The latter was in agreement with th

The latter was in agreement with the certified reference value (1120 ± 90 ng/g of dm). The UHPLC determined content was 83% of the MBA result (p < 0.05; Table 2); the difference could be due to the non-specificity of MBA. The certified vitamin B12 value of BCR 487 is based on the data obtained with the MBA. To our knowledge, this is the first report of the chromatographically ana- lysed vitamin B12 content of BCR 487. A locally lyophilised pig liver sample analysed with HPLC after immunoaffinity purification had a vitamin B12 content of only 597–656 ng/g (Guggisberg et al., 2012). Distribution of corrinoids in pig liver has not been studied in detail. However, Kelly, Gruner, Furlong, and Sykes (2006) investi- gated corrinoids in lamb tissues, including the liver, by HPLC. Con- trary to previous reports that corrinoids in the lamb liver were exclusively vitamin B12, these authors found quite a marked frac- tion of the total corrinoids (up to 30%) as vitamin B12 analogues.
3.2. UHPLC analysis of vitamin B12 in cells and fermented cereal matrices
Fig. 2 shows example chromatograms with and without the immunoaffinity clean-up for extracts of cells, pig liver, spiked rye malt matrix and fermented rye malt matrix. Without the immuno- affinity purification, a higher chromatographic background was obtained for the pig liver and the fermented malt matrices while a cleaner chromatogram with a well-separated cyanocobalamin peak (retaining at 3.27 min) was observed for the cell extract. Besides the matrix effect on separation, another disadvantage was that the concentration of cyanocobalamin in these extracts was low or below the LOD (0.075 ng/5 lL injection). The immuno- affinity purified extracts produced a well-separated peak with none or little background interference, demonstrating the useful- ness of the immunoaffinity clean-up for the analysis of low levels
of vitamin B12 in the complex matrices. Guggisberg et al. (2012) reported its applicability for the analysis of vitamin B12 in meat and meat products. Nevertheless, analysis of the matrices such as microbial cells, containing a higher level of vitamin B12, did not require the immunoaffinity purification. Therefore, especially with the immunoaffinity purification this method could also be applica- ble for other matrices. Separate validation for each material how- ever is needed.
The corrinoid in the cell extract, the immunoaffinity purified fermented malt matrices and the pig liver eluted at the retention time of the cyanocobalamin standard (Fig. 2) and had a PDA spec- trum (210–600 nm) identical to that of cyanocobalamin (Fig. 3). Furthermore, the UHPLC–MS/MS analysis revealed that the frag- mentation profile of the corrinoid for the m/z of 1356, [M+H]+ of cyanocobalamin, was similar to that of the cyanocobalamin stan- dard, as shown in the example mass spectra (Fig. 4A and B). The following major fragmentation products of cyanocobalamin,

