Staining Protocols1. Staining DNA b

Staining Protocols
1. Staining DNA by Post Gel Staining
a. Run gels as usual according to your standard protocol.
b. Dilute the GelRed(TM) 10000X stock solution about 3,300 fold to prepare a 3X staining solution in water with 0.1M NaCl (e.g.
add 15μL of GelRed(TM) stock solution and 5mL NaCl to 45mL water).
While GelRed(TM) 1X staining solution can also be used for post gel staining, the sensitivity is generally less than with 3X staining
solution
(NOTE: inspect the 10000X vial carefully. If dye precipitation occurs, heat up or sonicate the vial).
Use of NaCl in the staining solution is optional. NaCl in the solution enhances the staining, but may promote dye precipitation if the
staining solution is to be used repeatedly. Any staining solution to be re-used is preferably stored at room temperature in a dark
place to reduce possible dye precipitation problems.
c. Carefully place the gel in a suitable container such as a polypropylene container. Gently add sufficient amount of the 3X staining
solution to submerge the gel.
d. Agitate gel gently at room temperature for about 30 minutes. Optimal staining time may vary somewhat depending on the
thickness of the gel and the percentage of agarose. For polyacrylamide gels containing 3.5 – 10% acrylamide, typical staining time
is 30 minutes up to 1 hour with gels of higher acrylamide content requiring longer staining time. The staining solution can be reused
at least 2-3 times. The unused staining solution can be stored at room temperature in a dark place.
e. View the stained gel with a standard transilluminator (302nm o 312nm) and photograph the gel using
an ethidium bromide filter. Similarly, a SYBR(R) or GelStar(R) filter may also be used for
photographing with equally good results.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ย้อมสีโพรโทคอล1. ย้อมดีเอ็นเอ โดยลงสีย้อมสีเจลอ.รันเจตามปกติตาม protocol ของมาตรฐานb. dilute GelRed(TM) 10000 X หุ้นโซลูชันเกี่ยวกับพับ 3,300 เพื่อเตรียมความพร้อม 3 X ย้อมสีโซลูชันในน้ำ 0.1 M NaCl (เช่นเพิ่ม 15μL หุ้นของ GelRed(TM) และ 5 mL NaCl น้ำ 45 mL)ในขณะที่ยังสามารถใช้ GelRed(TM) 1 X ย้อมสีโซลูชันสำหรับการย้อมสีเจลลง ระดับความสำคัญโดยทั่วไปจะ less than 3 X ย้อมสีโซลูชั่น(หมายเหตุ: ตรวจสอบคอนแทค X 10000 อย่างระมัดระวัง ถ้าย้อมฝนเกิดขึ้น ความร้อนขึ้น หรือ sonicate คอนแทค)ไม่จำเป็นใช้ NaCl ในโซลูชัน staining NaCl ในโซลูชั่นช่วยในการย้อมสี แต่อาจส่งเสริมฝนย้อมถ้าการโซลูชันการย้อมสีจะถูกใช้ซ้ำ ๆ จะใช้อีกวิธี staining ควรเก็บที่อุณหภูมิห้องในมืดทำเพื่อลดปัญหาฝนย้อมได้ค.รอบคอบวางเจในภาชนะที่เหมาะสมเช่นคอนเทนเนอร์ polypropylene ค่อย ๆ เพิ่มจำนวนเพียงพอ 3 X ย้อมสีโซลูชั่นมิดเจd. ก่อกวนเจเบา ๆ ที่อุณหภูมิห้องประมาณ 30 นาที เวลาย้อมสีที่ดีที่สุดอาจแตกต่างกันค่อนข้างขึ้นอยู่กับการความหนาของเจและเปอร์เซ็นต์ของ agarose สำหรับ polyacrylamide gels ประกอบด้วย 3.5 – 10% อะคริลาไมด์ เวลาย้อมสีทั่วไป30 นาทีขึ้นอยู่กับ 1 ชั่วโมงกับเจของอะคริลาไมด์เนื้อหาสูงที่ต้องใช้เวลาย้อมสีอีกต่อไป สามารถนำมาแก้ปัญหา stainingน้อย 2 - 3 ครั้ง โซลูชัน staining ไม่สามารถเก็บที่อุณหภูมิห้องในมืดอีดูเจทิ้งคราบกับ transilluminator มาตรฐาน (302nm o 312nm) และถ่ายรูปการใช้เจลตัวกรองโบรไมด์ ethidium ในทำนองเดียวกัน ตัว SYBR(R) หรือ GelStar(R) นอกจากนี้ยังสามารถใช้สำหรับถ่ายภาพกับผลลัพธ์ที่ดีอย่างเท่าเทียมกัน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

