Extraction and Analysis of Flavonoi

Extraction and Analysis of Flavonoids. Extraction, separation, and
measurement of flavonoid aglycones by high-performance liquid chromatography (HPLC) were performed as described by our group (15). Flavonoids were released and hydrolyzed from the powdered rice (100 mg,
approximately five grains) by adding 1.2 mL of 50% MeOH containing
1.2 M HCl at 80
C in a water bath for 2 h. The crude suspensions were
centrifuged at 10000g at 4
C for 5 min. The crude extracts were passed
through 0.22 μm Teflon polytetrafluoroethylene (PTFE) syringe filters
and injected directly into the HPLC column. Flavonoid aglycones were
separated on a C18 column (250  4.6 mm, 5 μm, Inertsil ODS-3, GL
Sciences, Tokyo, Japan) by HPLC (Shimadzu, Kyoto, Japan) equipped
with a photodiode array (PDA) detector. Elution was performed using a
binary gradient of 0.1% formic acid in water (mobile phase A) and 0.1%
formic acid in acetonitrile (mobile phase B) according to the following
program: 0 min, 95% A/5% B; 30 min, 60% A/40% B; 45 min, 50% A/
50% B; 50 min, 0% A/100% B; 60 min, 0% A/100% B; 62 min, 95% A/
5% B; and 70 min, 95% A/5% B. The flow rate was 1.0 mL/min, and the
column temperature was 40
C. The ultraviolet-visible (UV-vis) detector
wavelength was set at 364 nm. For quantification purposes, a mixture of
three flavonoid standards (apigenin, kaempferol, and quercetin) was used
to create a calibration curve of the individual flavonoids. For identification
of kaempferol and quercetin in WR-1 cultivar, the extracts were separated
on a Waters (Milford, MA) symmetry C18 (150  2.1 mm, 5 μm) column
using a HPLC system. The elution buffer and column temperature were
the same as described above. The following elution program was applied:
0 min, 100% A/0% B; 25 min, 0% A/100% B; 35 min, 0% A/100% B;
37 min, 100% A/0% B; and 47 min, 100% A/0% B. The flow rate was
0.2 mL/min. The eluate was diverted to a quadrupole mass spectrometer
(LC/MS2010A, Shimadzu) equipped with a negative electrospray ionization source. The spray voltage was set to 4.5 kV, and the capillary temperature was set to 250
C.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การสกัดและการวิเคราะห์ Flavonoids การสกัดแยกและการวัด aglycones flavonoid โดยมีประสิทธิภาพสูงของเหลว chromatography (HPLC) ได้ดำเนินการตามที่อธิบายไว้โดยกลุ่มของเรา (15)
flavonoids ได้รับการปล่อยตัวและไฮโดรไลซ์จากข้าวผง (100
มิลลิกรัมประมาณห้าธัญพืช) โดยการเพิ่ม 1.2 มิลลิลิตรเมธานอล 50% ที่มี
1.2 M HCl ที่ 80 องศาเซลเซียสในอ่างน้ำเป็นเวลา 2 ชั่วโมง สารแขวนลอยน้ำมันดิบถูกหมุนเหวี่ยงที่ 10000g ที่ 4 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาที
