Chronic Rhinosinusitis With Nasal P

Chronic Rhinosinusitis With Nasal Polyps: A Proteomic Analysis
David C. Upton, MD; Nathan V. Welham, PhD; John S. Kuo, MD, PhD; Jeffery W. Walker, PhDf ;ThomasR.Pasic,MD

Objectives: Chronic rhinosinusitis with nasal polyps (CRSwNP) is a severe subtype of chronic rhinosinusitis that can affect patients despite medical and surgical interventions. The purpose of this study was to utilize the techniques of proteomics to investigate differences in protein abundance within the sinonasal mucosa of patients with CRSwNP compared to healthy controls. Methods: In a case-control study at a tertiary-care academic medical center, sinonasal mucosa was harvested from 3 patients with CRSwNP and 3 control patients undergoing transsphenoidal excision of pituitary tumors. Two-dimensional gel electrophoresis was used to identify proteins with elevated or reduced abundance in CRSwNP patients compared to controls. The proteins showing the greatest abundance difference were characterized by mass spectrometry. Results: More than 300 differentially abundant proteins (p < 0.05) were identified. Many of these protein species were involved in the host inflammatory response. Proteins up-regulated in CRSwNP patients included eosinophil lysophospholipase by a ratio (R) of 18.13, RHO-GDP dissociation inhibitor 2 (R = 2.80), and apolipoprotein A-1 (R = 1.73). Down-regulated proteins in CRSwNP patients included catalase (R = -5.87), annexin Al (R = -6.27), and keratin II-8 (R =-6.73) . A detailed analysis of additional protein species is outlined. Conclusions: The proteomic approach allows detection of significant differences in protein abundance in CRSwNP and provides unique insight into the pathophysiology of this common disease. Key Words: annexin A1 , apolipoprotein A-1 , chronic rhinosinusitis, eosinophil, nasal polyp, polyposis pathophysiology, proteomics.

INTRODUCTION
Chronic rhinosinusitis (CRS) is a common chronic illness in the United States that affects 14% to16% of the urban population.' Although significant multidisciplinary research has been devoted to studying the disease, the pathophysiology of CRSis not yet fully understood. It is thought to have anumber of contributing causes, including infection, inflammation, anatomic abnormalities, and genetic susceptibility. Along the spectrum of this disease, chronic rhinosinusitis with nasal polyps (CRSwNP) is a severe subtype, characterized by persistent eo- sinophilic inflammation, edematous mucosa withpolyps, and thickened sinonasal secretions, that pos-es a therapeutic challenge to clinicians despite medi-cal and surgical interventions .2 Previous complementary DNA microarray and immunohistochemical studies on the pathophysiology of the disease have suggested that CRS may represent a dysregulation of normal mucosal immune mechanisms that act to protect or repair the sino- nasal epithelium.-^-4 More recently, proteomics has been used to study CRS, primarily because it allows the simultaneous system-wide characterization of all proteins present in a given biological condition at a given time. The techniques used in proteomic research consist of 1) separating protein molecules via gel electrophoresis or liquid capillary chroma-tography, 2) subjecting the separated proteins to mass spectrometry (MS) to generate characteris- tic mass spectra, and 3) comparing the mass spec- tra against established databases to identify the pro- teins of interest. These techniques have been usedto identify qualitative and quantitative differences in ject s and patients with CRS.^ The majority of previ- ously identified proteins are involved in innate and From the Department of Surgery, Division of Otolaryngology (Upton, Welham, Pasic), and the Department of Neurological Surgery (Kuo), University of Wisconsin Hospital and Clinics, Madison, Wisconsin, and the Department of Physiology, University of Arizona, Tucson, Arizona (Walker). Supported by grant funding from the American Academy of Otolaryngic Allergy (ROAD scholarship) and the University of Wisconsin Department of Surgery, Division of Otolaryngology. †Deceased. Presented at the meeting of the American Academy of Otolaryngic Allergy, San Diego, California, October 2-4,2009, and the meeting of the Wisconsin Society of Otolaryngology, Madison, Wisconsin, October 24-25,2009 .Correspondence: Thomas R. Pasic, MD, Dept of Surgery, Division of Otolaryngology, University of Wisconsin Hospital and Clinics, 600 Highland Ave, Madison, WI 53792.
acquired immunity and mucosal defense. To date proteomic investigation of the sinonasal mucosa of patients with CRSwNP has been promising.^ techniques have the potential to identify unique proteins expressed in the mucosa of patients with CRSwNP, which in turn may improve understanding of the pathophysiology of the disease and uncover new targets for therapeutic intervention. purpose of this study was to investigate differences in protein abundance within the sinonasal mucosa patients with CRSwNP compared to healthy subjects by use of a proteomic approach the absence of active sinonasal inflammation con- firmed on preoperative magnetic resonance imaging and nasal endoscopy before tissue sampling. Fxclu- sion criteria included active tobacco use, inability to give informed consent, pregnancy or lactation, autoimmune disease affecting the nose and sinuses (eg, Wegener's granulomatosis), and sinonasal neoplasms.
