2.7.2. Preparation of leukocytesThe

2.7.2. Preparation of leukocytes
The leukocytes were isolated from the peripheral blood by the following
method modified from MacArtain et al. (2007). About 0.5 ml of
blood was collected from each fish, diluted with 2 ml of RPMI 1640
(Gibthai) and then was carefully laid onto 3 ml of Histopaque (Sigma)
in a 15 ml tube; the tubes were centrifuged at 400 × g for 30 min at
RT. After centrifugation, the white fluffy coat of leukocytes floated on
the top of the Histopaque. The opaque interfaces were carefully aspirated
with a Pasteur pipette and transferred into a clean 15 ml tube. The
PBS was added in each tube to attain 6 ml and gently mixed by aspiration,
centrifuged at 250 × g for 10 min. This washing step was repeated
three times to remove any residue of Histopaque. The isolated leukocytes
cells were then re-suspended in the PBS and adjusted to the required
cell numbers to study the phagocytosis and respiratory burst
activities.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.7.2 การเตรียมการของหญิงหญิงถูกแยกจากเลือดต่อไปนี้วิธีแก้ไขจาก MacArtain et al. (2007) ประมาณ 0.5 มล.รวบรวมเลือดจากปลาแต่ละ กับ RPMI 1640 2 มล.(Gibthai) แล้ว ถูกอย่างวางบน Histopaque (Sigma) 3 มิลลิลิตรในหลอดขนาด 15 มล. หลอดถูกเหวี่ยงที่ 400 × g 30 นาทีที่RT หลังจากหมุนเหวี่ยง เสื้อหนานุ่มสีขาวของหญิงลอยบนด้านบนของ Histopaque อินเทอร์เฟซที่ทึบแสงได้อย่างระมัดระวังสำลักด้วยปาสเตอร์ปิเปต และถ่ายโอนลงในหลอดที่สะอาด 15 ml การเพิ่มในแต่ละหลอดจะบรรลุ 6 ml และค่อย ๆ ผสมความทะเยอทะยาน PBSเหวี่ยงที่ 250 × g สำหรับ 10 นาที ขั้นตอนการล้างนี้ซ้ำครั้งสามครั้งจะเอาของ Histopaque ใด ๆ หญิงแยกเซลล์แล้วถูกระงับใน PBS ใหม่ และปรับปรุงที่จำเป็นเซลล์ตัวเลขเพื่อศึกษา phagocytosis และหายใจต่อเนื่องกิจกรรม

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.7.2 การเตรียมการของเม็ดเลือดขาว
เม็ดเลือดขาวที่แยกได้จากเลือดโดยทำตาม
วิธีการแก้ไขจาก MacArtain et al, (2007) ประมาณ 0.5 มล. ของ
เลือดที่เก็บได้จากปลาแต่ละเจือจางด้วย 2 มิลลิลิตร RPMI 1640
(Gibthai) และจากนั้นถูกวางอย่างระมัดระวังบน 3 มิลลิลิตร Histopaque (Sigma)
ในหลอด 15 มล; หลอดที่ถูกหมุนเหวี่ยงที่ 400 ×กรัมเป็นเวลา 30 นาทีที่
RT หลังจากหมุนเหวี่ยงเสื้อสีขาวปุยของเม็ดเลือดขาวลอยอยู่
ด้านบนของ Histopaque อินเตอร์เฟซสีขาวขุ่นถูกสำลักอย่างระมัดระวัง
กับปิเปตปาสเตอร์และย้ายลงในหลอด 15 มลสะอาด
พีบีเอสถูกเพิ่มเข้ามาในแต่ละหลอดจะบรรลุ 6 มล. และค่อยๆผสมโดยลัก,
หมุนเหวี่ยงที่ 250 ×กรัมเป็นเวลา 10 นาที ขั้นตอนการซักผ้านี้ซ้ำ
สามครั้งเพื่อลบกากของ Histopaque ใด ๆ เม็ดเลือดขาวที่แยก
เซลล์ถูกแล้วอีกครั้งที่ลอยอยู่ในพีบีเอสและการปรับเพื่อที่จำเป็น
จำนวนเซลล์เพื่อศึกษาเซลล์ทำลายระบบทางเดินหายใจและระเบิด
กิจกรรม

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.7.2 . การเตรียมการของเม็ดเลือดขาวที่แยกได้จากเลือด อุปกรณ์ต่อพ่วงทุกชนิด โดยต่อไปนี้วิธีแก้ไขจาก macartain et al . ( 2007 ) ประมาณ 0.5 มิลลิลิตรเลือดถูกเก็บรวบรวมจากแต่ละปลาเจือจางด้วย RPMI 1640 2 มิลลิลิตร( gibthai ) จากนั้นก็วางอย่างระมัดระวังบน 3 มล. ของ histopaque ( Sigma )ในหลอด 15 ml ; ท่อ คือที่ระดับ 400 × G สำหรับ 30 นาทีที่RT . หลังการปั่นเหวี่ยง เสื้อโค้ทสีขาวนุ่มของเม็ดเลือดขาวลอยบนด้านบนของ histopaque . อินเทอร์เฟซที่ทึบแสง คือ aspirated อย่างระมัดระวังกับปาสเตอร์หลอดและย้ายเข้าไปทำความสะอาดหลอด 15 ml . ที่พีบีเอส ได้เพิ่มในแต่ละหลอดจะบรรลุ 6 ml ค่อยๆผสมโดยแรงบันดาลใจระดับที่ 250 ×กรัมเป็นเวลา 10 นาทีแล้วทำซ้ำขั้นตอนนี้ซักสามครั้งเพื่อลบใด ๆที่เหลืออยู่ histopaque . การแยกเม็ดเลือดขาวเซลล์มีแล้วถูกระงับใน PBS และปรับให้ที่ต้องการเบอร์มือถือเพื่อศึกษา phagocytosis และระบบทางเดินหายใจระเบิดกิจกรรม