โปรโตคอลการย้อมสี
1 ดีเอ็นเอการย้อมสีโดยโพสต์เจลย้อมสี
เรียกใช้เจลตามปกติตามโปรโตคอลมาตรฐานของคุณ.
ข เจือจาง GelRed (TM) 10000x การแก้ปัญหาเกี่ยวกับหุ้น 3,300 เท่าในการเตรียมสารละลายสีย้อม 3X ในน้ำที่มี 0.1M โซเดียมคลอไรด์
(เช่นเพิ่ม15μLของGelRed (TM) วิธีการแก้ปัญหาสต็อกและ 5ml โซเดียมคลอไรด์ลงไปในน้ำ 45ml.)
ในขณะที่ GelRed (TM) 1X การย้อมสี วิธีการแก้ปัญหานอกจากนี้ยังสามารถใช้สำหรับการโพสต์การย้อมสีเจลไวจะน้อยกว่าด้วยการย้อมสี 3X
การแก้ปัญหา
(หมายเหตุ:. ตรวจสอบขวด 10000x ระมัดระวังหากตกตะกอนสีย้อมเกิดความร้อนขึ้นหรือ sonicate ขวด).
การใช้โซเดียมคลอไรด์ในการแก้ปัญหาการย้อมสีเป็น ไม่จำเป็น โซเดียมคลอไรด์ในการแก้ปัญหาช่วยเพิ่มการย้อมสี
แต่อาจส่งเสริมการตกตะกอนสีย้อมถ้าสารละลายสีย้อมที่จะใช้ซ้ำแล้วซ้ำอีก วิธีการแก้ปัญหาการย้อมสีใด ๆ
ที่จะนำมาใช้อีกครั้งโดยเฉพาะอย่างยิ่งจะถูกเก็บไว้ที่อุณหภูมิห้องในที่มืดสถานที่ที่จะลดปัญหาการตกตะกอนสีย้อมที่เป็นไปได้.
ค ระมัดระวังเจลวางในภาชนะที่เหมาะสมเช่นภาชนะโพรพิลีน ค่อยๆเพิ่มปริมาณที่เพียงพอของการย้อมสี 3X
วิธีการแก้จมลงใต้น้ำเจล.
d รณรงค์เจลเบา ๆ ที่อุณหภูมิห้องประมาณ 30 นาที เวลาการย้อมสีที่ดีที่สุดอาจจะแตกต่างกันบ้างขึ้นอยู่กับความหนาของเจลและร้อยละของ agarose
สำหรับเจลอะคริเลตที่มี 3.5 - ริลาไมด์ 10%, การย้อมสีเวลาปกติ
30 นาทีถึง 1 ชั่วโมงกับเนื้อหาเจลริลาไมด์สูงต้องใช้เวลาในการย้อมสีอีกต่อไป วิธีการแก้ปัญหาการย้อมสีสามารถนำกลับมาใช้อย่างน้อย 2-3 ครั้ง
วิธีการแก้ปัญหาการย้อมสีที่ไม่ได้ใช้จะถูกเก็บไว้ที่อุณหภูมิห้องในที่มืด.
อี ดูเจลสีที่มีมาตรฐาน transilluminator (302nm o 312nm)
และถ่ายภาพโดยใช้เจลตัวกรองethidium bromide ในทำนองเดียวกัน SYBR (R) หรือ GelStar (R)
ตัวกรองนอกจากนี้ยังอาจจะใช้สำหรับการถ่ายภาพที่มีผลดีอย่างเท่าเทียมกัน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การย้อมสีโปรโตคอล
1 โพสต์โดยการย้อมสีดีเอ็นเอเจลย้อมสี
A รันเจลตามปกติ ตามขั้นตอนมาตรฐานของคุณ .
b . เจือจาง gelred ( TM ) 10000x โซลูชั่นหุ้นประมาณ 3300 พับเตรียมย้อมในน้ำกับ 0.1m 3x สารละลายเกลือ ( เช่น
เพิ่ม 15 μ l gelred ( TM ) โซลูชั่น หุ้น และ ก 45ml น้ำเกลือ ) .
ตอนที่ gelred ( TM ) 1 . โซลูชั่นที่สามารถใช้สำหรับการโพสต์เจล ,ความไวโดยทั่วไปน้อยกว่าด้วย 3x

( หมายเหตุ : โซลูชั่นการตรวจสอบ 10000x ขวดอย่างระมัดระวัง ถ้าการตกตะกอนสีขึ้น ร้อนขึ้น หรือ sonicate ขวด ) .
ใช้เกลือในการแก้ปัญหาคือตัวเลือก เกลือโซเดียมคลอไรด์ในโซลูชั่นที่ช่วยเพิ่มคราบ แต่อาจส่งเสริมการตกตะกอนสีถ้า
staining โซลูชั่นจะใช้ซ้ำแล้วซ้ำอีกการแก้ไขใด ๆได้อีกที่ใช้ควรเก็บไว้ที่อุณหภูมิห้องในที่มืด
เพื่อลดปัญหาการตกตะกอนสีเป็นไปได้ .
c อย่างที่เจลที่บรรจุในภาชนะที่เหมาะสม เช่น โพลีโพรพิลีน คอนเทนเนอร์ ค่อย ๆเพิ่มปริมาณเพียงพอของการแก้ไข 3x

d าเจล เจลเบา ๆเกิดที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลาประมาณ 30 นาทีเวลาที่เหมาะสมวิธีการอาจแตกต่างกันบ้างขึ้นอยู่กับ
ความหนาของเจล และร้อยละ 36 . สำหรับ polyacrylamide เจลที่มี 3.5 – 10% อะคริลาไมด์ ปกติคราบเวลา
คือ 30 นาที ถึง 1 ชั่วโมง ด้วยเจลอะคริลาไมด์สูงกว่าเนื้อหาที่ต้องการย้อมอีกต่อไปเวลา การย้อมสีสามารถแก้ปัญหา 2
อย่างน้อย 2-3 ครั้งการใช้วิธีการแก้ปัญหาสามารถเก็บไว้ที่อุณหภูมิห้องในที่มืด .
e ดูเปื้อนเจลกับมาตรฐาน transilluminator ( 302nm O 312nm ) และถ่ายภาพเจลใช้
เป็นทิเดียมโบรไมด์ตัวกรอง ในทำนองเดียวกัน , SYBR ( R ) หรือ gelstar ( R ) กรองอาจจะใช้สำหรับ
ถ่ายภาพกับผลลัพธ์ที่ดีอย่างเท่าเทียมกัน