polarity of these antibiotics is a drawback for their
analysis by HPLC, as they are not retained in reverse-phase columns. Ion-pair chromatography has been proposed as an alternative to obtain a satisfactory separation of these compounds
[8e12]. Nevertheless, ion-pair chromatography requires the addition of an ion-pair reagent (mainly trifluoroacetic acid or heptafluorobutyric acid) in the mobile phase. These ion-pair reagents
are rarely volatile acids and can seriously affect the performance of
MS, causing ionization suppression of analytes and contamination
of the ion source. Hydrophilic interaction chromatography (HILIC)
has been recently proposed as an alternative to ion-pair chromatography for the analysis of AGs in honey by LC-MS [11,13e16].
However, in this methodology, a high concentration of salts in the
mobile phase is usually needed which can be detrimental for MS
detection.
Capillary electrophoresis (CE) can be an interesting alternative
to HPLC for the analysis of these compounds due to its advantages
such as short analysis time, high separation efficiency and low reagent consumption. A drawback is the absence of chromophore
groups in AGs, which prevents their determination by UV/Vis, the
most common detection method in CE. Several attempts have been
made to overcome this problem, i.e. the use of indirect UV detection
[17,18] or the application of derivatization methods to form absorbent species in the UV/Vis region [19]. Also post-column derivatization was used to apply laser induced fluorescence detection [20].
Unfortunately, these methods show poor sensitivity because of the
short optical path length and the small volume of sample injected
or involve tedious and complicated derivatization processes.
MS/MS is an alternative to improve sensitivity and selectivity in
CE, allowing the unequivocal identification of antibiotic residues
and therefore fulfilling EU regulation requirements [21]. Unfortunately, the small volume of sample injected in CE continues to be a
major constraint. In order to mitigate this problem numerous
strategies have been developed [22e24]. Among them, fieldamplified sample stacking (FASS) is one of the most effective and
simplest methods to achieve high sensitivity [25]. In FASS, the
sample solvent has conductivity lower than the background electrolyte (BGE). Therefore, when a voltage is applied, the electric field
will be higher in the sample zone than in the BGE. As a result,
analytes migrate quickly in the sample zone and slow down when
they reach the BGE, causing the “stacking” of the analytes around
the sample-BGE boundary.
Another issue that needs to be solved in the determination of
AGs is the sample preparation. It is not an easy task due to the high
polarity of AGs and their tendency to bind strongly to matrix
proteins. Most of the methods reported for the analysis of AGs in
honey involve the use of solid phase extraction (SPE) cartridges,
such as weak cation exchange [14,15], octadecyl [12] or
hydrophilic-lipophilic balance [9,16] to ensure a clean extract.
Other materials with higher selectivity, such as molecularly
imprinted polymers (MIPs) can provide cleaner extracts. MIPs are
synthetic materials with artificially generated recognition sites
able to specifically capture target molecules [26,27]. Thus, the
strong interaction between MIPs and target molecules makes
them ideal for the selective extraction of compounds at trace
levels, particularly when the sample is complex. Several reviews
show their applications in analytical chemistry [28e30]. Specifically, the use of MIPs as SPE sorbents (MISPE) for the selective
extraction of antibiotics from food samples has grown significantly
in the last few years [31e35]. Recently, Ji et al. have synthesized a
MIP sorbent for AGs using SPT as the template molecule, obtaining
satisfactory efficiency and selectivity in the analysis of honey
samples [13].
In this work, we propose a useful alternative to quantify very
low concentrations of nine AGs in honey using a recently
commercially available MIPs. The use of CE-MS/MS with FASS
preconcentration is also proposed as an approach for improving
sensitivity and selectivity. The obtained results demonstrate for the
first time the possibilities of MISPE and CE-MS/MS for the quantification of AG residues in honey.
2. Experimental
2.1. Reagents and materials
It has to be highlighted that, because of the high sorption affinity
of the AGs to polar surfaces and their high photosensitivity, polypropylene amber vessels (flasks, glass and vials) were used during
sample preparation, storage and injection.
Ultrapure water