MATERIALS AND METHODS
Patient Selection. This study was approved by the Institutional Review Board at the University of Wisconsin Hospitals and Clinics (Madison, Wiscon-sin), and all subjects gave signed informed consent. A case-control study was performed to determinedifferences in protein abundance in patients with CRSwNP compared to normal subjects. The patient swere recruited from the senior author's (T.R.P.) prac-tice. A total of 6 individuals (3 patients, 3 controls) participated in the study. The diagnosis of CRSwNPwas based on a set of clinical criteria previously de-fined by the American Academy of Otolaryngolo-gy-Head and Neck Surgery Chronic RhinosinusitisTask Force and was confirmed on nasal endoscopy.^ All patients underwent a preoperative coronal com- puted tomographic scan of the sinuses in bone win- dow settings to further assess the extent of sinona-sal disease (Fig 1). Before endoscopie sinus surgery, the patients with CRSwNP received 1 week of oralprednisone and oral antibiotics. Individuals selected to act as controls in this study were recruited from patients who were undergoing resection of pituitary gery for clinical symptoms of rhinosinusitis and had
Sample Collection.Tissue samples of the mucosal lining of the paranasal sinuses were collected under endoscopie guidance, rinsed of overlying debris in 0.9% sodium chloride solution, and then snap-fro- zen in liquid nitrogen. The tissue samples were kept at -80°C until analysis. All tissue specimens were taken from either the ethmoid or sphenoid sinuses; tissue from olfactory-bearing regions of the nasal cavity was not harvested. All tissue was sent fresh for microbiological analysis, bacterial and fungal culture, and histologie examination.
Two-Dimensional Gel Electwphoresis. The sam- ples were homogenized with glass dounces in 1 mL each of osmotic lysis buffer containing nucle- ase, phosphatase inhibitors, and a protease inhibitor. Next, 500 |iL sodium dodecyl sulfate (SDS) boiling buffer without ß-mercaptoethanol was added, and the samples were heated in a boiling water bath for 5 minutes. Total protein quantization was performed by the bicinchoninic acid assay (Pierce, Rockford, Illinois). The samples were then diluted to 6.0 mg/ mL in equal parts SDS boiling buffer and urea sam- ple buffer before loading. Two-dimensional electro- phoresis was performed according to the carrier am- pholine method by Kendrick Labs, Inc (Madison), as follows. Isoelectric focusing was carried out in a glass tube of inner diameter 3.0 mm with 2.0% pH 3.5 to 10 ampholines (Amersham Biosciences, Pis- cataway. New Jersey) for 20 kilovolt hours. One mi- crogram of an isoelectric focusing internal standard.
