A random subset of 96 (13%) of the IgG-positive samples
were selected for serotyping at the Center Hospitalier
Universitaire, Marseille, France, using an ELISA-format
microneutralization test described elsewhere, which has
been shown to be similar monotypic responses to the standard
serotype-specific plaque reduction neutralization test
(PRNT) assay in serum post primary infection.12 Briefly,
viruses were grown in 96-well plates in Vero E6 monolayers
in the presence of 2-fold serial dilutions of serum ranging
from 1/40 to 1/2,560. Seven days post-infection, supernatants
were removed; cells were fixed with 4% paraformaldehyde
and permeabilized with 0.5% Triton X-100. Virus
proteins were detected spectrophotometrically using panflavivirus
anti-NS5 antibodies from hybridoma H86.13
B4A supernatant, commercially available horseradish peroxidase
(HRP)-conjugated anti-mouse secondary antibodies and
3,3¢,5,5¢-Tetramethylbenzidine (TMB) peroxidase substrate.
For each serum and virus, the neutralization titer was the
reciprocal of the highest serum dilution that inhibits the virus
growing. Negative controls were performed using samples
from our collection, sampled from patients who had never
traveled to dengue-endemic countries. The dengue 1–4 viruses
used in the assay were respectively H/IMTSSA/98/060,
H/IMTSSA-MART/98-703, H87, and Dak HD 34 460.13–16
The randomly selected sera were from patients with a mean
age of 37.6 years and a median age of 37.0 years. Of these
samples 77 of 96 (80%) were seropositive to all four serotypes
(titer ³ 40), 11 of 96 (11%) were seropositive to three
serotypes, 3 of 96 (3%) were seropositive to one serotype,
and 5 of 96 (5%) were seronegative, with a titer below the
เซตสุ่ม 96 (13%) ของกลุ่มตัวอย่าง IgG บวก
ถูกเลือกสำหรับ serotyping ที่ศูนย์ Hospitalier
Universitaire, มาร์เซย์, ฝรั่งเศส, ELISA โดยใช้รูปแบบ
การทดสอบ microneutralization อธิบายอื่น ๆ ซึ่งได้
รับการแสดงที่จะมีการตอบสนอง monotypic คล้ายกับ มาตรฐาน
serotype เฉพาะการทดสอบการวางตัวเป็นกลางลดคราบจุลินทรีย์
(prnt) ทดสอบในซีรั่มโพสต์ infection.12 หลักสั้น ๆ ,
ไวรัสปลูกในแผ่น 96 หลุมใน monolayers E6 เวโร
ในการปรากฏตัวของ 2 เท่าเจือจางอนุกรมของซีรั่มตั้งแต่
1/40 จากการ 1/2560 เจ็ดวันหลังการติดเชื้อ supernatants
ถูกถอดออก; เซลล์ได้รับการแก้ไขด้วย paraformaldehyde 4%
และ permeabilized 0.5% Triton X-100 ไวรัส
ที่ตรวจพบโปรตีน spectrophotometrically ใช้ panflavivirus
แอนติบอดีต่อต้าน NS5 จากไฮบริ H86.13
ใส B4A มะรุมใช้ได้ในเชิงพาณิชย์ peroxidase
(HRP) -conjugated แอนติบอดีต่อต้านรองเมาส์และ
3,3 ¢, 5,5 ¢ -Tetramethylbenzidine (TMB) พื้นผิว peroxidase .
สำหรับแต่ละเซรั่มและไวรัส titer วางตัวเป็นกลางเป็น
ซึ่งกันและกันของซีรั่มลดสัดส่วนสูงที่สุดที่ยับยั้งไวรัส
ที่เพิ่มขึ้น การควบคุมเชิงลบได้ดำเนินการโดยใช้ตัวอย่าง
จากคอลเลกชันของเราตัวอย่างจากผู้ป่วยที่ไม่เคย
เดินทางไปประเทศไข้เลือดออกถิ่น ไข้เลือดออก 1-4 ไวรัส
ที่ใช้ในการทดสอบตามลําดับ H / IMTSSA / 98/060,
H / IMTSSA-MART / 98-703, H87 และ Dak HD 34 460.13-16
ซีรั่มสุ่มเลือกมาจากผู้ป่วยที่มีค่าเฉลี่ย
อายุ 37.6 ปีและอายุเฉลี่ยของ 37.0 ปี ของเหล่านี้
ตัวอย่าง 77 96 (80%) ติดเชื้อเอ็ทั้งสี่สายพันธุ์
(titer ³ 40) 11 96 (11%) ติดเชื้อเอ็สาม
สายพันธุ์ 3 96 (3%) การติดเชื้อเอ็หนึ่ง serotype,
และ 5 96 (5%) เป็นน้ำเหลืองมี titer ด้านล่าง
การแปล กรุณารอสักครู่..

ส่วนย่อยสุ่ม 96 ( 13 % ) ของ IgG บวกตัวอย่าง
เลือกการสำรวจที่ศูนย์ hospitalier
universitaire , Marseille , ฝรั่งเศส , การใช้วิธีทดสอบรูปแบบ
microneutralization อธิบายที่อื่นซึ่งมี
ถูกแสดงเป็นเหมือนกัน monotypic ตอบสนองมาตรฐานโดยเฉพาะจุลินทรีย์ลดการสอบ
( prnt ) วิธีหลักในซีรั่ม infection.12
โพสต์สั้น ๆไวรัสที่ถูกปลูกใน 96 ดีจานในเวโร monolayers E6
ต่อหน้าถึงอนุกรมเจือจางซีรั่มตั้งแต่
1 / 40 1 / 2560 . เจ็ดวัน การติดเชื้อ โพสต์ supernatants
ถูกกำจัด เซลล์ถูกกำหนดด้วย
พาราฟอร์มาลดิไฮด์ 4 % และ permeabilized กับ 0.5% Triton X-100 . โปรตีนของไวรัสนี้ใช้ panflavivirus
ตรวจพบแอนติบอดีจากไฮบริโดมา h86.13
anti-ns5b4a สูงในเชิงพาณิชย์ของพืชชนิดหนึ่ง peroxidase
( HRP ) - ผลิตภัณฑ์ป้องกันเมาส์ระดับแอนติบอดี¢
3 , 3 , 5 , 5 tetramethylbenzidine ค่าความจริง ( TMB ) มีพื้นผิว .
สำหรับแต่ละและไวรัส การระดับ เป็นส่วนกลับของ dilution สูงสุด
เซรั่มที่ยับยั้งไวรัส
เติบโต การควบคุมลบโดยใช้ตัวอย่าง
จากคอลเลกชันของเราเก็บตัวอย่างจากผู้ป่วยที่เคย
เดินทางไปประเทศที่มีถิ่น ที่ 1 – 4 ไวรัสไข้เลือดออก
ที่ใช้ในการทดสอบตามลำดับ H / imtssa / 98 / 060
, H / imtssa-mart / 98-703 h87 , และดัก HD 34 460.13 – 16
สุ่มค่าจากผู้ป่วยหมายถึง
อายุ 37.6 ปีและอายุเฉลี่ย 35 ปี ของเหล่านี้
ตัวอย่าง 77 96 ( 80% ) มีทั้งหมด 4 ระดับ (
( ระดับ³ 40 )11 จาก 96 ( 11% ) 3
( 3 ) , 96 ( 3% ) ระดับหนึ่งโดย
5 , 96 ( 5 % ) seronegative ที่มีระดับ ด้านล่าง
การแปล กรุณารอสักครู่..