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ความมุ่งมั่นของ glycosides อะมิโนในน้ำผึ้งโดยหลอดเลือดฝอยelectrophoresis ตัวตามกันไปรเมทและการสกัดด้วยmolecularly imprin เท็ดโพลิเมอร์David Moreno Gonzalez Lara J. Francisco a, a, b Jurgovska สเวตินิโกลา ลอร่า Gamiz Gracia เป็นเอเอ็นเอม. García Campana ~ a, *ภาควิชาเคมีวิเคราะห์ คณะวิทยาศาสตร์ มหาวิทยาลัยกรานาดา Av. Fuentenueva s/n, E-18071 กรานาดา ประเทศสเปนมหาวิทยาลัยชาร์ลส์บี คณะเภสัชศาสตร์ใน Hradec Kralov e ปราก Checz สาธารณรัฐh ฉัน g h l ฉัน g h t s g r p เป็น h ฉัน c l กับ b s t r c tครั้งแรกสำหรับการนำเสนอ CE-MS/MSกำหนด 9 aminoglycosides ใน honeysพอลิเมอร์ที่ติดตรา molecularly สำหรับการสกัดเลือกเฟสของแข็งanalytesความไวที่สูงกับขีดจำกัดของนับจาก 1.4 การมก. 94.8 กก. 1Recoveries อยู่ในช่วงจาก 88.2 99.8%มีต่ำกว่า 8% RSDr t ฉัน c l e ฉัน n f oบทความประวัติ:ได้รับ 24 2015 มีนาคมได้รับในแบบฟอร์มการปรับปรุง6 2015 สิงหาคมยอมรับ 10 2015 สิงหาคมXxx ออนไลน์พร้อมใช้งานคำสำคัญ:AminoglycosidesElectrophoresis โซนเส้นเลือดฝอยตัวตามกันไปรเมทซ้อนติดตรา molecularly โพลิเมอร์น้ำผึ้งแบบ b s t r c tมีเสนอวิธีวิเคราะห์ใหม่ตามรูพรุนโซน electrophoresis ตัวตามกันไปรเมทและตรวจนับพร้อมของเก้า aminoglycosides ในน้ำผึ้งและรหัสตัวอย่างการ ตรวจสอบโดยใช้การตรวจจับไอออนมวลในปฏิกิริยาหลายโหมดการตรวจสอบวิเคราะห์ใช้ พารามิเตอร์ต่าง ๆ ถูกปรับให้เหมาะสมเพื่อให้ได้การแยกพอรวมกับระดับความสำคัญสูงสุด เพื่อให้บรรลุใวสูงในการรักษาตัวอย่าง เมอร์ molecularly ติดตรา commerciallyavailable มีการใช้การสกัดของแข็งเฟสของ analytesภายใต้เงื่อนไขที่เหมาะสม recoveries สำหรับตัวอย่างธาตุที่อยู่ในช่วงจาก 88.2 99.8% มีญาติส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐานต่ำกว่า 8% ข้อจำกัดของการตรวจสอบที่อยู่ในช่วงจาก 0.4 ถึง 28.5 มิลลิกรัมกิโลกรัม 1 นอกจากนี้จำกัดการตัดสินใจและสามารถตรวจสอบได้ประเมิน ตั้งแต่ 3.5 มก. 60.5 กก. 1 และจาก6.0-103.1 มก.กก. 1 ตามลำดับ เห็นความไวและความเกี่ยวข้องของของง่าย และรวดเร็วนี้วิธีการ© 2015 Elsevier b.v สงวนลิขสิทธิ์ทั้งหมดตัวย่อ: AG, Aminoglycoside APM, Apramycin BGE อิเล็กโทรพื้น CZE แรงโซน electrophoresis CCa ขีดจำกัดตัดสินใจ CCb ความสามารถในการตรวจสอบDHS, Dihydrostreptomycin ยุโรป สหภาพยุโรป FASS ขยายฟิลด์อย่างซ้อน GENT, Gentamicin HFBA, Heptafluorobutyric กรด HILIC, Hydrophilic โต้ตอบchromatography มัน จับไอออน MRLs สูงสุดตกค้างจำกัด ทานอ เมทานอล MIPs, Molecularly ติดตราโพลิเมอร์ MRM ปฏิกิริยาหลายตรวจสอบ นีโอนีโอมัยซิน PRM, Paromomycin IPA, Isopropanol RASFF ระบบแจ้งเตือนอย่างรวดเร็วในอาหารและอาหาร SPE การแยกเฟสของแข็ง MISPE ทึบระยะสกัดกับ molecularlyติดตราโพลิเมอร์ SPC, Spectinomycin STP, Streptomycin* ผู้สอดคล้องกันที่อยู่อีเมล์: [e-mail] (น. García Campana) . ~เนื้อหารายการ ScienceDirectคตา Analytica Chimicaหน้าแรกของสมุดรายวัน: www.elsevier.com/ค้น หา/acahttp://dx.doi.org/10.1016/j.aca.2015.08.0030003-2670 / © 2015 Elsevier b.v สงวนลิขสิทธิ์ทั้งหมด1e8 Analytica Chimica คตา xxx (2015)กรุณาอ้างอิงบทความนี้ในข่าวเป็น: D. Moreno Gonzalez, et al. กำหนด aminoglycosides ในน้ำผึ้งโดย electrophoresis รูพรุนตัวตามกันไปmass spectrometry และสกัด ด้วย molecularly ติดตราโพลิเมอร์ Analytica Chimica คตา (2015), http://dx.doi.org/10.1016/j.aca.2015.08.0031. บทนำยา Aminoglycoside (AG) ใช้ในสัตวยา พวกเขามักจะใช้การรักษาติดเชื้อ foulbrood(เกิดจากแบคทีเรีย), Nosema โรค (โพรโทซัว) และการการใช้ยาปฏิชีวนะที่สัตวแพทย์กำหนดโดยสหภาพยุโรป (EU)และมีการสร้างสูงสุดตกค้างจำกัด (MRLs) ในส่วนการกินต่าง ๆ หรือผลิตภัณฑ์ได้มาจากสัตว์ เช่นกล้ามเนื้อ โรคไต ไขมัน ตับ นม และไข่ [1] EU ไม่อนุญาตมีการใช้ยาปฏิชีวนะ AGs รวมทั้งใน beekeeping และ MRLsไม่สร้างสารเหล่านี้ในน้ำผึ้ง ใช้การเรียกว่า "ศูนย์ยอมรับ" อย่างไรก็ตาม ที่มาของน้ำผึ้งและผลิตภัณฑ์จากผึ้งที่มาจากประเทศ EU ไม่ อาจจะปนเปื้อนมีตก AG ซึ่งเป็นเรื่องสำคัญในการค้าขายน้ำผึ้ง [2,3]บางการศึกษาได้เปิดเผยที่พบส่วนหนึ่งของอยู่ตลาดน้ำผึ้งประกอบด้วยการตกค้าง ของยาปฏิชีวนะ [4] และ ตั้งแต่ 2003มีระบบแจ้งเตือนอย่างรวดเร็วของ EU สำหรับอาหารและอาหารสัตว์ (RASFF) อย่างสม่ำเสมอรัฐสมาชิกการแจ้งเตือนเกี่ยวกับสถานะของยาปฏิชีวนะตกค้างในผลิตภัณฑ์เหล่านี้ [5]ห้องปฏิบัติการอ้างอิงในชุมชน EU สำหรับสัตวแพทย์ตกได้ก่อตั้ง "การจำกัด" สำหรับการตรวจสอบการวิเคราะห์วิธีการเกี่ยวกับการควบคุมของ analytes ไม่ได้รับอนุญาตในแตกต่างกัน matrixes [6] เกี่ยวกับ AGs ในน้ำผึ้ง การแนะนำมีการตั้งค่าความเข้มข้นของ 40 mg กก. 1 สำหรับ streptomycin (SPT),ที่เกี่ยวข้องกับการตรวจหาความ (CCb) สำหรับคัดวิธีการหรือตัดสินใจจำกัด (CCa) สำหรับวิธีการเสร็จควรได้ต่ำกว่าค่านี้ประเพณี ประสิทธิภาพสูงของเหลว chromatography (HPLC)ได้ใช้วิธีการสำหรับการกำหนดของ AGs [7],ส่วนใหญ่ใช้เป็นการตรวจสอบระบบตัวตามกันไปรเมท (MS /MS) ด้วยวิธีพ่นละอองไฟฟ้าบวก ionization โหมด (ESI þ) อย่างไรก็ตามขั้วสูงของยาเหล่านี้เป็นสำหรับพวกเขาการวิเคราะห์ ด้วย HPLC ตามที่พวกเขาไม่ได้เก็บไว้ในคอลัมน์ย้อนกลับขั้นตอน ไอออนคู่ chromatography ได้ถูกเสนอเป็นทางเลือกหนึ่งสามารถรวมหรือแยกสารเหล่านี้เป็นที่พอใจ[8e12] . อย่างไรก็ตาม chromatography ไอออนคู่ต้องการเพิ่มรีเอเจนต์ไอออนคู่ (ส่วนใหญ่ trifluoroacetic กรดหรือกรด heptafluorobutyric) ในระยะเคลื่อน Reagents คู่ไอออนเหล่านี้จะไม่ค่อยระเหยกรด และอย่างจริงจังมีผลต่อประสิทธิภาพของMS ทำให้เกิด ionization ปราบปราม analytes และปนเปื้อนแหล่งไอออน โต้ตอบ hydrophilic chromatography (HILIC)มีการเพิ่งเสนอเป็นทางเลือกคู่ไอออน chromatography สำหรับการวิเคราะห์ของ AGs ในน้ำผึ้ง โดย LC-MS [11, 13e16]อย่างไรก็ตาม ในวิธีนี้ ความเข้มข้นสูงของเกลือในการระยะเคลื่อนมักจะจำเป็นซึ่งเป็นผลดีสำหรับ MSตรวจสอบเส้นเลือดฝอย electrophoresis (CE) สามารถเป็นทางเลือกที่น่าสนใจการ HPLC ในการวิเคราะห์สารเหล่านี้เนื่องจากข้อดีของเวลาวิเคราะห์สั้น ประสิทธิภาพการแยกสูง