tropomyosin, was added to the sample. After equili-bration for 10 minutes in "buffer 0" (10% glycer- ol, 50 mmol/L dithiothreitol, 2.3% SDS, and 0.0625 mol/L Tris, pH 6.8), the tube gel was sealed to the top of a stacking gel that overlaid a 10% acrylamide slab gel (1.0 mm thick). SDS slab gel electro pho-resis w

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Rhinosinusitis เรื้อรัง มี Polyps โพรงจมูก: วิเคราะห์แบบ Proteomic
Upton C. ดาวิด MD นาธาน V. Welham ดร. จอห์น S. Kuo, MD ปริญญาเอก เจฟตะวันตกวอล์คเกอร์ PhDfThomasR.Pasic,MD

วัตถุประสงค์: rhinosinusitis เรื้อรัง มี polyps โพรงจมูก (CRSwNP) เป็นชนิดย่อย rhinosinusitis เรื้อรังที่อาจมีผลต่อผู้ป่วยแม้ มีการแทรกแซงทางการแพทย์ และศัลยกรรมที่รุนแรง วัตถุประสงค์ของการศึกษานี้ได้ใช้เทคนิคของโปรตีโอมิกส์เพื่อตรวจสอบความแตกต่างในความอุดมสมบูรณ์ของโปรตีนภายใน mucosa sinonasal ของผู้ป่วยที่ มี CRSwNP ที่เปรียบเทียบการควบคุมสุขภาพ วิธีการ: ในการศึกษาการควบคุมกรณีที่ดูแลตติยวิชาการศูนย์การแพทย์ sinonasal mucosa ถูกเก็บเกี่ยวจาก CRSwNP 3 ผู้ป่วยและผู้ป่วยควบคุม 3 ระหว่าง transsphenoidal ตอนการผ่าตัดของเนื้องอกใต้สมอง Electrophoresis เจสองถูกใช้เพื่อระบุโปรตีน ด้วยการยกระดับ หรือลดลงมากในผู้ป่วย CRSwNP เปรียบเทียบกับตัวควบคุม โปรตีนที่แสดงความแตกต่างมากมายสุดถูกลักษณะ โดยรเมท ผลลัพธ์: โปรตีน differentially มากมายมากกว่า 300 (p < 0.05) ได้ระบุ หลายพันธุ์โปรตีนเกี่ยวข้องในการตอบสนองการอักเสบโฮสต์ โปรตีนที่กำหนดขึ้นในผู้ป่วย CRSwNP รวมอีโอซิโน lysophospholipase โดยอัตราส่วน (R) ของผล 18.13 ครอ GDP dissociation 2 (R = 2.80), และ apolipoprotein A-1 (R = 1.73) ควบคุมลงโปรตีนในผู้ป่วย CRSwNP รวม catalase (R =-5.87), อัล annexin (R =-6.27), และ keratin II-8 (R =-6.73) วิเคราะห์รายละเอียดของชนิดโปรตีนเพิ่มเติมมีรายละเอียด บทสรุป: วิธี proteomic ช่วยให้ตรวจพบความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญในความอุดมสมบูรณ์ของโปรตีนใน CRSwNP และมีความเข้าใจถึง pathophysiology ของโรคนี้ทั่วไปเฉพาะ คำสำคัญ: annexin A1, apolipoprotein A-1 เรื้อรัง rhinosinusitis อีโอซิโน โปลิโพรงจมูก polyposis pathophysiology โปรตีโอมิกส์

แนะนำ
rhinosinusitis เรื้อรัง (CRS) เป็นโรคทั่วไปในสหรัฐอเมริกาที่มีผลต่อ 14 to16% ของประชากรเมือง.' แม้ว่าจะมีการทุ่มเทวิจัย multidisciplinary ที่สำคัญในการศึกษาโรค pathophysiology ของ CRSis ยังไม่ได้อย่างเข้าใจ คิดว่า จะมี anumber ของสนับสนุนสาเหตุ ติดเชื้อ อักเสบ ความผิดปกติที่ anatomic และอ่อนแอทางพันธุกรรม ตามสเปกตรัมของโรคนี้ rhinosinusitis เรื้อรัง มี polyps โพรงจมูก (CRSwNP) เป็นชนิดย่อยรุนแรง โดยอีโอ sinophilic แบบอักเสบ edematous mucosa withpolyps และ thickened sinonasal หลั่ง ว่า pos-es clinicians แม้มีเมดิ-cal และ 2 การรักษาผ่าตัดก่อนหน้านี้เสริม DNA microarray และ immunohistochemical ท้าทายบำบัดศึกษาเกี่ยวกับ pathophysiology ของโรคได้แนะนำว่า CRS อาจแสดง dysregulation ปกติ mucosal ภูมิคุ้มกันกลไกที่ดำเนินการเพื่อป้องกัน หรือซ่อมแซม epithelium sino-นาสิก . -
-มีการใช้ 4 เพิ่มเติมล่าสุด โปรตีโอมิกส์เพื่อศึกษา CRS หลัก เพราะจะช่วยให้คุณสมบัติทั้งระบบพร้อมกันของโปรตีนทั้งหมดอยู่ในสภาพชีวภาพกำหนดในเวลาที่กำหนด เทคนิคที่ใช้ในการวิจัย proteomic ประกอบด้วย 1) แยกโมเลกุลโปรตีน electrophoresis เจลหรือของเหลวเส้นเลือดฝอยความ-tography 2 การแล้วก็กดชัตเตอร์การแยกโปรตีนจะโตรเมทรี (MS) เพื่อสร้างแรมสเป็คตราโดยรวม characteris รับผลิตกระป๋อง และ 3) เปรียบเทียบสเปคโดยรวมตรากับสร้างฐานข้อมูลเพื่อระบุ teins โปรน่าสนใจ เทคนิคเหล่านี้ได้รับ usedto ระบุความแตกต่างเชิงคุณภาพ และเชิงปริมาณใน ject s และผู้ป่วยกับ CRS.
