Despite decades of advancements, th

Despite decades of advancements, the investigation of the red blood cell (RBC) cytosolic proteome still represents a challenging task because of the overwhelming abundance of hemoglobin. Besides, the separation method is one of the main limiting factors when investigating protein complexes. In this study, we performed for the first time a 2D-clear native (CN)-SDS-PAGE followed by mass spectrometry-based identification to screen multiprotein complexes (MCPs) in the cytosol of human RBCs. Upstream to 2D-CN-SDS-PAGE, we applied a recently developed native pre-enrichment strategy that allows discriminating and separately collecting three distinct fractions, one of which is highly enriched for hemoglobin. Such prefractionation strategy is conservative, in that it makes soluble native-complex analyses amenable without loss of biological information. Because of the resolution of native gel electrophoresis techniques, we could observe and describe 55 potential hetero-oligomeric MPCs from the RBC native cytosolic proteome, among which ultratetrameric hemoglobin. The detected protein complexes were characterized by proteins mainly involved in oxygen transport, antioxidant responses, metabolism, and protein degradation cascades, in agreement with recent in silico models. Metabolic enzyme oligomers also interacted with complexes of proteins involved in oxidative stress responses, thus suggesting a functional relationship between metabolic modulation and antioxidant defenses.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

แม้ทศวรรษก้าวหน้า สืบสวน proteome cytosolic เม็ดเลือดแดง (RBC) ยังแสดงถึงงานที่ท้าทายเนื่องจากความครอบงำของฮีโมโกลบิน นอกจาก วิธีแยกเป็นหนึ่งปัจจัยจำกัดหลักเมื่อตรวจสอบโปรตีนคอมเพล็กซ์ ในการศึกษานี้ เราทำครั้งแรกเจ้า 2D ล้าง (CN) - SDS - หน้าตาม ด้วยรหัสจำนวนมาก spectrometry ตามหน้าจอ multiprotein คอมเพล็กซ์ (MCPs) ในไซโตซอลของมนุษย์ RBCs การ Upstream 2D-CN-SDS-หน้า เราใช้กลยุทธ์โดดเด่นก่อนเจ้าสุดที่เหยียดพวกผิว และแยกเก็บเศษสามทั้งหมด ที่สูงพร้อมคุณค่าบำรุงสำหรับฮีโมโกลบิน กลยุทธ์ดังกล่าว prefractionation เป็นหัวเก่า ที่ทำให้ละลายพื้นเมืองเชิงวิเคราะห์ amenable โดยไม่สูญเสียข้อมูลทางชีวภาพ เนื่องจากความละเอียดของเทคนิค electrophoresis เป็นเจล เราสามารถสังเกต และอธิบาย 55 MPCs hetero oligomeric ศักยภาพจาก RBC เจ้า cytosolic proteome ระหว่างฮีโมโกลบินที่ ultratetrameric สิ่งอำนวยความสะดวกตรวจพบโปรตีนมีลักษณะ โดยโปรตีนส่วนใหญ่ที่เกี่ยวข้องในการขนส่งออกซิเจน การตอบสนองของสารต้านอนุมูลอิสระ เผาผลาญ และโปรตีนย่อยสลาย น้ำตก ตกลงกับ silico รุ่นล่าสุด เอนไซม์เผาผลาญ oligomers ยังอาจ มีสิ่งอำนวยความสะดวกของโปรตีนที่เกี่ยวข้องในการตอบสนองความเครียด oxidative ดังนั้น แนะนำความสัมพันธ์ที่ทำงานระหว่างเอ็มเผาผลาญและป้องกันสารต้านอนุมูลอิสระ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