และปริมาณการใช้รีเอเจนต์ที่ต่ำ การคืนเงินการขาดงานของ chromophoreกลุ่ม AGs ซึ่งทำให้ความมุ่งมั่นของพวกเขา โดย UV/Vis การวิธีการตรวจสอบพบมากที่สุดใน CE มีความพยายามหลายครั้งที่จะเอาชนะปัญหา ใช้ตรวจจับรังสียูวีทางอ้อมเช่น[17,18] หรือใช้วิธี derivatization เพื่อดูดซับสปีชีส์ในภูมิภาค UV/Vis [19] คอลัมน์หลัง derivatization ยัง ถูกใช้เพื่อใช้ตรวจหา fluorescence เลเซอร์เกิด [20]อับ วิธีแสดงความไวต่ำเนื่องจากการความยาวเส้นทางแสงสั้นและฉีดตัวอย่างปริมาตรเล็กหรือเกี่ยวข้องกับกระบวนการ derivatization ที่ซับซ้อน และน่าเบื่อMS/MS เป็นทางเลือกในการปรับปรุงความใวในและCE ให้รหัส unequivocal ของยาปฏิชีวนะตกค้างและดังนั้นจึง ตอบสนองความต้องการระเบียบ EU [21] อับ ปริมาณฉีดใน CE ตัวอย่างขนาดเล็กยังคงเป็นแบบข้อจำกัดสำคัญ เพื่อบรรเทาปัญหานี้จำนวนมากกลยุทธ์ได้พัฒนา [22e24] ในหมู่พวกเขา fieldamplified อย่างซ้อน (FASS) เป็นหนึ่งในที่มีประสิทธิภาพสูงสุด และวิธีที่ง่ายที่สุดเพื่อให้บรรลุความไวสูง [25] ใน FASS การตัวทำละลายตัวอย่างได้นำต่ำกว่าอิเล็กโทรพื้นหลัง (BGE) ดังนั้น เมื่อแรงดันไฟฟ้าที่ใช้ สนามไฟฟ้าจะได้สูงขึ้นในเขตตัวอย่างกว่าใน BGE เป็นผลanalytes ย้ายในโซนอย่างรวดเร็ว และช้าลงเมื่อพวกเขามาถึง BGE สาเหตุที่ "ซ้อน" ของ analytes รอบขอบเขตของตัวอย่าง BGEอีกประเด็นที่ต้องแก้ไขในการกำหนดAGs จะเตรียมตัวอย่าง ไม่ได้อย่างละเอียดเนื่องจากสูงขั้วของ AGs และแนวโน้มที่จะผูกขอกับเมทริกซ์โปรตีน ส่วนใหญ่วิธีการรายงานสำหรับการวิเคราะห์ของ AGs ในน้ำผึ้งเกี่ยวข้องกับการใช้ตลับทึบระยะสกัด (SPE)เช่นอ่อน cation exchange [14,15], octadecyl [12] หรือยอดดุล hydrophilic lipophilic [9,16] ให้สะอาดแยกวิธีสูง วัสดุอื่น ๆ เช่น molecularlyติดตราโพลิเมอร์ (MIPs) สามารถให้แยกทำความสะอาด MIPs คือวัสดุสังเคราะห์รู้เหือดสร้างไซต์สามารถจับภาพเฉพาะโมเลกุลเป้าหมาย [26,27] ดังนั้น การอันตรกิริยาอย่างเข้มระหว่าง MIPs และเป้าหมาย โมเลกุลทำให้พวกเขาเหมาะสำหรับการสกัดสารที่ติดตามงานระดับ โดยเฉพาะอย่างยิ่งเมื่อตัวอย่างมีความซับซ้อน รีวิวจากหลายแสดงโปรแกรมประยุกต์ทางเคมี [28e30] โดยเฉพาะ ใช้ของ MIPs เป็น sorbents SPE (MISPE) สำหรับการเลือกการสกัดยาปฏิชีวนะจากตัวอย่างอาหารได้เติบโตขึ้นอย่างมีนัยสำคัญในไม่กี่ปี [31e35] ล่าสุด จิ al. และได้สังเคราะห์เป็นดูดซับสำหรับ AGs ใช้ SPT เป็นโมเลกุลแม่ รับ MIPมีประสิทธิภาพเป็นที่พอใจและวิธีในการวิเคราะห์น้ำผึ้งตัวอย่าง [13]ในงานนี้ เราเสนอทางเลือกมีประโยชน์เพื่อกำหนดปริมาณมากต่ำความเข้มข้นของ AGs เก้าน้ำผึ้งใช้ได้ล่าสุดMIPs ใช้ได้ในเชิงพาณิชย์ ใช้ CE-MS/MS กับ FASSนอกจากนี้ยังมีเสนอ preconcentration เป็นวิธีการในการปรับปรุงด้วยความใวและ แสดงให้เห็นถึงผลลัพธ์ได้รับสำหรับการก่อน เวลาไป MISPE และ CE-MS/MS สำหรับนับของ AG ตกค้างในน้ำผึ้ง2. ทดลอง2.1. reagents และวัสดุยังต้องเน้นที่ เนื่องจากความสัมพันธ์ดูดสูงของ AGs photosensitivity ของพวกเขาสูงและพื้นผิวขั้วโลก polypropylene สีเหลืองอำพันเรือ (น้ำ แก้ว และ vials) ถูกใช้ในระหว่างการเตรียมตัวอย่าง จัดเก็บ และฉีดน้ำ ultrapure