Previ-ously ระบุโปรตีนส่วนใหญ่เกี่ยวข้อง ในข้อสอบ และ จากแผนกศัลยกรรม แผนกโสตศอ นาสิกวิทยา (Upton, Welham, Pasic), และแผนกของระบบประสาทผ่าตัด (Kuo), โรงพยาบาลมหาวิทยาลัยวิสคอนซิน และคลินิก เมดิสัน วิสคอนซิน และภาควิชาสรีรวิทยา มหาวิทยาลัย แอริโซนา ทูซอน รัฐแอริโซนา (วอล์คเกอร์) ได้รับการสนับสนุน โดยเงินช่วยเหลือเงินทุนจากสถาบันอเมริกันแพ้ Otolaryngic (ถนนทุน) และวิชาผ่าตัด แผนกโสตศอนาสิกวิทยามหาวิทยาลัยวิสคอนซิน †Deceased นำเสนอในการประชุมเดือนตุลาคมสถาบัน Otolaryngic แพ้ ซานดิเอโก แคลิฟอร์เนีย สหรัฐอเมริกา 2-4,2009 และการประชุมวิสคอนซินสมาคมโสตศอนาสิกวิทยา เมดิสัน วิสคอนซิน 24-25 ตุลาคม2009ติดต่อ: Thomas R. Pasic, MD แผนกศัลยกรรม แผนกโสตศอนาสิกวิทยา โรงพยาบาลมหาวิทยาลัยวิสคอนซิน และ คลินิก 600 ไฮแลนด์ Ave เมดิสัน WI 53792.
ซื้อภูมิคุ้มกันและป้องกัน mucosal การสืบสวน proteomic วัน sinonasal mucosa ของผู้ป่วย CRSwNP ได้รับสัญญา
เทคนิคอาจระบุเฉพาะโปรตีนแสดง mucosa ของผู้ป่วยที่มี CRSwNP ซึ่งจะได้อาจปรับปรุงความเข้าใจของ pathophysiology ของโรค และค้นพบเป้าหมายใหม่สำหรับรักษาโรคแทรกแซง วัตถุประสงค์ของการศึกษานี้การ ตรวจสอบความแตกต่างในความอุดมสมบูรณ์ของโปรตีนในผู้ป่วย mucosa sinonasal กับ CRSwNP เปรียบเทียบกับเรื่องสุขภาพ โดยใช้การ proteomic วิธีการของ sinonasal งานอักเสบคอน - ยืนยันภาพสั่นพ้องแม่เหล็ก preoperative และส่องกล้องโพรงจมูกก่อนสุ่มตัวอย่างเนื้อเยื่อได้ Fxclu-sion เกณฑ์รวมที่ใช้งานยาสูบ ไม่ให้แจ้งความยินยอม ตั้งครรภ์ หรือด้านการให้นม โรคที่ผิดปกติมีผลต่อจมูก และไซนัสมีลักษณะ (เช่น granulomatosis ของ Wegener), และ sinonasal neoplasms
วัสดุและวิธีการ
เลือกผู้ป่วย การศึกษานี้ได้รับการอนุมัติ โดยคณะกรรมการตรวจสอบสถาบันที่มหาวิทยาลัยวิสคอนซินโรงพยาบาลและคลินิก (เมดิสัน Wiscon บาป), และเรื่องทั้งหมดให้แจ้งความยินยอมเซ็น การควบคุมกรณีศึกษาที่ดำเนินการเพื่อ determinedifferences ระนาวโปรตีนในผู้ป่วยที่ มี CRSwNP ที่เปรียบเทียบกับหัวข้อปกติ Swere ผู้ป่วยพิจารณาจากอาวุโสของผู้เขียน (T.R.P.) prac tice จำนวน 6 คน (ผู้ป่วย 3 ควบคุม 3) เข้าร่วมในการศึกษา การวินิจฉัยของ CRSwNPwas ตามชุดเงื่อนไขที่ทางคลินิกปรับ de-อเมริกันออสการ์ของ Otolaryngolo gy-หัวและคอผ่าตัดเรื้อรัง RhinosinusitisTask แรง และได้รับการยืนยันในโพรงจมูกส่องกล้องก่อนหน้านี้
สแกน tomographic coronal preoperative com puted ในการตั้งค่าดาวชนะกระดูกเพื่อประเมินขอบเขตของโรคแซล sinona (ฟิก 1) เพิ่มเติม ของแต่ละผู้ป่วยทั้งหมด ผู้ป่วยที่ มี CRSwNP ได้รับสัปดาห์ที่ 1 ของยาปฏิชีวนะ oralprednisone และช่องปากก่อนการผ่าตัดไซนัส endoscopie บุคคลที่เลือกเพื่อทำหน้าที่เป็นตัวควบคุมในการศึกษานี้ได้พิจารณาจากผู้ป่วยที่ถูกผ่าตัด resection gery ค้นสำหรับอาการทางคลินิกของ rhinosinusitis และมี
