Histological analysisHistological a

Histological analysis
Histological analysis was performed with hADSCs in HA and
HA/SA IPN scaffolds cultured in vitro and in vivo. Cells were cultured
in vitro in HA and HA/SA IPN scaffolds for 14 days and
stained with hematoxylin and eosin (H&E) and immunohistochemical
(IHC) staining. Those hADSCs were cultured according to the
method described in Section 2.4. In addition, cells cultured in vivo
in transplanted scaffolds in nude mouse model were used for
IHC staining. All animal experiments were conducted in accordance
with committee guidance and regulation for the use and
care of the Animal Care Committee of Seoul National University
(Approval No. SNU-101004-1-01). Scaffolds seeded with hADSCs
were implanted after 2 weeks of induction in vitro. For in vivo
evaluation, six weeks old BALB/c nude mice were used and they
were divided into two groups. On the dorsum of nude mice, two
subcutaneous pockets were made and one scaffold was transplanted
into each pocket. HA scaffold and HA/SA IPN scaffold seeded
with hADSCs were transplanted into each pocket, respectively. The
implants were harvested after 2 weeks of incubation in vivo. Scaffolds
were carefully excised and fixed with 10% neutral buffered
formalin.
Samples were fixed in 10% neutral buffered formalin overnight
at 4 ◦C, dehydrated using a Tissue-Tek VIP 2000 automatic tissue
processor (Sakura, Ramsey, MN, USA), and then embedded in paraffin.
Paraffin-embedded samples were then sliced at 5 m thickness
and affixed onto glass slides. Sections, only for in vitro samples,
were stained with H&E reagent (Merck, Darmstadt, Germany) after
removing paraffin and consequently rehydrated. The samples were
then observed by light microscopy (Nikon Eclipse TS100, Nikon,
Tokyo, Japan). Both in vitro and in vivo samples were also prepared
for IHC staining. Collagen type II was immunolocalized with mouse
monoclonal antibodies against collagen type II (Abcam, Cambridge,
UK). And it was further developed with secondary antibody and
3,3-diaminobenzidine (DAB) substrate.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วิเคราะห์สรีรวิทยาทำการวิเคราะห์สรีรวิทยากับ hADSCs ในฮา และฮา/SA IPN scaffolds อ่างในหลอดทดลอง และในสัตว์ทดลอง เซลล์มีอ่างการเพาะเลี้ยงใน HA และ HA/SA IPN scaffolds 14 วัน และสี hematoxylin eosin (H & E) และ immunohistochemical(IHC) ย้อมสี HADSCs ที่มีอ่างตามวิธีที่อธิบายไว้ในส่วน 2.4 นอกจากนี้ เซลล์อ่างในสัตว์ทดลองใน scaffolds transplanted ในเมาส์เปลือย ใช้รุ่นสำหรับIHC ย้อมสี สัตว์ทดลองทั้งหมดได้ดำเนินการในคำแนะนำของคณะกรรมการและระเบียบในการใช้งาน และดูแลสัตว์ดูแลกรรมการของโซลแห่งชาติมหาวิทยาลัย(หมายเลขการอนุมัติ SNU-101004-1-01) Scaffolds seeded กับ hADSCsมี implanted หลังสัปดาห์ที่ 2 ของการเพาะเลี้ยง สำหรับในสัตว์ทดลองประเมินผล หกสัปดาห์ใช้ BALB/c เก่าหนูเปลือยกายและพวกเขาถูกแบ่งออกเป็น 2 กลุ่ม บน dorsum ของหนูเปลือยกาย 2ทำกระเป๋าใต้ และนั่งร้านหนึ่งถูก transplantedในแต่ละกระเป๋า ฮา ฮา/SA IPN นั่งร้านและนั่งร้าน seededกับ hADSCs ได้ transplanted เป็นกระเป๋าแต่ละ ตามลำดับ ที่รากเก็บเกี่ยวผลผลิตหลังจากสัปดาห์ที่ 2 ของคณะทันตแพทยศาสตร์ในสัตว์ทดลอง Scaffoldsมี buffered excised รอบคอบ และถาวรด้วย 10% เป็นกลางformalinตัวอย่างที่ถาวรใน 10% formalin ถูกบัฟเฟอร์กลางค้างคืนที่ 4 ◦C อบแห้งโดยใช้เนื้อเยื่อที่อัตโนมัติของเนื้อเยื่อ-Tek VIP 2000ตัวประมวลผล (ซากุระ หอประชุมรัฐสภา MN สหรัฐอเมริกา), และจากนั้น ฝังในพาราฟินตัวอย่างฝังพาราฟินได้แล้วหั่นที่ความหนา 5 เมตรและติดลงบนกระจกสไลด์ ส่วน สำหรับตัวอย่างการเพาะเลี้ยงสีกับ H & อีรีเอเจนต์ (เมอร์ค ดาร์มส เยอรมนี) หลังจากเอาพาราฟิน และ rehydrated ดัง นั้น ตัวอย่างดีแล้ว ตรวจสอบ โดยแสง microscopy (TS100 คราส Nikon, Nikonโตเกียว ญี่ปุ่น) นอกจากนี้ยังได้เตรียมตัวอย่างทั้งในหลอดทดลอง และในสัตว์ทดลองสำหรับ IHC ย้อมสี คอลลาเจนชนิด II ถูก immunolocalized กับเมาส์แอนตี้ monoclonal กับคอลลาเจนชนิด II (Abcam เคมบริดจ์สหราชอาณาจักร) และมันถูกพัฒนาเพิ่มเติม ด้วยแอนติบอดีรอง และ3,3 - diaminobenzidine (เล็กน้อย) พื้นผิว