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ความมุ่งมั่นของไกลโคไซด์อะมิโนในน้ำผึ้งจากเส้นเลือดฝอยอิตีคู่มวลสารและการสกัดด้วยเท็ดโมเลกุลimprin โพลิเมอร์เดวิดMoreno อนซาเลซ? ที่ฟรานซิสเจลาร่า, นิโคลา Jurgovska? ขลอร่า Gamiz-Gracia? ที่Ana M. García-Campana ~ ที่ * กรมวิเคราะห์เคมีคณะวิทยาศาสตร์มหาวิทยาลัยกรานาดา, Av Fuentenueva s / n, E-18071 กรานาดาสเปนขชาร์ลส์มหาวิทยาลัยคณะเภสัชศาสตร์ในHradec Kralov? ? อีปรากสาธารณรัฐ Checz ชั่วโมง ighlightsgraphicalabs ระบบทางเดิน? CE-MS / MS ที่นำเสนอเป็นครั้งแรกสำหรับการกำหนด9 aminoglycosides ใน honeys.? พอลิเมอตราตรึงใจโมเลกุลสำหรับของแข็งเลือกสกัดวิเคราะห์.? ความไวสูงที่มีข้อ จำกัด ของปริมาณ 1.4-94.8 มิลลิกรัมต่อกิโลกรัม? 1.? กลับคืนอยู่ในช่วง 88.2-99.8% ด้วย RSD ต่ำกว่า 8%. articleinfo ประวัติศาสตร์บทความที่ได้รับ 24 มีนาคม 2015 ที่ได้รับในการปรับปรุงรูปแบบ6 สิงหาคม 2015 ได้รับการยอมรับ 10 สิงหาคม 2015 พร้อมให้บริการออนไลน์ xxx คำสำคัญ: aminoglycosides อิเลคโซนฝอยตีคู่มวลสารซ้อนโมเลกุลพอลิเมอตราตรึงใจน้ำผึ้งbstract วิธีการวิเคราะห์ใหม่บนพื้นฐานของโซนฝอยอิควบคู่มวลสารมีการเสนอและตรวจสอบสำหรับการระบุและปริมาณพร้อมกันเก้า aminoglycosides ในน้ำผึ้งตัวอย่าง การตรวจสอบการใช้กับดักไอออนมวลวิเคราะห์การดำเนินงานในโหมดการตรวจสอบปฏิกิริยาหลายถูกนำมาใช้ พารามิเตอร์ที่แตกต่างกันได้รับการปรับให้เหมาะสมเพื่อให้ได้แยกเพียงพอรวมกับความไวแสงสูงสุด เพื่อให้บรรลุหัวกะทิสูงในการรักษาตัวอย่างพอลิเมอตราตรึงใจ commerciallyavailable โมเลกุลถูกนำมาใช้สำหรับการสกัดของแข็งของวิเคราะห์ได้. ภายใต้เงื่อนไขที่เหมาะสมกลับคืนตัวอย่างป้อมอยู่ในช่วง 88.2-99.8% โดยมีญาติค่าเบี่ยงเบนมาตรฐานต่ำกว่า8 % ข้อ จำกัด ของการตรวจสอบอยู่ในช่วง 0.4-28.5 มิลลิกรัมต่อกิโลกรัม 1 นอกจากนี้การ จำกัด การตัดสินใจและความสามารถในการตรวจสอบได้รับการประเมินตั้งแต่ 3.5-60.5 มิลลิกรัมต่อกิโลกรัม 1 และ 6.0 ที่จะ 103.1 มิลลิกรัมต่อกิโลกรัม 1 ตามลำดับแสดงให้เห็นถึงความไวและการบังคับใช้ของที่ง่ายและรวดเร็วนี้วิธี. © 2015 Elsevier BV ทั้งหมด สิทธิ reserved. ย่อ: เอจี aminoglycoside; APM, Apramycin; BGE อิเล็กพื้นหลัง; cze, อิเลคโซนฝอย; CCA จำกัด ตัดสินใจ; CCB, ประสิทธิภาพการตรวจจับ; DHS, ยับยั้งการ; สหภาพยุโรปสหภาพยุโรป FASS ตัวอย่างฟิลด์ขยายซ้อน; GENT, Gentamicin; HFBA กรด Heptafluorobutyric; HILIC ปฏิสัมพันธ์ Hydrophilic โค; ไอทีดักไอออน; MRLs จำกัด ตกค้างสูงสุด; เมธานอล, เมทานอล; MIPs โพลิเมอร์โมเลกุลตราตรึงใจ; MRM ตรวจสอบปฏิกิริยาหลาย; NEO, Neomycin; PRM, Paromomycin; IPA, isopropanol; RASFF ระบบการแจ้งเตือนอย่างรวดเร็วสำหรับอาหารและฟีด; SPE สกัดเฟสของแข็ง; MISPE เฟสของแข็งสกัดที่มีโมเลกุลพอลิเมอตราตรึงใจ; SPC, Spectinomycin; . เอสทีพี, นี้ streptomycin * ผู้รับผิดชอบ. อีเมล์: [e-mail] (AM-Campana García) ~. รายการเนื้อหาที่มีอยู่ใน ScienceDirect Analytica Chimica Acta วารสารหน้าแรก: www.elsevier.com / ค้นหา / ACA http: // dx.doi.org/10.1016/j.aca.2015.08.003 0003-2670 / 2015 © Elsevier BV สงวนลิขสิทธิ์. Analytica Chimica Acta xxx (2015) 1e8 กรุณาอ้างอิงบทความนี้ในข่าวในนาม: D. Moreno อนซาเลซ, เอต al., การกำหนด aminoglycosides