For each isolate, a loopful of cell

For each isolate, a loopful of cells grown on MRS agar was suspended
in 200 ml of 6% Chelex-100 (Bio-Rad, Hercules, CA, USA),
heated at 100 C for 10 min, cooled on ice and centrifuged at
14,000 g for 10 min. Fifty microlitres of the supernatants
(containing the DNA) were used as PCR templates. RAPD-PCR
analysis was performed with random primers KS, M13R2, R5 and
CC1 (Table 1). Each 25-ml PCR reaction contained 2.5 ml of 10 PCR
buffer, 3.5 mmol l1 of MgCl2, 0.2 mmol l1 of each dNTP,
0.8 mmol l1 of primer, 1 mg ml1 of BSA, 1 U of TAQ polymerase
(Invitrogen, Merelbeke, Belgium) and 2 ml of DNA.
The amplification program consisted of 2 min at 95 C and 40
cycles of denaturation at 95 C for 30 s (for M13R2 and KS) or for
1 min (for CC1 and R5), annealing for 1 min (Table 1) and elongation
at 72 C (1.5 min for M13R2 and KS and 2 min for CC1 and R5),
followed by a final elongation at 72 C for 5 min (primer M13R2) or
7 min (primers KS, CC1 and R5). GeneAmp PCR System 2700
(Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) was used.
PCR products were separated by the QIAxcel System (QIAGEN,
Hilden, Germany) using a DNA Screening Cartridge and the AM320
separation method. RAPD profiles were normalised and analysed
with InfoQuest FP software version 4.5 (Bio-Rad Laboratories,
Hercules, CA, USA). Isolates from a single infant showing the same
band pattern on RAPD analysis were considered to belong to the
same genotype

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

สำหรับแต่ละแยก loopful ของเซลล์เติบโตบน MRS agar ถูกหยุดชั่วคราวใน 200 มลของ 6% Chelex -100 (Bio Rad เฮอร์คิวลิส CA, USA),ความร้อนที่ 100 C สำหรับ 10 นาที ระบายความร้อนด้วยออ และ centrifuged ที่g 14000 สำหรับ 10 นาทีห้าสิบ microlitres ของ supernatants(ประกอบด้วยดีเอ็นเอ) ใช้เป็นแม่แบบ PCR PCR อาร์เอพีดีทำการวิเคราะห์ ด้วยสุ่มไพรเมอร์ KS, M13R2, R5 และCC1 (ตารางที่ 1) ปฏิกิริยา PCR แต่ละ 25 ml ประกอบด้วย 2.5 ml ของ 10 PCRบัฟเฟอร์ 3.5 mmol l 1 ของ MgCl2, 0.2 mmol l 1 ของแต่ละ dNTP0.8 mmol l 1 1 U TAQ พอลิเมอเรส รองพื้น มิลลิกรัมต่อ 1 มิลลิลิตร 1 ของบีเอสเอ(Invitrogen, Merelbeke ประเทศเบลเยียม) และ 2 ml ของดีเอ็นเอขยายโปรแกรมประกอบด้วย 2 นาทีที่ 95 C และ 40วงจรการ denaturation ที่ 95 C 30 s (สำหรับ M13R2 และ KS) หรือ1 นาที (สำหรับ CC1 และ R5), การอบเหนียว elongation และ 1 นาที (ตารางที่ 1)ที่ 72 C (1.5 นาทีสำหรับ M13R2 และ KS และใกล CC1 และ R5),ตาม elongation ขั้นสุดท้ายที่ 72 C สำหรับ 5 นาที (รองพื้น M13R2) หรือ7 นาที (ไพรเมอร์ KS, CC1 และ R5) ระบบ GeneAmp PCR 2700ใช้ (ใช้ Biosystems ฟอสเตอร์ City, CA, USA)ผลิตภัณฑ์ PCR ถูกคั่น ด้วยระบบ QIAxcel (QIAGENHilden เยอรมนี) ใช้ตลับตรวจดีเอ็นเอและการ AM320วิธีการแยก โพรไฟล์การอาร์เอพีดี normalised และ analysedกับ FP InfoQuest ซอฟต์แวร์รุ่น 4.5 (ห้องปฏิบัติการชีวภาพราษฎร์เฮอร์คิวลิส CA, USA) แยกจากทารกเดียวที่แสดงเหมือนกันรูปแบบวงดนตรีในการอาร์เอพีดีวิเคราะห์ได้ถือเป็นการลักษณะทางพันธุกรรมเหมือนกัน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

สำหรับแต่ละแยก เป็น loopful เซลล์ที่ปลูกบนนางวุ้นถูกระงับ
200 มิลลิลิตร 6 % chelex  - 100 ( ไบโอ ราด , Hercules , CA , USA ) ,
 อุณหภูมิ 100 C 10 นาที เย็นแข็งและไฟฟ้าที่
14000 กรัม 10 นาทีห้าสิบ microlitres ของ supernatants
( ประกอบด้วย DNA PCR ) ถูกใช้เป็นแม่แบบ การวิเคราะห์ชื่อเรื่อง
แสดงกับไพรเมอร์แบบสุ่มและ KS , m13r2 , r5
cc1 ( ตารางที่ 1 )แต่ละ 25 มิลลิลิตรเพื่อตรวจหาที่มีอยู่ 2.5 มล. 10  PCR
บัฟเฟอร์ 3.5 mmol l  1 ไอโซโทป , 0.2 มิลลิโมล /  1 ของแต่ละ dntp
0.8 มิลลิโมล , L  1 ไพรเมอร์ 1 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร  1 ของ BSA 1 U ของแท็กการ
( Invitrogen merelbeke , Belgium ) และ 2 มิลลิลิตรของ ดีเอ็นเอ
โปรแกรมขยายจำนวน 2 นาทีที่ 95  C และ 40
รอบ ( 95  เป็นเวลา 30 วินาที ( สำหรับ m13r2 และ KS ) หรือ
1 นาที ( และ cc1 R5 )อบอ่อนนาน 1 นาที ( ตารางที่ 1 ) และการยืดตัว
72  C ( 1.5 มิน m13r2 และ KS และ 2 นาทีและ cc1 R5 )
ตามด้วยยืดสุดท้ายที่  72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาที ( ไพรเมอร์ m13r2 )
7 นาที ( ไพรเมอร์และ KS , cc1 R5 ) ระบบตรวจ geneamp 2700
( Applied Biosystems ฟอสเตอร์ ซิตี้ , แคลิฟอร์เนีย , สหรัฐอเมริกา ) พบว่า ผลิตภัณฑ์ทั้งหมดจะถูกคั่นด้วย

( เพิ่มระบบ qiaxcel Hilden , ,เยอรมนี ) โดยใช้ดีเอ็นเอตรวจตลับหมึกและ am320
แยกวิธีการ บันทึกและวิเคราะห์โดยมีโปรไฟล์
กับ infoquest  FP ซอฟแวร์รุ่น 4.5 ( ไบโอ ราดห้องปฏิบัติการ
Hercules , CA , USA ) ที่แยกได้จากทารกเพียงคนเดียวที่แสดงแบบแผน
วงเดียวกันในการวิเคราะห์ RAPD ถือว่าเป็นของ
พันธุกรรมเดียวกัน