สารสกัดน้ำมันดิบถูกส่งผ่าน 0.22 ไมโครเมตร polytetrafluoroethylene เทฟลอน (PTFE) ตัวกรองเข็มฉีดยาและฉีดโดยตรงลงในคอลัมน์HPLC ได้ aglycones Flavonoid ถูกแยกออกจากกันในคอลัมน์C18 (250? 4.6 มม 5 ไมโครเมตร Inertsil ODS-3, GL วิทยาศาสตร์กรุงโตเกียวประเทศญี่ปุ่น) โดยวิธี HPLC (Shimadzu เกียวโตญี่ปุ่น) ติดตั้งกับอาร์เรย์โฟโตไดโอด(PDA) เครื่องตรวจจับ elution ได้รับการดำเนินการโดยใช้การไล่ระดับสีฐาน 0.1% กรดในน้ำ (เฟสเคลื่อนที่ A) และ 0.1% กรดใน acetonitrile (B เฟสเคลื่อนที่) ตามต่อไปนี้โปรแกรม: 0 นาที 95% A / B 5%; 30 นาที, 60% A / B 40%; 45 นาที, 50% A / 50% B; 50 นาที 0% A / B 100%; 60 นาที 0% A / B 100%; 62 นาที, 95% A / 5% B; และ 70 นาที, 95% A / บี 5% เป็นอัตราการไหล 1.0 มิลลิลิตร / นาทีและอุณหภูมิคอลัมน์เป็น40 องศาเซลเซียส อัลตราไวโอเลตมองเห็นได้ (UV-Vis) เครื่องตรวจจับคลื่นตั้งอยู่ที่364 นาโนเมตร เพื่อวัตถุประสงค์ในปริมาณที่เป็นส่วนผสมของสามมาตรฐาน flavonoid (apigenin, เฟอรอลและ quercetin) ถูกนำมาใช้ในการสร้างกราฟมาตรฐานของflavonoids บุคคล เพื่อระบุตัวตนของเฟอรอลและ quercetin ใน WR-1 พันธุ์สารสกัดที่ถูกแยกออกจากกันในน้ำ(ฟอร์ด, แมสซาชูเซต) สมมาตร C18 (150? 2.1 มม 5 ไมครอน) คอลัมน์ใช้ระบบHPLC บัฟเฟอร์ชะและอุณหภูมิคอลัมน์เป็นเช่นเดียวกับที่กล่าวไว้ข้างต้น โปรแกรมชะต่อไปนี้ถูกนำมาใช้: 0 นาที, 100% A / B 0%; 25 นาที 0% A / B 100%; 35 นาที 0% A / B 100%; 37 นาที, 100% A / B 0%; และ 47 นาที, 100% A / 0% บีอัตราการไหลเป็น0.2 มิลลิลิตร / นาที eluate ถูกเบี่ยงเบนไปสเปกโตรมิเตอร์มวล quadrupole (LC / MS2010A, Shimadzu) พร้อมกับแหล่ง electrospray ไอออนไนซ์เชิงลบ แรงดันสเปรย์ถูกกำหนดให้ 4.5 กิโลโวลต์และอุณหภูมิฝอยถูกกำหนดถึง 250 องศาเซลเซียส

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การสกัดและวิเคราะห์ฟลาโวนอยด์ . การสกัด การแยก และฟลาโวนอยด์ aglycones
การวัดโดยวิธีโครมาโทกราฟีของเหลวสมรรถนะสูง ( HPLC ) ได้ดำเนินการตามที่อธิบายไว้โดยกลุ่มของเรา ( 15 ) ฟลาโวนอยด์ที่ถูกปล่อยออกมาและย่อยแป้งจากข้าว ( 100 มิลลิกรัม ,
ประมาณห้าเม็ด ) โดยการเพิ่ม 1.2 ml 50 % ปริมาณ 1.2 M HCl ที่ประกอบด้วย
80
C ในอ่างน้ำเป็นเวลา 2 ชั่วโมงสารแขวนลอยดิบเป็นระดับที่ 10000g
4
องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาทีสกัดผ่าน
ผ่าน 0.22 μ M เคลือบเทฟล่อน ( PTFE ) และเข็มตัวกรอง
ฉีดโดยตรงเข้าไปใน HPLC คอลัมน์ ฟลาโวนอย aglycones ถูก
แยกในคอลัมน์ C18 250  4.6 มม. , 5 μ M , inertsil ods-3 GL
วิทยาศาสตร์ , โตเกียว , ญี่ปุ่น ) โดย HPLC ( Shimadzu , เกียวโต , ญี่ปุ่น
) พร้อมด้วยโฟโตไดโอดเรย์ ( PDA ) เครื่องตรวจจับ ( การใช้
ไล่ระดับไบนารี 0.1% กรดในน้ำ ( เฟสเคลื่อนที่ ) และ 0.1 %
กรดใน Acetonitrile ( มือถือเฟส B ) ตามรายการ ดังต่อไปนี้
: 0 นาที 95 / 5 % B ; 30 นาที , 60 / 40 % B ; 45 นาที 50 / 50 %
% B ; 50 นาที 0 % / 100 % B ; 60 นาที , 0 % / 100 % B ; 62 นาที 95 /
5 % B ; และ 70 นาที 95 / 5 % B . อัตราการไหลเท่ากับ 10 มล. / นาทีและอุณหภูมิ 40 C
คอลัมน์
รังสีอัลตราไวโอเลต ( UV VIS ) มองเห็นเครื่องตรวจจับ
ความยาวคลื่นเท่ากับ 364 nm . มีปริมาณเป็นส่วนผสมของ
3 มาตรฐาน ( พิจินินเคมเฟอรอล และฟลาโวนอยด์ , quercetin ) คือใช้
จะสร้างเป็นรูปโค้งของฟลาโวนอยด์ของแต่ละบุคคล สำหรับการระบุและเคมเฟอรอลใน wr-1
ของเคอร์พันธุ์แยกจากกัน
ในน้ำ ( Milford , MA ) c18 สมมาตร ( 150  2.1 มม. , 5 μ M ) คอลัมน์
โดยใช้ระบบ HPLC . การใช้บัฟเฟอร์และคอลัมน์
อุณหภูมิเดียวกันตามที่อธิบายไว้ข้างต้น ต่อไปนี้ใช้โปรแกรมประยุกต์ :
0 นาที , 100% / 0 % B ; 25 นาที 0 % / 100 % B ; 35 นาที , 0 % / 100 % B ;
37 นาที , 100% / 0 % B ; 47 นาที 100 % / % 0 B อัตราการไหลเท่ากับ
0.2 มิลลิลิตร / นาทีในสารละลาย ( eluate ) ถูกเบี่ยงเบนไปสี่ขั้วแมสสเปกโตรมิเตอร์
( LC / ms2010a Shimadzu , ) พร้อมกับลบวิธีพ่นละอองไฟฟ้าอิออนแหล่งที่มา เครื่องพ่นแรงดันตั้งไว้ที่ 4.5 กิโลโวลต์และอุณหภูมิเป็นฝอยตั้ง 250
C