MATERIALS AND METHODSStudy area and

MATERIALS AND METHODS
Study area and design
The study was conducted on the campus of Taif University where
mobile phones were randomly sampled from participants between
March, 2011 and April, 2012.
Sampling
A total of 101 mobile phones were randomly sampled from participants
both in the halls as well as in the faculties, aseptically
swabbing the entire phone using dry sterile cotton. Samples were
collected from five populations: 37 faculty members, 30 personnel,
21 students, nine physicians and four nurses at the university clinic.
Mobile phones which were used for at least two months were
sampled in a standardized aseptic fashion with sterile cotton-tipped
applicators in sterile caped plastic tube, CITOSWAB (Citotest
labware manufacturing Company Limited, China). Tubes were
supplied with 3 ml of LB broth Miller media and incubated overnight
at 35°C. At the time of the study, no active investigation was being
performed for a nosocomial pathogen. Samples from the mobile
phones of all participants from the campus were collected randomly
during routine daily work, and each was asked regarding hygiene
practices that is, if he/she ever cleaned his mobile phone or washed
his hand after toilet. A sterile cotton swab was rolled over all
exposed outer surfaces of the cell phones which were used for at
least two months. Care was taken to make sure that the keypad
and all buttons were swabbed, since these areas are most
frequently in contact with the tips of fingers. Mobile phones were
decontaminated with 70% isopropylalchohol and then sampled
swabs after decontamination were streaked over sheep blood agar,
mannitol salt agar, eosin methylene blue agar (EMB), Streptococccus
selective agar media and MacConkey agar plates, for
characterization of aerobic bacteria; no anaerobic/fungal cultures
were taken. Plates were incubated aerobically at 37°C, for 48 h.
Laboratory analysis
Laboratory analyses were undertaken in the laboratories of
Biotechnology and Genetic Engineering Research Center (BGERC)
of the Taif University, Taif, KSA.
Inoculation
The cotton swab was soaked in 5 ml LB broth and incubated
aerobically over-night at 37°C.15898 Afr. J. Biotechnol.
Enumeration of bacteria
Serial dilutions from the resulting growth from the nutrient broth
medium were pour-plated on count agar (PCA) and incubated for
24 h at 37°C under aerobic condition. The number of estimated
Colony forming units (CFU) for each sample was then counted.
Samples were inoculated in mannitol salt agar (MSA), sheep blood
agar (BA), and plate count agar (PCA) media for counting total
bacteria and on Sabouraud dextrose agar medium for counting
fungi. Duplicate plates for each media were made for each dilution.
All pure isolated colonies were sub-cultured onto sheep blood agar
plates (for growth of heterotrophic bacteria) and MacConkey agar
plates (for coliforms) for 24 h at 37°C for colony isolation and
morphological identification (Koch, 1984).
Isolation of organisms
Colonies showing a good growth and characters on plates were
picked and streaked on new MSA, BA, and nutrient agar plates. A
rapidly growing, visually distinct colony and a separate, morphologically
unique isolates were selected for further analysis and
purified by repeated plating. A slide coagulase test differentiated
staphylococcal isolates into S. aureus and coagulase-negative
staphylococci (CoNS) were performed (Koch, 1984).
Identification of organisms
Pure isolated colonies were gram differentiated and then biochemical
identification done, using indole, catalase, citrate, oxidase,
coagulase, and urease test first, and then API test was performed.
A slide coagulase test differentiated staphylococcal isolates into S.
aureus and coagulase-negative staphylococci (CoNS) were performed.
Isolates were purified, identified and named based on the
morphological, physiological and the biochemical characteristics
presented in Bergey's Manual of Determinative Bacteriology (Holt et
al., 1994) and the APi Kit profiles (bioMerieux, France, 2009).
RAPD-PCR and 16S-rRNA sequencing techniques were adopted to
characterize and identify the selected isolates at molecular level.
Molecular genetics analysis
DNA extraction
The cell pellets from all bacterial isolates were used to extract
genomic DNA using (Jena Bioscience, Germany) extraction kit
following the manufacturer's instructions.