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

หลังได้ข้อตกลงกับค่าอ้างอิงที่ได้รับการรับรอง (1120 ± 90 ng/g ของ dm) เนื้อหากำหนด UHPLC ได้ 83% ผล MBA (p < 0.05 ตาราง 2); ความแตกต่างอาจเป็น เพราะการไม่-specificity ของ MBA วิตามินบี 12 ที่ได้รับการรับรองค่า BCR 487 ขึ้นอยู่กับข้อมูลที่ได้กับ MBA ความรู้ของเรา เป็นรายงานแรก chromatographically เอเอ็นเอ - lysed วิตามินบี 12 เนื้อหาของ BCR 487 ตัวอย่างตับหมูเครื่อง lyophilised analysed ด้วย HPLC หลังจากฟอก immunoaffinity มีเนื้อหาวิตามินบี 12 ของเฉพาะ 597-656 ng/g (Guggisberg et al., 2012) ไม่ได้ศึกษาในรายละเอียดของ corrinoids ในหมูตับ อย่างไรก็ตาม เคลลี่ Gruner เฟอร์ ลอง และ Sykes (2006) investi - corrinoids ในเนื้อเยื่อของเนื้อแกะ รวมทั้งตับ โดย HPLC gated คอน trary ไปก่อนหน้ารายงานว่า corrinoids ใน frac-สเตรชันจากแกะตับได้โดยเฉพาะวิตามินบี 12 ผู้เขียนเหล่านี้พบค่อนข้างเป็นเครื่องหมายของ corrinoids ทั้งหมด (ถึง 30%) เป็นวิตามินบี 12 analogues.
3.2 วิเคราะห์วิตามินบี 12 เซลล์และเมทริกซ์ธัญพืชหมัก UHPLC
ฟิก แสดง 2 ตัวอย่าง chromatograms มี และไม่ มีการ immunoaffinity ล้างสำหรับบางส่วนของเซลล์ ตับหมู เมตริกซ์ข้าวมอลต์ข้าวไรย์ถูกแทง และเมตริกซ์ข้าวมอลต์ข้าวไรย์หมัก ไม่ฟอกความสัมพันธ์ immuno พื้นหลัง chromatographic สูงถูกได้ตับหมูและข้าวมอลต์หมักเมทริกซ์ในขณะ chromatogram ทำความสะอาด ด้วย cyanocobalamin แยกห้องพักสูงสุด (รักษาที่ 3นาที 27) ที่พบในสารสกัดจากเซลล์ นอกจากเมทริกซ์ผลแยก อื่นข้อเสียได้ที่ความเข้มข้นของ cyanocobalamin ในสารสกัดเหล่านี้เป็นต่ำ หรือ ต่ำลอด (0.075 ng/5 จะฉีด) สารสกัดบริสุทธิ์ความสัมพันธ์ immuno ผลิตสูงสุดแยกห้องกับไม่มีสัญญาณรบกวนน้อยพื้นหลัง เห็นเป็นประโยชน์สบาย ๆ ของการ immunoaffinity ล้างสำหรับการวิเคราะห์ระดับต่ำ
ของวิตามินบี 12 ในเมทริกซ์ซับซ้อน Guggisberg et al. (2012) รายงานความเกี่ยวข้องของการวิเคราะห์ของวิตามินบี 12 ในเนื้อและผลิตภัณฑ์เนื้อสัตว์ อย่างไรก็ตาม วิเคราะห์ของเมทริกซ์เช่นเซลล์จุลินทรีย์ ประกอบด้วยวิตามินบี 12 ในระดับที่สูงขึ้นได้ไม่ต้องฟอก immunoaffinity ดังนั้น โดยเฉพาะอย่างยิ่งกับฟอก immunoaffinity วิธีนี้ยังสามารถ applica ble สำหรับเมทริกซ์อื่น ๆ แยกการตรวจสอบสำหรับแต่ละวัสดุวิธี - เคยต้องการ
corrinoid ในเซลล์แยก immunoaffinity ที่บริสุทธิ์หมักมอลต์เมทริกซ์และตับหมู eluted เวลาเก็บรักษาของ cyanocobalamin มาตรฐาน (ฟิก 2) และแบบ PDA ข้อมูลจำเพาะ-trum (210-600 nm) เหมือนกับของ cyanocobalamin (Fig. 3) นอกจากนี้ วิเคราะห์ UHPLC – MS/MS เปิดเผยว่า โพรไฟล์ frag-เอกสารของ corrinoid สำหรับ m/z ของ 1356, [M H] ของ cyanocobalamin เป็น cyanocobalamin สแตน-dard ดังที่แสดงในตัวอย่างโดยรวมแรมสเป็คตรา (Fig. 4A และ B) ด้านการกระจายตัวของหลักต่อไปนี้ของ cyanocobalamin