ในน้ำผึ้งโดยควบคู่อิเล็กฝอย? มวลสารและการสกัดด้วยโพลีเมอตราตรึงใจโมเลกุล, Analytica Chimica Acta (2015) http://dx.doi.org/10.1016/ j.aca.2015.08.003 1 บทนำaminoglycoside (AG) ยาปฏิชีวนะที่มีการใช้กันอย่างแพร่หลายในสัตวแพทย์ยา พวกเขามักใช้ในการรักษาโรคติดเชื้อ foulbrood (ที่เกิดจากเชื้อแบคทีเรีย) และโรค nosema (ที่เกิดจากโปรโตซัว). การใช้งานสัตวแพทย์ของยาปฏิชีวนะจะถูกควบคุมโดยสหภาพยุโรป (อียู) และข้อ จำกัด ตกค้างสูงสุด (MRLs) ได้รับการจัดตั้งขึ้นในส่วนที่กินได้แตกต่างกันหรือผลิตภัณฑ์ที่ได้จากสัตว์เช่นกล้ามเนื้อ, ไต, ไขมัน, ตับ, นมและไข่ [1] สหภาพยุโรปไม่อนุญาตให้ใช้ยาปฏิชีวนะรวมทั้ง AGS ในการเลี้ยงผึ้งและ MRLs ได้ไม่ได้รับการจัดตั้งขึ้นเพื่อสารเหล่านี้ในน้ำผึ้งใช้ที่เรียกว่า"ความอดทนเป็นศูนย์" แต่น้ำผึ้งและผลิตภัณฑ์ที่ได้จากผึ้งที่มาจากประเทศนอกสหภาพยุโรปอาจจะมีการปนเปื้อนด้วยสารตกค้างเอจีซึ่งเป็นข้อกังวลสำคัญในการค้าน้ำผึ้ง[2,3]. บางการศึกษาแสดงให้เห็นว่าเป็นส่วนหนึ่งที่สำคัญของปัจจุบันน้ำผึ้งวางตลาดมีสารตกค้างของยาปฏิชีวนะ [4] และตั้งแต่ปี 2003 สหภาพยุโรปของอย่างรวดเร็วระบบการแจ้งเตือนสำหรับอาหารและอาหาร (RASFF) ได้อย่างสม่ำเสมอแจ้งเตือนประเทศสมาชิกเกี่ยวกับการปรากฏตัวของยาปฏิชีวนะตกค้างในผลิตภัณฑ์เหล่านี้[5]. ห้องปฏิบัติการอ้างอิงชุมชนของสหภาพยุโรปตกค้างสัตวแพทย์มี จัดตั้ง "ข้อ จำกัด การกระทำ" สำหรับการตรวจสอบของการวิเคราะห์วิธีการที่เกี่ยวข้องกับการควบคุมการวิเคราะห์ไม่ได้รับอนุญาตในmatrixes ที่แตกต่างกัน [6] ในความสัมพันธ์กับ AGS ในน้ำผึ้ง, แนะนำความเข้มข้น40 มิลลิกรัมต่อกิโลกรัม 1 ได้รับการตั้งค่าสำหรับ streptomycin (SPT) ซึ่งเกี่ยวข้องกับการที่ความสามารถในการตรวจจับ (CCB) สำหรับการคัดกรองวิธีการหรือจำกัด การตัดสินใจ (CCA) สำหรับวิธีการยืนยันควรจะต่ำกว่านี้ค่า. ตามเนื้อผ้าประสิทธิภาพสูงของเหลว chromatography (HPLC) วิธีการที่ได้รับนำไปใช้สำหรับการตัดสินใจของ AGS [7] ส่วนใหญ่ใช้เป็นระบบตรวจจับตีคู่มวลสาร (MS / MS) ด้วยโหมด electrospray ไอออนไนซ์บวก (ESI TH) แต่ขั้วสูงของยาปฏิชีวนะเหล่านี้เป็นอุปสรรคสำหรับพวกเขาการวิเคราะห์โดยวิธีHPLC เช่นที่พวกเขาไม่ได้เก็บไว้ในคอลัมน์เฟสย้อนกลับ โคไอออนคู่ได้รับการเสนอเป็นทางเลือกที่จะได้รับความพึงพอใจของการแยกสารเหล่านี้[8e12] อย่างไรก็ตามโคไอออนคู่ต้องนอกเหนือจากสารไอออนคู่ (ส่วนใหญ่เป็นกรด TRIFLUOROACETIC หรือกรด heptafluorobutyric) ในเฟสเคลื่อนที่ น้ำยาไอออนคู่เหล่านี้มีกรดที่ระเหยได้น้อยมากและอย่างจริงจังสามารถส่งผลกระทบต่อประสิทธิภาพการทำงานของMS ที่ก่อให้เกิดการปราบปรามไอออนไนซ์และวิเคราะห์การปนเปื้อนของแหล่งกำเนิดไอออน โคปฏิสัมพันธ์ Hydrophilic (HILIC) ได้รับการเสนอเมื่อเร็ว ๆ นี้เป็นทางเลือกให้ไอออนคู่โครมาสำหรับการวิเคราะห์ AGS ในน้ำผึ้งโดย LC-MS [11,13e16] ได้. แต่ในวิธีการนี้มีความเข้มข้นสูงของเกลือในเฟสเคลื่อนที่มักจะเป็นสิ่งจำเป็นที่จะเป็นอันตรายสำหรับ MS การตรวจสอบ. ฝอย electrophoresis (CE) อาจจะเป็นทางเลือกที่น่าสนใจที่จะHPLC สำหรับการวิเคราะห์ของสารเหล่านี้เกิดจากการข้อดีของมันเช่นเวลาสั้นการวิเคราะห์ที่มีประสิทธิภาพสูงและการแยกสารการบริโภคต่ำ ข้อเสียเปรียบคือการขาดของ chromophore กลุ่ม AGS ซึ่งจะช่วยป้องกันความมุ่งมั่นของพวกเขาโดย UV / Vis ที่วิธีการตรวจสอบพบมากที่สุดในซีอี