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การวิเคราะห์ทางจุลกายวิภาควิเคราะห์เนื้อเยื่อได้ดำเนินการกับ hADSCs ใน HA และ HA / SA IPN โครงเพาะเลี้ยงในหลอดทดลองและในร่างกาย เซลล์ที่ถูกเพาะเลี้ยงในหลอดทดลองและใน HA HA / SA โครง IPN เป็นเวลา 14 วันและย้อมด้วยสีhematoxylin และ Eosin (H & E) และ immunocytochemistry ของ(IHC) การย้อมสี hADSCs เหล่านั้นถูกเลี้ยงให้เป็นไปตามวิธีการที่อธิบายไว้ในมาตรา2.4 นอกจากนี้เซลล์เพาะเลี้ยงในร่างกายในโครงปลูกในรูปแบบเมาส์เปลือยถูกนำมาใช้สำหรับการย้อมสีIHC ทั้งหมดสัตว์ทดลองได้ดำเนินการตามคำแนะนำของคณะกรรมการและกฎระเบียบสำหรับการใช้งานและการดูแลของคณะกรรมการดูแลสัตว์ของมหาวิทยาลัยแห่งชาติโซล(ฉบับที่อนุมัติ SNU-101004-1-01) โครงเมล็ดกับ hADSCs ถูกฝังหลังจาก 2 สัปดาห์ของการเหนี่ยวนำในหลอดทดลอง สำหรับในร่างกายประเมินหกสัปดาห์หนู Balb / c เปลือยถูกนำมาใช้และพวกเขาถูกแบ่งออกเป็นสองกลุ่ม ใน dorsum ของหนูเปลือยสองกระเป๋าใต้ผิวหนังได้ทำนั่งร้านและใครได้รับการปลูกถ่ายลงในกระเป๋าของแต่ละคน นั่งร้าน HA HA และนั่งร้าน / SA IPN เมล็ดกับhADSCs ถูกปลูกลงในกระเป๋าของแต่ละคนตามลำดับ รากฟันเทียมเก็บเกี่ยวหลังจาก 2 สัปดาห์ของการบ่มในร่างกาย โครงถูกตัดอย่างระมัดระวังและแก้ไขด้วยบัฟเฟอร์เป็นกลาง 10% ฟอร์มาลิน. ตัวอย่างได้รับการแก้ไขในฟอร์มาลินบัฟเฟอร์เป็นกลาง 10% ในชั่วข้ามคืนที่4 ◦C, อบแห้งโดยใช้เนื้อเยื่อเต็กวีไอพี 2000 เนื้อเยื่ออัตโนมัติหน่วยประมวลผล(ซากุระแรมซีย์, MN, USA) และ แล้วฝังในพาราฟิน. ตัวอย่างพาราฟินฝังตัวถูกหั่นบาง ๆ แล้วที่ 5? เมตรความหนาและติดลงบนกระจกสไลด์ ส่วนเฉพาะสำหรับในตัวอย่างหลอดทดลองถูกย้อมด้วยสาร H & E (เมอร์ค, ดาร์มสตัด, เยอรมนี) หลังจากลบพาราฟินและrehydrated จึง กลุ่มตัวอย่างที่ได้รับการตั้งข้อสังเกตโดยใช้กล้องจุลทรรศน์แสง (Nikon คราส TS100 Nikon, กรุงโตเกียวประเทศญี่ปุ่น) ทั้งในหลอดทดลองและในตัวอย่างร่างกายนอกจากนี้ยังได้จัดเตรียมไว้สำหรับการย้อมสี IHC คอลลาเจนชนิดที่สองได้รับการ immunolocalized ด้วยเมาส์โคลนอลแอนติบอดีกับคอลลาเจนชนิดที่สอง(Abcam เคมบริดจ์, สหราชอาณาจักร) และได้รับการพัฒนาต่อไปด้วยแอนติบอดีรองและ3,3? -diaminobenzidine (DAB) พื้นผิว