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

หลังเป็นในข้อตกลงกับค่าอ้างอิงที่ผ่านการรับรอง (1,120 ± 90 นาโนกรัม / กรัมของ dm) UHPLC กำหนดเนื้อหาเป็น 83% ของผล MBA (p <0.05; ตารางที่ 2); ความแตกต่างอาจเป็นเพราะความจำเพาะที่ไม่ใช่ปริญญาโทบริหารธุรกิจ ค่า B12 วิตามินที่ผ่านการรับรองของ BCR 487 อยู่บนพื้นฐานของข้อมูลที่ได้กับปริญญาโทบริหารธุรกิจ เพื่อความรู้ของเรานี้เป็นรายงานแรกของ chromatographically ana- lysed วิตามิน B12 เนื้อหาของ BCR 487. ตัวอย่างตับหมู lyophilised ท้องถิ่นวิเคราะห์ด้วย HPLC หลังจาก immunoaffinity บริสุทธิ์มีปริมาณวิตามินบี 12 เพียง 597-656 นาโนกรัม / กรัม (Guggisberg และ al., 2012) การกระจายตัวของ corrinoids ในตับหมูไม่ได้รับการศึกษาในรายละเอียด แต่เคลลี่ Gruner, หลาและ Sykes (2006) investi- รั้วรอบขอบชิด corrinoids ในเนื้อเยื่อแกะรวมทั้งตับโดยวิธี HPLC trary เพื่อนํามาใช้รายงานก่อนหน้านี้ที่ corrinoids ในตับเนื้อแกะเป็นเฉพาะวิตามินบี 12, ผู้เขียนเหล่านี้พบมากในการทำเครื่องหมายของ frac- corrinoids รวม (ถึง 30%) ในขณะที่วิตามินบี 12 analogues
3.2 การวิเคราะห์ UHPLC ของวิตามินบี 12 ในเซลล์และการฝึกอบรมหมักธัญพืช
รูป 2 แสดงตัวอย่างโครมาโตที่มีและไม่มี immunoaffinity ทำความสะอาดสำหรับสารสกัดจากเซลล์ตับหมูเสียบไรย์เมทริกซ์มอลต์และหมักข้าวมอลต์เมทริกซ์ โดยไม่ต้องฟอกความสัมพันธ์ immuno-, พื้นหลังโครมาสูงกว่าที่ได้รับสำหรับตับหมูหมักและการฝึกอบรมในขณะที่มอลต์ chromatogram ทำความสะอาดกับยอด cyanocobalamin ที่แยกออกจากกัน (คงที่ 3.27 นาที) เป็นข้อสังเกตสำหรับสารสกัดจากเซลล์ นอกจากนี้ผลกระทบเมทริกซ์ในการแยกข้อเสียอื่นก็คือการที่ความเข้มข้นของสารสกัดใน cyanocobalamin เหล่านี้เป็นไปได้น้อยหรือต่ำกว่าล็อด (0.075 ng / 5 ฉีด lL) ความสัมพันธ์ immuno- สารสกัดบริสุทธิ์ที่ผลิตสูงสุดที่แยกออกจากกันโดยที่ไม่มีใครหรือรบกวนพื้นหลังเล็ก ๆ น้อย ๆ แสดงให้เห็นถึงภาวะ useful- ของ immunoaffinity สะอาดขึ้นสำหรับการวิเคราะห์ในระดับต่ำ
ของวิตามินบี 12 ในการฝึกอบรมที่มีความซับซ้อน Guggisberg และคณะ (2012) รายงานการประยุกต์ใช้สำหรับการวิเคราะห์ของวิตามินบี 12 ในผลิตภัณฑ์จากเนื้อสัตว์และเนื้อสัตว์ อย่างไรก็ตามการวิเคราะห์การฝึกอบรมเช่นเซลล์ของจุลินทรีย์ที่มีระดับที่สูงขึ้นของวิตามินบี 12, ไม่จำเป็นต้องฟอก immunoaffinity ดังนั้นโดยเฉพาะอย่างยิ่งกับการทำให้บริสุทธิ์ immunoaffinity วิธีการนี้อาจจะประยุกต์ใช้สำหรับการฝึกอบรมเบิ้ลอื่น ๆ การตรวจสอบที่แยกต่างหากสำหรับวัสดุอย่างไรก็ตามการที่เคยเป็นสิ่งจำเป็นแต่ละ
corrinoid ในสารสกัดจากเซลล์, immunoaffinity บริสุทธิ์เมทริกซ์มอลต์หมักและตับหมูชะเวลาการเก็บรักษามาตรฐาน cyanocobalamin (รูปที่ 2). และมีพีดีเอระบุด Trum ( 210-600 นาโนเมตร) เหมือนกับว่า cyanocobalamin (รูปที่ 3). นอกจากนี้ UHPLC-MS / MS การวิเคราะห์แสดงให้เห็นว่ารายละเอียด mentation frag- ของ corrinoid สำหรับเมตร / ซีของ 1356 [M + H] + ของ cyanocobalamin เป็นแบบเดียวกับที่ดาด cyanocobalamin ลี้ดังแสดงใน สเปกตรัมมวลตัวอย่างเช่น (รูปที่ 4A. และ B) ผลิตภัณฑ์ต่อไปนี้การกระจายตัวสำคัญของ cyanocobalamin,

