Healthy leaves were collected from the respective plantlets for
DNA extraction. Genomic DNA was extracted from fresh leaves
using the protocol standardized in our laboratory (Sudheer et al.,
2009a). Approximately 0.1 g of leaf tissue, ground in liquid nitrogen,
was placed in a 2 mL micro-centrifuge tube; along with 0.5 mL of
extraction buffer (2% CTAB, 100 mM Tris–HCl, 3.5 M NaCl, 20 mM
EDTA, 0.2 M -Mercaptoethanol, 2% PVP, pH 8.0), and incubated
at 65 ◦C for 90 min. The extraction was performed with equal volume
of chloroform:isoamyl alcohol (24:1) and the supernatant was
transferred to a new tube. The samples were treated with RNAase
and extracted with Tris saturated phenol. The supernatant after
extraction with Tris saturated phenol was taken and extracted
further with chloroform:isoamyl alcohol (24:1) twice. DNA was
ใบสุขภาพถูกรวบรวมจาก plantlets ตามลำดับสำหรับสกัดดีเอ็นเอ ออกดีเอ็นเอถูกสกัดจากใบสดใช้มาตรฐานในห้องปฏิบัติการ (Sudheer et al.,(2009a)) ประมาณ 0.1 กรัมของเนื้อเยื่อใบ พื้นในไนโตรเจนเหลวถูกวางลงในหลอดหมุนเหวี่ยงขนาดเล็ก 2 mL พร้อมกับ 0.5 mLบัฟเฟอร์สกัด (2% CTAB, 100 mM – ทริสเรทติ้ง HCl, 3.5 M NaCl, 20 มม.EDTA, 0.2 เมตร - Mercaptoethanol, 2% PVP, pH 8.0), และได้รับการกกที่ ◦C 65 สำหรับ 90 นาที ทำการสกัด มีปริมาณเท่ากันของคลอโรฟอร์ม: isoamyl supernatant การดื่มแอลกอฮอล์ (24:1) และเป็นโอนไปหลอดใหม่ ตัวอย่างได้รับการรักษา ด้วย RNAaseและสกัด ด้วยฟีนอลทริอิ่มตัว Supernatant หลังถ่าย และแยกสกัด ด้วยฟีนอลทริอิ่มตัวต่อ ด้วยแอลกอฮอล์คลอโรฟอร์ม: isoamyl (24:1) สองครั้ง เป็นดีเอ็นเอ
การแปล กรุณารอสักครู่..