หลายครั้งที่ได้รับการสร้างขึ้นมาเพื่อเอาชนะปัญหานี้คือการตรวจสอบการใช้งานของรังสียูวีทางอ้อม[17,18] หรือการใช้วิธีการอนุพันธ์ในรูปแบบชนิดที่ดูดซับรังสียูวีในภูมิภาค / Vis ส่วน [19] นอกจากนี้ยังมีอนุพันธ์โพสต์คอลัมน์ถูกใช้ในการใช้เลเซอร์ตรวจจับแสงเหนี่ยวนำให้เกิด [20]. แต่น่าเสียดายที่วิธีการเหล่านี้แสดงให้เห็นความไวที่น่าสงสารเพราะความยาวเส้นทางแสงสั้นและปริมาณขนาดเล็กของกลุ่มตัวอย่างฉีดหรือเกี่ยวข้องกับกระบวนการอนุพันธ์ที่น่าเบื่อและมีความซับซ้อน. MS / MS เป็น ทางเลือกที่จะปรับปรุงความไวและการเลือกในซีอีที่ช่วยให้การระบุชัดเจนของสารตกค้างยาปฏิชีวนะและดังนั้นจึงตอบสนองความต้องการการควบคุมของสหภาพยุโรป[21] แต่น่าเสียดายที่มีปริมาณขนาดเล็กของกลุ่มตัวอย่างในการฉีดซีอียังคงเป็นข้อ จำกัด ที่สำคัญ เพื่อที่จะบรรเทาปัญหานี้หลายกลยุทธ์ได้รับการพัฒนา [22e24] ในหมู่พวกเขาซ้อนตัวอย่าง fieldamplified (FASS) เป็นหนึ่งในมีประสิทธิภาพมากที่สุดและวิธีการที่ง่ายที่สุดเพื่อให้บรรลุความไวสูง[25] ใน FASS ที่ตัวทำละลายตัวอย่างมีการนำต่ำกว่าอิเล็กโทรไลพื้นหลัง(BGE) ดังนั้นเมื่อแรงดันไฟฟ้าถูกนำไปใช้สนามไฟฟ้าจะสูงขึ้นในเขตของกลุ่มตัวอย่างกว่าใน BGE เป็นผลให้การวิเคราะห์ย้ายได้อย่างรวดเร็วในเขตตัวอย่างและชะลอตัวลงเมื่อพวกเขามาถึงBGE ที่ก่อให้เกิด "ซ้อน" ของวิเคราะห์รอบเขตแดนตัวอย่างBGE ได้. อีกประเด็นที่จะต้องมีการแก้ไขในความมุ่งมั่นของAGS เป็นตัวอย่าง การจัดเตรียม มันไม่ได้เป็นเรื่องง่ายเนื่องจากการสูงขั้วของ AGS และแนวโน้มของการผูกอย่างยิ่งที่จะเมทริกซ์โปรตีน ส่วนใหญ่ของวิธีการรายงานการวิเคราะห์ของ AGS ในน้ำผึ้งเกี่ยวข้องกับการใช้สกัดสารในเฟสของแข็ง(SPE) ตลับเช่นการแลกเปลี่ยนประจุบวกที่อ่อนแอ[14,15] octadecyl [12] หรือสมดุลน้ำ-lipophilic [9,16] เพื่อ ให้แน่ใจว่าสารสกัดที่สะอาด. วัสดุอื่น ๆ ที่มีการเลือกที่สูงขึ้นเช่นโมเลกุลพอลิเมอตราตรึงใจ(MIPs) สามารถให้สารสกัดทำความสะอาด MIPs เป็นวัสดุสังเคราะห์ที่มีการสร้างการรับรู้เทียมเว็บไซต์สามารถที่จะจับภาพเฉพาะโมเลกุลเป้าหมาย[26,27] ดังนั้นการมีปฏิสัมพันธ์ที่ดีระหว่าง MIPs และโมเลกุลเป้าหมายทำให้พวกเขาเหมาะสำหรับการสกัดเลือกของสารประกอบที่ร่องรอยระดับโดยเฉพาะอย่างยิ่งเมื่อกลุ่มตัวอย่างที่มีความซับซ้อน ความคิดเห็นหลายแสดงการใช้งานของพวกเขาในการวิเคราะห์ทางเคมี [28e30] โดยเฉพาะการใช้งานของ MIPs เป็นตัวดูดซับเอสพีอี (MISPE) สำหรับเลือกการสกัดยาปฏิชีวนะจากตัวอย่างอาหารที่มีการเติบโตอย่างมีนัยสำคัญในช่วงไม่กี่ปีที่ผ่านมา[31e35] เมื่อเร็ว ๆ นี้จีเอตอัล ได้สังเคราะห์ตัวดูดซับ MIP สำหรับ AGS ใช้ SPT เป็นโมเลกุลแม่แบบการได้รับประสิทธิภาพที่น่าพอใจและการเลือกในการวิเคราะห์ของน้ำผึ้งตัวอย่าง[13]. ในงานนี้เรานำเสนอเป็นทางเลือกที่มีประโยชน์ที่จะหาจำนวนมากความเข้มข้นต่ำเก้า AGS ในน้ำผึ้งใช้ เมื่อเร็ว ๆ นี้ในเชิงพาณิชย์MIPs การใช้ CE-MS / MS ที่ FASS เข้มข้นยังมีการเสนอเป็นแนวทางในการปรับปรุงความไวและการเลือก ผลที่ได้แสดงให้เห็นถึงการเป็นครั้งแรกที่เป็นไปได้ของ MISPE และ CE-MS / MS สำหรับปริมาณของสารตกค้าง AG ในน้ำผึ้ง. 2 การทดลอง2.1 รีเอเจนต์และวัสดุที่มันจะต้องมีการเน้นว่าเพราะความสัมพันธ์ของการดูดซับสูงของAGS เพื่อพื้นผิวที่ขั้วโลกและแสงสูงของพวกเขาเรือสีเหลืองอำพันโพรพิลีน (ขวดแก้วและขวด) ถูกนำมาใช้ในช่วงการเตรียมสารตัวอย่างที่เก็บสินค้าและการฉีด. น้ำบริสุทธิ์