เก็บตัวอย่างตัวอย่างเนื้อเยื่อของเยื่อบุ mucosal ของ paranasal ถูกเก็บรวบรวมภายใต้คำแนะนำ endoscopie, rinsed ของเศษเหล่านั้นในโซลูชันโซเดียมคลอไรด์ 0.9% แล้วสแนปหวีเซนในไนโตรเจนเหลว ตัวอย่างเนื้อเยื่อถูกเก็บไว้ที่-80 ° C จนถึงการวิเคราะห์ ไว้เป็นตัวอย่างเนื้อเยื่อทั้งหมดที่ได้มาจากการเอทมอยด์ หรือ sphenoid ไซนัสมีลักษณะ เนื้อเยื่อจากแคว้นโพรงจมูก โพรงเรืองสมานไม่เก็บเกี่ยวผลผลิต เนื้อเยื่อทั้งหมดถูกส่งสดสำหรับวิเคราะห์ทางจุลชีววิทยา วัฒนธรรมเชื้อแบคทีเรีย และเชื้อรา และตรวจสอบ histologie
สองเจ Electwphoresis สาม-ples ถูก homogenized เป็นกลุ่มกับ dounces แก้วใน 1 mL แต่ละบัฟเฟอร์ lysis การออสโมติกประกอบด้วย nucle ase, inhibitors ฟอสฟาเตส และผลรติเอส ถัดไป 500 |iL โซเดียม dodecyl ซัลเฟตบัฟเฟอร์เดือด (SDS) โดยไม่ต้องเข้ามา mercaptoethanol บาท และตัวอย่างถูกความร้อนในน้ำน้ำเดือด 5 นาที Quantization โปรตีนรวมที่ดำเนินการ โดยการ bicinchoninic กรดทดสอบ (เพียร์ซ ร็อคฟอร์ด อิลลินอยส์) ตัวอย่างแล้วผสมกับ 6.0 mg/mL ใน SDS ส่วนเท่ากันต้มบัฟเฟอร์และบัฟเฟอร์ของแซมเปิ้ลยูเรียก่อนการโหลด Electro phoresis สองที่ดำเนินการตามวิธี pholine น.ผู้ขนส่ง โดยเคนดริก Labs, Inc (เมดิสัน), เป็นดังนี้ Isoelectric เน้นทำออกมาในหลอดแก้วเส้นผ่านศูนย์กลางภายใน 3.0 มม. มี ampholines ค่า pH 3.5-10 2.0% (เวลาออก Amersham, Pis-cataway เสื้อใหม่) kilovolt 20 ชั่วโมง หนึ่ง mi - crogram เป็นมาตรฐานภายใน isoelectric มุ่งพัฒนา
tropomyosin ถูกเพิ่มเข้าไปตัวอย่าง หลังจาก equili-bration ใน 10 นาที "บัฟเฟอร์ 0" (10% glycer-ol, 50 mmol/L dithiothreitol, 2.3% SDS และโมล 0.0625 L ตรี pH 6.8), หลอดเจถูกปิดผนึกไปยังด้านบนของเจซ้อนที่ overlaid เจพื้นอะคริลาไมด์ 10% (1.0 mm หนา) SDS พื้นเจ electro resis โพธิ์ขาว

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

โรคเรื้อรัง rhinosinusitis กับช่องจมูก polyps : โปรตีนการวิเคราะห์
เดวิดซี. Upton , MD ; นาธาน วี welham เอก ; John S . Kuo , MD , PhD ; เจฟ ดับเบิลยู วอล์คเกอร์ phdf ; thomasr . pasic วัตถุประสงค์ MD

: โรคเรื้อรัง rhinosinusitis กับช่องจมูก polyps ( crswnp ) เป็นชนิดย่อยของ rhinosinusitis รุนแรงเรื้อรังที่สามารถส่งผลกระทบต่อผู้ป่วย แม้จะมีการแทรกแซงทางการแพทย์และศัลยกรรมการวิจัยครั้งนี้มีวัตถุประสงค์เพื่อใช้เทคนิคโปรตีโอมิกส์เพื่อศึกษาความแตกต่างในความอุดมสมบูรณ์ของโปรตีนในเยื่อบุ sinonasal ของผู้ป่วย crswnp เมื่อเทียบกับการควบคุมสุขภาพ ระเบียบวิธีในการศึกษาทางระบาดวิทยาที่พยาบาลวิชาการศูนย์การแพทย์ ,sinonasal เยื่อเมือกเก็บเกี่ยวจาก 3 ผู้ป่วยและผู้ป่วยที่เข้ารับการผ่าตัด crswnp ควบคุม 3 transsphenoidal เนื้องอกต่อมใต้สมอง . เจล 2 มิติเพื่อศึกษาโปรตีนเพิ่มขึ้น หรือลดลงความอุดมสมบูรณ์ในผู้ป่วย crswnp เมื่อเทียบกับการควบคุม โปรตีนที่แสดงความแตกต่างมากที่สุดอุดมสมบูรณ์ถูก characterized โดยแมสสเปกโทรเมตรี ผลลัพธ์ :มากกว่า 300 ชนิดต่างกันมากมาย ( P < 0.05 ) มีการระบุ . หลายของชนิดโปรตีนเหล่านี้เกี่ยวข้องกับโฮสต์การตอบสนองการอักเสบ กระตุ้นโปรตีนในผู้ป่วย crswnp รวมจำนวน lysophospholipase โดยอัตราส่วน ( R ) เนื่องจากการใช้ rho-gdp , 2 ( r = 2.80 ) และฮอร์โมนเพศหญิงก ( r = 1.73 )ลงควบคุมโปรตีนในผู้ป่วย crswnp สามารถรวม ( r = - 5.87 ) ของเซลล์ล ( r = 6.27 ) , และ keratin ii-8 ( r = - 6.73 ) การวิเคราะห์รายละเอียดของชนิดโปรตีนเพิ่มเติมที่ระบุไว้ . สรุป : วิธีการตรวจหาโปรตีนช่วยให้ความแตกต่างมากมายใน crswnp โปรตีนและมีเอกลักษณ์ด้านพยาธิสรีรวิทยาของโรคที่พบนี้ คำสำคัญ :ของเซลล์ A1 , ฮอร์โมนเพศหญิงห้องพัก rhinosinusitis เรื้อรังจำนวน polyposis เนื้อจมูก , พยาธิสรีรวิทยา , โปรติโอมิกส์

บทนำ
เรื้อรัง rhinosinusitis ( CRS ) เป็นโรคเรื้อรังที่พบบ่อยในสหรัฐอเมริกาที่ส่งผลกระทบต่อ to16 % ของประชากรในเมือง แม้ว่าการวิจัยสหสาขาวิชาชีพที่สำคัญได้รับการอุทิศเพื่อการศึกษาโรคพยาธิสรีรวิทยาของ crsis ยังไม่เข้าใจ มันเป็นความคิดที่จะมีหลายสาเหตุ ได้แก่ การติดเชื้อ การอักเสบ กายวิภาค และพันธุกรรมผิดปกติ ความรู้สึกไว ตามความถี่ของโรคนี้เรื้อรัง rhinosinusitis กับช่องจมูก polyps ( crswnp ) เป็นชนิดย่อยที่รุนแรง ลักษณะถาวร โอ - sinophilic การอักเสบของเยื่อบุ withpolyps edematous ,ที่หนาและ sinonasal หลั่ง , POS และการท้าทาย ซึ่งแม้จะมีเมดิแคลและการผ่าตัดการแทรกแซง 2 ก่อนหน้าประกอบดีเอ็นเอ microarray และในการศึกษาพยาธิสรีรวิทยาของการเกิดโรค พบว่า มีจำนวนมากที่อาจเป็นตัวแทนของ dysregulation ปกติเยื่อเมือกภูมิคุ้มกัน กลไกที่ทำเพื่อป้องกัน หรือซ่อมแซมเยื่อบุช่องจมูก ชิโน - -
.- 4 เมื่อเร็วๆ นี้ โปรตีโอมิกส์ได้ถูกใช้เพื่อศึกษาจำนวนมาก เป็นหลัก เพราะจะช่วยให้ระบบการศึกษาคุณสมบัติของโปรตีนทั้งหมดพร้อมกันทั้งปัจจุบันที่ระบุในทางชีววิทยาเงื่อนไขในเวลาที่กำหนด . เทคนิคที่ใช้ในการวิจัยประกอบด้วย 1 ) การแยกโมเลกุลโปรตีนโปรตีนผ่านเจลหรือของเหลวฝอย tography Chroma ,2 ) subjecting แยกโปรตีนให้แมสสเปกโตรเมทรี ( MS ) เพื่อสร้าง characteris - TIC มวลสเปกตรัม และ 3 ) เปรียบเทียบมวลสเป็ค - tra กับสร้างฐานข้อมูลเพื่อระบุโปร - teins ของดอกเบี้ย เทคนิคเหล่านี้ได้ถูกนำมาศึกษาเชิงคุณภาพและเชิงปริมาณของความแตกต่างใน ject และผู้ป่วยจำนวนมาก .
