2.5. Determination of biofilm inhib

2.5. Determination of biofilm inhibition - inhibition of initial
bacteria cell attachment
The plant extracts at MIC value concentration were evaluated for
their inhibition potential against cell attachments (antiadhesion
test). 100 ml of each plant extract (at MIC value) was added to each
well of a 96-well microplate. An equal volume ciprofloxacin
(0.00125 mg/ml) (MIC value) was added as positive control, while
the negative control was containing 100 ml MHB instead of plant
extract. Finally, 100 ml of bacteria culture (106 CFU/ml) was pipetted
to each well (final volume was 200 ml in each well). 200 ml of MHB
was added in blank wells without bacteria culture. The plates were
wrapped loosely with parafilm and incubated at 37 C for 8 h
without shaking to allow the cells to attach to the surface.
Following incubation, the contents of each well were removed.
Wells were rinsed three times with sterile distilled water to remove
loosely attached cells and non-adherent cells. The plates were airdried
and oven-dried at 60 C for 45 min. This step was validated
by staining the recovered wells with crystal violet (1%). The wells
were stained with 200 ml of 1% crystal violet and incubated at room
temperature for 15 min. The plates were then rinsed three times
with sterile distilled water to remove unabsorbed stain. The wells
were destained by adding 150 ml of ethanol. 100 ml of the destaining
solution was then transferred to a new plate and the absorbance
was measured at OD590 nm using a microplate ELISA reader (Labsystems
Multiskan MS, Finland). Each assay was performed in
triplicate. The mean absorbance of the samples was determined,
the absorbance in blank well was subtracted from absorbance
reading and percentage inhibition and efficiency was determined.
The percentage inhibition was then compared with the positive
control (Sandasi et al. 2010):
Percentage inhibition ¼
ODNegative

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.5. ความมุ่งมั่นของไบโอฟิล์มยับยั้ง - การยับยั้งของเริ่มต้นแบคทีเรียเซลล์แนบสารสกัดที่ความเข้มข้นของค่า MIC ได้ประเมินการยับยั้งที่อาจเกิดขึ้นกับสิ่งที่แนบมาเซลล์ (antiadhesionการทดสอบ) 100 มิลลิลิตรของแต่ละสารสกัดจากพืช (ที่ค่า MIC) ถูกเพิ่มไปยังแต่ละดีของ microplate แบบ 96 หลุม Ciprofloxacin มีปริมาตรเท่ากัน(0.00125 มิลลิกรัม/มิลลิลิตร) (ค่า MIC) ถูกเพิ่มเป็นบวกควบคุม ขณะที่การควบคุมเชิงลบที่ประกอบด้วย 100 มล. MHB แทนโรงงานสารสกัดจาก ในที่สุด ถูก pipetted 100 มล.