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

อะมิโนไกลโคไซด์ในการหาน้ำผึ้งสำหรับ
electrophoresis ตีคู่มวลสารและการสกัดด้วย

imprin โมเลกุลพอลิเมอร์ ดาวิด กอนซาเลซ
เท็ด โมเรโน่ , Francisco J . Lara , นิโกล่า jurgovska
B , ลอร่า gamiz Gracia
,
อนาม. garc í a-campana ~ *
ภาควิชาภาควิชาเคมี คณะวิทยาศาสตร์ มหาวิทยาลัยกรานาดา , Av . fuentenueva S / N ,
e-18071 กรานาดา , สเปนบี ชาร์ล มหาวิทยาลัย คณะเภสัชศาสตร์ hradec kralov

E , ปราก , สาธารณรัฐ checz
H ฉัน G H L ฉัน G H T S g r a p H I C A L A B S T R A C T

ce-ms / MS เสนอครั้งแรก
9 ต่อความมุ่งมั่นในน้ำผึ้ง .

โมเลกุลพอลิเมอร์เพื่อการติดตรา
ของแข็งการสกัดแยกสาร
.

สูงไว ด้วยข้อจำกัดของปริมาณจาก 1.4 94.8 มิลลิกรัมต่อกิโลกรัม 
1 .
ต่ำสุดอยู่ระหว่างตลาดถึง 99.8%
กับ , RSD น้อยกว่า 8% .
r t i C L E n f o :

บทความประวัติศาสตร์ได้รับ 24 มีนาคม 2015
รับแก้ไขแบบฟอร์ม
6 สิงหาคม 2015

ยอมรับ 10 สิงหาคม 2015 ออนไลน์ xxx
คำสำคัญ :

ฝอยต่อโซน อิเล็กโตรโฟรีซิส
ตีคู่มวลสาร


ที่รักโพลิเมอร์โมเลกุลซ้อนติดตรา
B S T R A C T
ใหม่วิธีการวิเคราะห์ตามหลอดเลือดฝอย โซน electrophoresis ตีคู่มวลสารเสนอ
และตรวจสอบสำหรับการระบุและปริมาณได้ถึงเก้าระดับในตัวอย่างที่รัก

การใช้ไอออนกับดักมวลชนวิเคราะห์ปฏิกิริยาหลายปฏิบัติการในการตรวจสอบโหมด
ถูกใช้พารามิเตอร์ต่าง ๆเหมาะสมเพื่อรับเพียงพอแยกรวมกับ
ความไวสูง เพื่อให้บรรลุการสูงในการรักษา ตัวอย่าง , commerciallyavailable โมเลกุลพอลิเมอร์ได้ติดตราใช้สำหรับของแข็งเฟสการสกัดสาร .
ภายใต้สภาวะที่เหมาะสม , ตลาดเพื่อเสริมตัวอย่างระหว่างตลาดถึง 99.8% กับญาติ
ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐานต่ำกว่า 8% ขอบเขตของการตรวจสอบระหว่าง 0.4 ถึง 28.5 มิลลิกรัมต่อกิโลกรัม  1 นอกจากนี้ การตัดสินใจ และการตรวจหา
ขีดความสามารถประเมินตั้งแต่ 3.5 60.5 มิลลิกรัมต่อกิโลกรัม  1 และจากการ 103.1
6.0 มิลลิกรัมต่อกิโลกรัม  1 ตามลำดับ แสดงถึงความไวและการประยุกต์ใช้นี้ได้อย่างรวดเร็วและวิธีง่ายๆ
.
สงวนลิขสิทธิ์ 2015 นอกจากนี้เท่าสงวนลิขสิทธิ์ .
ย่อ : AG2538 ; APM apramycin ; bge อิเล็กโทรไลต์ , พื้นหลัง ; เอนไซม์ CYP หลอดเลือดฝอยบริเวณ CCA , CCB จำกัด ; การตัดสินใจ ; ความสามารถในการตรวจจับ ;
DHS พฤฒสภาสหภาพยุโรป , สหภาพยุโรป , ; ; ฟาส , เขตขยายตัวอย่างซ้อน ; ยา ; hfba Gent , กรด , heptafluorobutyric ; hilic ที่มีปฏิสัมพันธ์ chromatography ,
; ไอออนกับดักมัน ; ซึ่งเป็นการปรับ , ขีด จำกัด สูงสุด ; เมทานอล ; Min ปริมาณ ,แต่ละโมเลกุลพอลิเมอร์ mrm ปฏิกิริยาหลายการตรวจสอบ ; Neo
มีเดียวิกิ ; PRM พาโรโมไมซิน ; IPA , ไอโซโพรพานอล ; rasff , ระบบแจ้งเตือน , อาหารและอาหารสัตว์สำหรับ ; สารสกัดเฟสของแข็ง mispe การสกัดด้วยเฟสของแข็งโมเลกุล
ตราตรึงพอลิเมอร์ SPC สเปกติโนมัยซิน ; STP , streptomycin , .

ที่สอดคล้องกันของผู้เขียน อีเมล : [e-mail] ( น. garc í a-campana ~
)เนื้อหารายการของบริการ
analytica chimica ACTA
วารสารหน้าแรก : www.elsevier.com / ค้นหา / ACA
http : / / DX ดอย . org / 10.1016 / j.aca . 2015.08.003
0003-2670 / สงวนลิขสิทธิ์ 2015 นอกจากนี้เท่าสงวนลิขสิทธิ์ .
analytica chimica ACTA xxx ( 2015 ) 1e8
โปรดอ้างอิงบทความนี้ในหนังสือพิมพ์ : D โมเรโน กอนซาเลซ , et al . , การกำหนดระดับในน้ำผึ้งโดยผู้ชมกันไป