แม้จะมีความก้าวหน้าหลายทศวรรษของการสืบสวนของเซลล์เม็ดเลือดแดง (RBC) cytosolic โปรตีนยังคงแสดงให้เห็นถึงงานที่ท้าทายเพราะความอุดมสมบูรณ์ของเม็ดเลือดแดงครอบงำ นอกจากนี้วิธีการแยกเป็นหนึ่งในปัจจัย จำกัด หลักเมื่อตรวจสอบโปรตีนคอมเพล็กซ์ ในการศึกษานี้เราดำเนินการเป็นครั้งแรกพื้นเมือง 2D ที่ชัดเจน (CN) -SDS-หน​​้าตามด้วยมวลสารที่ใช้ประจำตัวประชาชนไปยังหน้าจอคอมเพล็กซ์ multiprotein (MCPs) ในเซลล์เม็ดเลือดแดงของมนุษย์ ต้นน้ำจนถึง 2D-CN-SDS-PAGE เรานำมาใช้เมื่อเร็ว ๆ นี้ได้รับการพัฒนากลยุทธ์การเพิ่มปริมาณพื้นเมืองที่ช่วยให้การแบ่งแยกและการเก็บรวบรวมสามแยกเศษส่วนที่แตกต่างกันซึ่งหนึ่งในนั้นจะอุดมไปอย่างมากสำหรับฮีโมโกล กลยุทธ์ prefractionation ดังกล่าวเป็นอนุรักษ์นิยมในการที่จะทำให้การวิเคราะห์พื้นเมืองที่ซับซ้อนที่ละลายน้ำได้คล้อยตามโดยไม่สูญเสียข้อมูลทางชีวภาพ เพราะความละเอียดของเทคนิคข่าวคราวพื้นเมืองเราสามารถสังเกตและอธิบาย 55 MPCs แตกต่าง-oligomeric ที่อาจเกิดขึ้นจาก RBC พื้นเมือง cytosolic โปรตีนหมู่ที่ ultratetrameric ฮีโมโกล คอมเพล็กซ์โปรตีนที่ตรวจพบมีลักษณะโปรตีนที่เกี่ยวข้องกับการส่วนใหญ่ในการขนส่งออกซิเจนการตอบสนองของสารต้านอนุมูลอิสระ, การเผาผลาญและการย่อยสลายโปรตีนน้ำตกในข้อตกลงกับที่ผ่านมาในรุ่น silico oligomers เอนไซม์เมตาบอลินอกจากนี้ยังมีความสัมพันธ์กับเชิงซ้อนของโปรตีนที่มีส่วนร่วมในการตอบสนองต่อความเครียดออกซิเดชันจึงบอกความสัมพันธ์ระหว่างการปรับการทำงานเผาผลาญอาหารและการป้องกันสารต้านอนุมูลอิสระ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

แม้จะมีทศวรรษของความก้าวหน้า การสอบสวนของเม็ดเลือดแดง ( RBC ) cytosolic โปรตีนยังเป็นงานที่ท้าทายเพราะความอุดมสมบูรณ์ท่วมท้นของเฮโมโกลบิน นอกจากนี้ การแยก เป็นวิธีหนึ่งในหลักปัจจัย จํากัด เมื่อตรวจสอบสารประกอบเชิงซ้อนของโปรตีน ในการศึกษานี้เราแสดงครั้งแรก 2D ชัดเจนพื้นเมือง ( CN ) - เอนไซม์ตามด้วยมวลสารตามรหัสที่หน้าจอ multiprotein เชิงซ้อน ( mcps ) ในไซโตซอลของมนุษย์ rbcs . ต้นน้ำ 2d-cn-sds-page เราใช้เพิ่งพัฒนาพื้นเมืองก่อนเสริมกลยุทธ์ที่ช่วยให้สามารถจำแนกและแยกเก็บสามส่วนที่แตกต่างกันซึ่งหนึ่งในนั้นคือสูงอุดมด้วย ฮีโมโกลบิน กลยุทธ์ prefractionation เช่นอนุลักษณ์ ที่ทำให้ละลายพื้นเมืองซับซ้อนการวิเคราะห์ซูฮกโดยไม่สูญเสียข้อมูลทางชีวภาพ เพราะความละเอียดของเทคนิคเจลอิเลคพื้นเมือง เราสามารถสังเกตและอธิบาย 55 ที่มีศักยภาพอื่น mpcs โอลิโกจาก RBC cytosolic โปรตีนพื้นเมือง ,ระหว่างที่ฮีโมโกลบิน ultratetrameric . โปรตีนเชิงซ้อนที่พบมีลักษณะโปรตีนที่เกี่ยวข้องกับหลักในการขนส่งออกซิเจน การตอบสนอง เมแทบอลิซึมและการย่อยสลายสารโปรตีนที่ลดหลั่นในข้อตกลงกับล่าสุดในรุ่นซิลิโค . การเผาผลาญของเอนไซม์และสารประกอบเชิงซ้อนของโปรตีนมีปฏิสัมพันธ์กับหน่วยที่เกี่ยวข้องในการตอบสนองความเครียดออกซิเดชันดังนั้นการแนะนำความสัมพันธ์การทำงานระหว่างการสลายและสารต้านอนุมูลอิสระป้องกัน