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

หลังคือในข้อตกลงกับค่าอ้างอิง ( 1120 ± 90 กรัม / กรัมของ DM ) การกำหนดเนื้อหา uhplc 83 % ของผล MBA ( P < 0.05 ; ตาราง 2 ) ; ความแตกต่างอาจเป็นเพราะไม่มีความจำเพาะของ MBA . ที่ผ่านการรับรองวิตามินบีสิบสองค่า BCR 487 จะขึ้นอยู่กับข้อมูลที่ได้รับกับ MBA . ความรู้ของเรานี่คือรายงานแรกของสารอนา - lysed วิตามินบีสิบสองเนื้อหาเท่ากับ 487 ใน lyophilised หมูตับตัวอย่างวิเคราะห์ด้วย HPLC หลังจาก immunoaffinity บริสุทธิ์มีวิตามินบี12 เนื้อหาเพียง 597 – 656 ng / g ( กั๊กกิสเบิร์ก et al . , 2012 ) การกระจายของ corrinoids ในตับหมู ยังไม่ได้ศึกษาในรายละเอียด อย่างไรก็ตาม เคลลี่ กรูเนอร์ Furlong ,แล้วไซค์ ( 2006 ) investi - gated corrinoids ในเนื้อเยื่อแกะ ได้แก่ ตับ , HPLC . คอน - trary รายงานก่อนหน้านี้ว่า corrinoids ในแกะ ตับ โดยเฉพาะวิตามิน B12 , ผู้เขียนเหล่านี้พบว่าค่อนข้างเครื่องหมาย frac - tion ของ corrinoids ทั้งหมด ( ไม่เกิน 30% ) เป็นวิตามิน B12 analogues
3.2 . uhplc การวิเคราะห์วิตามินในเซลล์และเมตริกซ์
รูปธัญพืชหมัก2 แสดงให้เห็นว่าตัวอย่างกลิ่นและไม่มีความสะอาด immunoaffinity สำหรับสารสกัดจากเซลล์ตับหมู , ข้าวมอลต์จากเมทริกซ์และหมักข้าวมอลต์เมทริกซ์ มมูโน - ไม่มีความสัมพันธ์บริสุทธิ์ที่สูงและพื้นหลังได้ สำหรับหมู ตับ และข้าวมอลต์หมักเมทริกซ์ในขณะที่เครื่องโครมาดีแยกออกวิตามินบี 12 สูงสุด ( ยึดที่ 327 นาที ) พบในเซลล์ สารสกัด นอกจากนี้ เดอะ เมทริกซ์ มีผลต่อการแยก ข้อเสียคือที่ความเข้มข้นของวิตามินบี 12 ในสารสกัดเหล่านี้ต่ำหรือด้านล่างโลด ( 0.075 ng / 5 ฉีดจะ ) มมูโน - จากสารสกัดบริสุทธิ์ที่ผลิตดีแยกยอดกับไม่มีหรือการรบกวนพื้นหลังเล็กน้อยแสดงให้เห็นถึง ประโยชน์ - ness ของ immunoaffinity สะอาดขึ้นสำหรับการวิเคราะห์ระดับต่ำ
วิตามิน B12 ในเมทริกซ์ที่ซับซ้อน กั๊กกิสเบิร์ก et al . ( 2012 ) รายงานเพื่อการวิเคราะห์ความเกี่ยวข้องของวิตามิน B12 ในเนื้อสัตว์และผลิตภัณฑ์จากเนื้อสัตว์ อย่างไรก็ตาม การวิเคราะห์เมทริกซ์ เช่นจุลินทรีย์เซลล์ที่มีระดับที่สูงขึ้นของวิตามิน B12 , ไม่ต้อง immunoaffinity บริสุทธิ์ดังนั้น โดยเฉพาะอย่างยิ่งกับ immunoaffinity ฟอก วิธีนี้ยังสามารถเป็นสิ่งที่เห็นทั้งหมด - ble สำหรับเมทริกซ์อื่น ๆ แยกการตรวจสอบสำหรับแต่ละวัสดุวิธีการ - เคยเป็น .
corrinoid ในเซลล์ สารสกัดจากข้าวมอลต์บริสุทธิ์ , immunoaffinity เมทริกซ์ และ หมู ตับ ตัวอย่างในการเก็บเวลามาตรฐาน ( รูปไซยาโนโคบาลามิน2 ) และมี PDA spec - ทรัม ( 210 ) 600 nm ) ที่เหมือนกันกับที่ของวิตามินบี 12 ( รูปที่ 3 ) นอกจากนี้ uhplc MS / MS และการวิเคราะห์พบว่างับ - mentation โปรไฟล์ของ corrinoid สำหรับ M / z 1 , 356 , [ M ] ของไซยาโนโคบาลามิน , คล้ายกับที่ของไซยาโนโคบาลามิน Stan dard - ดังแสดงในตัวอย่างมวลสเปกตรัม ( รูปที่ 4 และ B )หลักของผลิตภัณฑ์ของไซยาโนโคบาลามิน ดังต่อไปนี้