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ผลการศึกษาวิเคราะห์ข้อมูลด้วยการวิเคราะห์

ฮาฮา hadscs และ / ซา IPN นั่งร้านเลี้ยงในหลอดทดลองและในสัตว์ทดลอง . เซลล์เพาะเลี้ยงในหลอดทดลองและในฮาฮา
/ ซา IPN นั่งร้านสำหรับ 14 วัน
เปื้อนย้อมและ eosin ( H &
( E ) และในงานวิจัยและ ) staining hadscs ผู้เพาะเลี้ยงตามวิธีการที่อธิบายไว้ในมาตรา 5
. นอกจากนี้เซลล์เพาะเลี้ยงในหลอดทดลองในการฉายในรูปแบบเมาส์นั่งร้าน

นู้ดใช้สำหรับงานวิจัยและ staining สัตว์ทดลองทั้งหมดมีวัตถุประสงค์ที่สอดคล้องกับแนวทางและข้อกำหนดสำหรับคณะกรรมการ

ดูแลการใช้และดูแลสัตว์คณะกรรมการของมหาวิทยาลัยแห่งชาติโซล
( snu-101004-1-01 ไม่อนุญาต ) นั่งร้าน seeded กับ hadscs
ถูกฝังหลังจากเหนี่ยวนำในหลอดทดลอง 2 สัปดาห์ ในสัตว์ทดลอง
การประเมินอายุ 6 สัปดาห์ balb / c Nude หนูถูกใช้และพวกเขา
แบ่งออกเป็นสองกลุ่ม ในบริเวณของหนูเปลือย 2
1 กระเป๋าเป็นหนึ่งนั่งร้านถูก transplanted
ในแต่ละกระเป๋า ฮาฮา / ซานั่งร้านและนั่งร้าน IPN seeded
กับ hadscs ถูกปลูกถ่ายลงในแต่ละกระเป๋า ตามลำดับ
ฝังเก็บเกี่ยวหลังจากบ่มในสัตว์ทดลอง 2 สัปดาห์ นั่งร้าน
ถูกตัดอย่างระมัดระวังและคงที่ 10% ฟอร์มาลินที่เป็นกลางนี้
.
จำนวนคงที่ 10% neutral buffered formalin เป็นค้างคืน
ที่ 4 ◦ C แห้ง ใช้ทิชชู่เต็ก VIP 2000 อัตโนมัติเนื้อเยื่อ
หน่วยประมวลผลกลาง ( ซากุระ , แรมซี่ย์ , MN , USA ) , และจากนั้น ฝังในพาราฟิน พาราฟินฝังตัว
จำนวนแล้วหั่นบาง ๆ 5  เมตร ความหนา และติดบนกระจกสไลด์
. ส่วน เพียง สำหรับตัวอย่างการ
ถูกย้อมด้วยสี H & E Reagent ( เมอร์คดาร์มสตัดท์ , เยอรมนี ) หลังจาก
เอาพาราฟิน และจากนั้นได้ทำการ รีไฮเดรทม . จำนวน
แล้วสังเกตด้วยกล้องจุลทรรศน์แสง ( Nikon คราส ts100 , Nikon ,
โตเกียว , ญี่ปุ่น ) ทั้งในหลอดทดลองและในตัวอย่างอาหารถูกจัดเตรียมไว้
สำหรับงานวิจัยและ staining คอลลาเจนประเภทที่สองคือ immunolocalized ด้วยเมาส์
โมโนโคลนอลแอนติบอดีต่อคอลลาเจนชนิดที่ 2 (
ABCAM เคมบริดจ์ สหราชอาณาจักร )และมันก็พัฒนาต่อไปด้วยการมัธยมศึกษาและ
3 , 3  - diaminobenzidine ( DAB ) สาร