ของแบคทีเรียวัฒนธรรม (106 CFU/ml)ไปละดี (ปริมาตรสุดท้ายเป็น 200 มิลลิลิตรในแต่ละดี) 200 ml ของ MHBถูกในหลุมว่างเปล่าไม่มีวัฒนธรรมเชื้อแบคทีเรีย มีแผ่นห่อหลวม ๆ กับ parafilm และรับการกกที่ 37 C สำหรับ 8 ชมโดยไม่ต้องสั่นให้เซลล์ที่จะแนบกับพื้นผิวต่อไปนี้การกกไข่ เนื้อหาของแต่ละอย่างถูกเอาออกบ่อถูกล้าง 3 ครั้ง ด้วยน้ำกลั่นปลอดเชื้อเพื่อเอาหลวม ๆ แนบเซลล์และเซลล์ที่ไม่ใช่มติ แผ่น airdriedและเตาอบแห้ง 60 c เป็นเวลา 45 นาที ขั้นตอนนี้ถูกตรวจสอบเปรอะเปื้อนหลุมกู้คืนกับคริสตัลสีม่วง (1%) หลุมย้อม ด้วย 200 ml ของสีม่วงคริสตัล 1% และที่ห้องได้รับการกกอุณหภูมิ 15 นาที แผ่นถูกแล้วล้าง 3 ครั้งด้วยน้ำกลั่นปลอดเชื้อเพื่อแช็คสีย้อม หลุมถูก destained โดยการเพิ่ม 150 มล.ของเอทานอล 100 ml ของการ destainingโซลูชันที่มีโอนแล้วจานใหม่และค่าที่โดยวัดที่ OD590 nm ใช้ microplate ELISA อ่าน (LabsystemsMultiskan MS ฟินแลนด์) ทำการทดสอบแต่ละในตสแควร์ กำหนดค่าเฉลี่ยของตัวอย่างค่าในดีเปล่าถูกหักออกจากค่าพิจารณาประสิทธิภาพและอ่านและเปอร์เซ็นต์การยับยั้งเปอร์เซ็นต์การยับยั้งแล้วการเปรียบเทียบในแง่บวกการควบคุม (Sandasi et al. 2010):เปอร์เซ็นต์การยับยั้ง¼ODNegative

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.5 ความมุ่งมั่นของการยับยั้งไบโอฟิล์ม - ยับยั้งการเริ่มต้น
สิ่งที่แนบมาของเซลล์แบคทีเรีย
สารสกัดจากพืชที่มีความเข้มข้นค่า MIC ได้รับการประเมินสำหรับ
ศักยภาพของพวกเขากับการยับยั้งเซลล์สิ่งที่แนบมา (antiadhesion
Test) 100 มล. ของแต่ละสารสกัดจากพืช (มูลค่าที่ MIC) ถูกเพิ่มเข้าไปในแต่ละ
ดีของ microplate 96 หลุม ปริมาณ ciprofloxacin เท่ากับ
(0.00125 mg / ml) (ค่า MIC) ถูกเพิ่มเข้ามาเป็นตัวควบคุมในเชิงบวกในขณะที่
การควบคุมเชิงลบที่มีขนาด 100 มล MHB แทนของพืช
สารสกัดจาก สุดท้าย 100 มล. ของวัฒนธรรมแบคทีเรีย (106 CFU / ml) ได้รับการปิเปต
จะดีแต่ละ (ปริมาตรสุดท้ายคือ 200 มล. ในแต่ละกัน) 200 มิลลิลิตร MHB
ถูกเพิ่มเข้ามาในหลุมที่ว่างเปล่าโดยไม่ต้องเพาะเชื้อจุลินทรีย์ แผ่นถูก
ห่ออย่างอิสระกับ parafilm และบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 8 ชั่วโมง
โดยไม่ต้องเขย่าเพื่อช่วยให้เซลล์ที่จะแนบไปกับพื้นผิว.
หลังจากบ่มเนื้อหาของแต่ละดีถูกถอดออก. the
เวลส์ถูกล้างสามครั้งด้วยน้ำกลั่นปลอดเชื้อเพื่อลบ
เซลล์ที่แนบมาหลวมและเซลล์ที่ไม่ใช่พรรคพวก แผ่นถูก airdried
และเตาอบแห้งที่อุณหภูมิ 60 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 45 นาที ขั้นตอนนี้จะถูกตรวจสอบ
โดยการย้อมสีหลุมกู้คืนได้ด้วยคริสตัลสีม่วง (1%) หลุม
ถูกย้อมด้วยสี 200 มล. ม่วงคริสตัล 1% และบ่มที่ห้อง
อุณหภูมินาน 15 นาที แผ่นถูกล้างแล้วสามครั้ง
ด้วยน้ำกลั่นปลอดเชื้อเพื่อลบคราบ unabsorbed หลุม
ถูก destained โดยการเพิ่ม 150 มล. เอทานอล 100 มิลลิลิตร destaining
วิธีการแก้ปัญหานั้นก็ย้ายไปเป็นแผ่นใหม่และดูดกลืนแสง
วัดที่ OD590 นาโนเมตรโดยใช้วิธี ELISA microplate อ่าน (Labsystems
Multiskan MS, ฟินแลนด์) แต่ละการทดสอบได้รับการดำเนินการใน
เพิ่มขึ้นสามเท่า หมายถึงการดูดกลืนแสงของกลุ่มตัวอย่างมีการพิจารณา
การดูดกลืนแสงในดีว่างเปล่าที่ถูกหักออกจากการดูดกลืนแสง
การอ่านและการยับยั้งเปอร์เซ็นต์และมีประสิทธิภาพถูกกำหนด.