ส่วนใหญ่ของ previ - ระบุ ously โปรตีนเกี่ยวข้องกับโดยธรรมชาติและจากภาควิชาศัลยศาสตร์ ภาควิชาโสตนาสิกลาริงซ์วิทยา ( Upton welham pasic , , ) และแผนกศัลยกรรมระบบประสาท ( กัว ) มหาวิทยาลัยวิสคอนซิน โรงพยาบาล และคลินิก เมดิสัน วิสคอนซิน และภาควิชาสรีรวิทยา คณะแพทยศาสตร์ มหาวิทยาลัยแห่งรัฐแอริโซนาทูซอน , อาริโซน่า ( วอล์คเกอร์ )โดยการสนับสนุนให้ทุนจาก American Academy of otolaryngic โรคภูมิแพ้ ( ถนนทุน ) และมหาวิทยาลัยวิสคอนซิน แผนกศัลยกรรม แผนกหูคอจมูก . ภีษมะตาย ที่นำเสนอในการประชุมของ American Academy of otolaryngic โรคภูมิแพ้ ซานดิเอโก แคลิฟอร์เนีย เมื่อวันที่ 2-42009 และการประชุมของสมาคมของหูคอจมูก , Madison , Wisconsin , 24-25 ตุลาคม ,2009 . ติดต่อ : โทมัสอาร์ pasic , MD , แผนกศัลยกรรม แผนกหูคอจมูก , คลินิกโรงพยาบาลมหาวิทยาลัยวิสคอนซิน และ 600 Highland Ave , Madison , WI 53792 .
เกิดภูมิคุ้มกันและป้องกันเยื่อเมือก . วันที่ตรวจสอบโปรตีนในเยื่อบุ sinonasal ของผู้ป่วย crswnp ได้รับสัญญา
เทคนิคมีศักยภาพที่จะระบุเฉพาะโปรตีนที่แสดงออกในเซลล์เยื่อบุของผู้ป่วย crswnp , ซึ่งในทางกลับอาจจะเพิ่มความเข้าใจของพยาธิสรีรวิทยาของการเกิดโรคและค้นพบเป้าหมายใหม่สำหรับการแทรกแซงการรักษาการวิจัยครั้งนี้มีจุดมุ่งหมายเพื่อศึกษาความแตกต่างในความอุดมสมบูรณ์โปรตีนภายในผู้ป่วยเยื่อบุ sinonasal กับ crswnp เมื่อเทียบกับคนปกติ โดยใช้วิธีการของโปรตีนขาดปราดเปรียว sinonasal การอักเสบ con - ยืนยันใน MRI ก่อนผ่าตัดส่องกล้อง และจมูกก่อนตัวอย่างเนื้อเยื่อ fxclu - เกณฑ์ Sion รวมการสูบบุหรี่อยู่ไม่สามารถให้ความยินยอม การตั้งครรภ์ หรือการให้นม โรค autoimmune มีผลต่อจมูกและโพรงไซนัส ( เช่น เวเกเนอร์เป็น granulomatosis ) และ sinonasal เนื้องอก .

เลือกวัสดุและวิธีการที่ผู้ป่วย การศึกษาครั้งนี้ได้รับการอนุมัติจากคณะกรรมการตรวจสอบสถาบันที่มหาวิทยาลัยวิสคอนซิน โรงพยาบาลและคลินิก ( เมดิสัน wiscon บาป ) และวิชาทั้งหมดให้เซ็นยินยอมให้ .มีการศึกษาทางระบาดวิทยาแสดงให้ determinedifferences มากมายโปรตีนในผู้ป่วย crswnp เมื่อเทียบกับคนปกติ ผู้ป่วย swere คัดมาจากรุ่นพี่ของผู้เขียน ( t.r.p. ) ปฏิบัติไทซ์ . ทั้งหมด 6 ราย ( 3 รายที่ 3 การควบคุม ) เข้าร่วม ในการศึกษาการวินิจฉัยของ crswnpwas ขึ้นอยู่กับชุดของเกณฑ์ทางคลินิกก่อนหน้านี้ เดอ ถูกปรับโดย American Academy of otolaryngolo GY ศัลยกรรมศีรษะและคอบังคับ rhinosinusitistask เรื้อรังและได้รับการยืนยันในช่องจมูก endoscopy .