การยับยั้งเปอร์เซ็นต์แล้วเมื่อเทียบกับบวก
ควบคุม (Sandasi et al, 2010.)
ร้อยละยับยั้ง¼
ODNegative

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.5 การหาปริมาณสารยับยั้งการเริ่มต้น - ฟิล์มแบคทีเรียเซลล์แนบสารสกัดจากพืช ที่ความเข้มข้นของค่า MIC จำนวนสำหรับของตนที่อาจเกิดขึ้นกับสิ่งที่แนบมา ( antiadhesion เซลล์ ยับยั้งทดสอบ ) 100 มิลลิลิตรของแต่ละสารสกัดจากพืช ( ที่ค่า MIC ) ที่ถูกเพิ่มเข้าไปในแต่ละดีของ 96 ดีพื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทย . ซิโปรฟลอกซาซินมีขนาดเท่ากัน( 0.00125 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร ( ค่า MIC ) ถูกเพิ่มเป็นตัวควบคุมบวก ในขณะที่การควบคุมเป็นบรรจุ 100 ml mhb แทนของพืชสารสกัด ในที่สุด , 100 มิลลิลิตรของแบคทีเรีย ( 106 cfu / ml ) คือ pipettedกัน ( เล่มสุดท้ายคือ 200 มล. ในแต่ละคนด้วย ) mhb 200 มิลลิลิตรเพิ่มในหลุมที่ว่างเปล่าไร้วัฒนธรรมแบคทีเรีย แผ่นคือห่ออย่างอิสระกับพาราฟิล์มบ่มที่ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 8 ชั่วโมงโดยเขย่าเพื่อให้เซลล์ที่แนบกับพื้นผิวต่อไปนี้ตามลำดับ เนื้อหาของแต่ละคนก็ถูกถอดออกเวลส์ถูกล้างสามครั้งด้วยน้ำกลั่นเพื่อลบเป็นหมันหลวมและไม่ติดต่อเซลล์และเซลล์ แผ่นเป็น airdriedเตาอบและอบแห้งที่อุณหภูมิ 60 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 45 นาที ขั้นตอนนี้ตรวจสอบโดยวิธีการกู้คืนข้อมูลคริสตัลสีม่วง ( 1% ) เวลส์ถูกย้อมด้วยสี 200 ml 1 % คริสตัลสีม่วงและบ่มที่อุณหภูมิห้องอุณหภูมิเป็นเวลา 15 นาที แล้วล้างออก ครั้งที่สามแผ่นกับงานกลั่นเอา unabsorbed คราบ . เวลส์โดยการเพิ่มจำนวน destained 150 มิลลิลิตรเอทานอล ของ destaining 100 มล.วิธีแก้ปัญหาคือค่อยโอนไปจานใหม่และการดูดกลืนแสงเป็นวัดที่ od590 นาโนเมตรโดยใช้เครื่องอ่านอีไล ( labsystems พื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทยmultiskan MS , ฟินแลนด์ แสดงในแต่ละการทดสอบทำสำเนาสามฉบับ . คือค่าของจำนวนที่กำหนดนอย่างดีถูกหักออกจากค่าในช่องว่างอ่านค่าประสิทธิภาพการยับยั้งและมุ่งมั่นเปอร์เซ็นต์การ ยับยั้งแล้วเทียบกับบวกการควบคุม ( sandasi et al . 2010 ) :¼เปอร์เซ็นต์การยับยั้งodnegative