ผู้ป่วยทั้งหมด underwent ก่อนผ่าตัดมีดอทคอม - puted tomographic สแกนของไซนัสในกระดูกดาวชนะการตั้งค่าเพิ่มเติม ประเมินขอบเขตของ sinona แซล โรค ( ตารางที่ 1 )ก่อนการผ่าตัดไซนัส endoscopie , ผู้ป่วยที่ได้รับ crswnp 1 สัปดาห์ oralprednisone และการรับประทานยาปฏิชีวนะ บุคคลที่เลือก แสดงเป็น การควบคุม ในการศึกษานี้ได้คัดเลือกจากผู้ป่วยที่ได้รับการผ่าตัดของต่อมใต้สมองแกรี สำหรับอาการของ rhinosinusitis และ
ตัวอย่างคอลเลกชันตัวอย่างเนื้อเยื่อของเยื่อบุเยื่อเมือกของ paranasal sinuses ถูกเก็บ ภายใต้การแนะนำของวาง endoscopie ล้างเศษใน 0.9% โซเดียมคลอไรด์ โซลูชั่น แล้วตะครุบเทียว - เซนในไนโตรเจนเหลว เนื้อเยื่อตัวอย่างเก็บที่อุณหภูมิ - 80 องศา C จนถึงการวิเคราะห์ ตัวอย่างเนื้อเยื่อทั้งหมดถ่ายจากทั้ง Ethmoid กระดูกหรือ sinuses ;เนื้อเยื่อจากกลิ่นเรืองภูมิภาคของโพรงจมูกยังไม่เก็บเกี่ยว . ทั้งหมดเนื้อเยื่อถูกส่งใหม่สำหรับการวิเคราะห์จุลินทรีย์ , แบคทีเรียและเชื้อรา และการตรวจสอบ histologie .
สองมิติ เจล electwphoresis . แซม - ples ถูกบดด้วย dounces แก้วใน 1 ml ประกอบด้วยการสลายบัฟเฟอร์แต่ละของการ nucle - ase , การเปลี่ยนแปลง , และ protease inhibitor . ต่อไป500 | อิลโซเดียมโดเดซิลซัลเฟต ( SDS ) เดือด กันชน โดยไม่ß - mercaptoethanol เพิ่มและจำนวนอุ่นในอ่างน้ำเดือดประมาณ 5 นาที อาศัยโปรตีนทั้งหมด โดยใช้แบคทีเรียกรด bicinchoninic ( เพียร์ซ , Rockford , Illinois ) จำนวนแล้วประมาณ 6.0 มก. / มล. ในส่วนเท่ากัน SDS เดือดบัฟเฟอร์และยูเรียแซม - เปิ้ล บัฟเฟอร์ก่อนการโหลดElectro - สองมิติ กุ้งได้ปฏิบัติตามผู้ให้บริการเป็นวิธีการ pholine เคนดริก Labs , Inc ( เมดิสัน ) ดังนี้ Isoelectric สำ ได้ทำการศึกษาในหลอดแก้วของเส้นผ่านศูนย์กลาง 3.0 มม. กับ 2.0 เปอร์เซ็นต์ pH 3.5 - 10 ampholines ( ชาม ชีววิทยา ปิส - cataway . นิวเจอร์ซีย์ ) 20 ชั่วโมงกิโลโวลต์ . หนึ่ง มิ - crogram ของ Isoelectric สำภายในมาตรฐาน โทรโปไมโอซิน
,คือการเพิ่มตัวอย่าง หลังจาก equili bration 10 นาที " บัฟเฟอร์ 10 " ( 10 % glycer - ol 50 mmol / L บัตรแข็ง , 2.3 % SDS และผล mol / L อย่างไรก็ตาม pH 6.8 ) , หลอดเจลถูกปิดไปด้านบนของเจลที่ซ้อนกันเป็นแผ่นเจลอะคริลาไมด์ 10 % ( หนา 1.0 มม. . แผ่นเจล 80 โรง โพธิ์รีซิซท