Random amplified polymorphic DNA (RAPD)
Nine different primers were used in PCR reaction which consisted
of 10 Pmol of each different arbitrary 10-mer primers and 25 to 50
ng of genomic DNA and 12.5 μl of 2× SuperHot PCR Master Mix
(Bioron, Ludwigshafen, Germany). The names and sequences of
these oligoprimers are listed in Table 2. The RAPD-PCR amplification
reactions were performed in Eppendorf® thermal cycler using
the following PCR program: 1cycle at 94°C, 4 min; 35 additional
cycles consisting of 94°C for 5 s, 37°C for 20 s and 72°C for 20 s.
After the amplification, the PCR reaction products were electrophoresed
with 100 bp ladder marker (Fermentas, Germany) on 10 × 14
cm 1.5%-agarose gel (Bioshop; Canada) for 30 min, using Trisborate-EDTA
buffer. The gel was stained with 0.5 μg/ml of ethidium
bromide (Bioshop; Canada).
PCR amplification of 16S-rRNA gene
Primer sequences used to amplify the 16S-rRNA gene fragment
were: U1 [5CCA GCA GCC GCG GTA ATA CG3] and U2 [5ATC
GG(C/T) TAC CTT GTT ACG ACT TC3] according to Kumar et al.
(2006). The PCR master mix contained 10 Pmol of each primer and
12.5 μl of 2× SuperHot PCR Master Mix (Bioron, Ludwigshafen,
Germany) mixed with 50 to 100 ng of DNA template. Sterile d.H2O
was added to a final volume of 25 µl. Thermal cycler (Uno II ,
Biometra, Germany) program was 94°C for 4 min, 94°C for 1 min,
55°C for 1 min, 72°C for 1.5 min, the number of cycles was 35 cycle
and the post PCR reaction time was 72°C for 5 min.
Analysis of the PCR products
After the amplification, the PCR reaction products were electrophoresed
with 100 bp ladder marker (Fermentas, Germany) on 10 ×
14 cm 1.5% agarose gel (Bioshop; Canada) for 30 min using Trisborate-EDTA
buffer. The gels were stained with 0.5 µg/ml of ethidium
bromide (Bioshop; Canada), visualized under the UV light and
documented using a GeneSnap 4.00-Gene Genius Bio Imaging
System (Syngene; Frederick, Maryland, USA).
Gels analysis
The SDS polyacrylamide gels and agarose digital image files were
analyzed using Gene Tools software from Syngene. The densitometric
scanning of each, based on its three characteristic dimensions,
was carried out. Each band was recognized by its length,
width and intensity. Accordingly, the relative amount of each band
was measured and scored.
Sequencing of 16S-rRNA gene
The 990 bp PCR-products of each isolate were purified from excess
primers and nucleotides by the use of AxyPrep PCR Clean-up kit
(AXYGEN Biosciences, Union City, California, USA) and directly
sequenced using the same primers as described for the amplification
process. The products were sequenced using the Big Dye
Terminator Cycle Sequencing Ready Reaction Kit (ABI Applied
Biosystems, Foster City, California, USA) on a 3130XL Genetic
Analyzer (Applied Biosystems). The bacterial 16S-rDNA sequences
obtained were then aligned with known 16S-rDNA sequences in
Genbank using the basic local alignment search tool (BLAST) at the
National Center for Biotechnology Information, and percent homology
scores were generated to identify bacteria.
Determination of Genetic relationship
In order to determination the genetic relationship among studied
bacteria, sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis
(SDS-PAGE) and random amplified polymorphic DNA (RAPD) data
were scored for presence (1) or absence (0) of the bands. The data
were transferred to a statistical software program, Statistical Package
for Social Science, version 10.00 (SPSS Inc, Chicago, Illinois,
USA) to obtain analytical statistics in the form of Jaccard’s similarity
coefficient (S), showing the genetic similarity among different
examined bacterial isolates based on pair-wise comparison. The
dendrogram was constructed using the Average linkage between
groups

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วัสดุและวิธีการพื้นที่การศึกษาและออกแบบการวิจัยในมหาวิทยาลัยมหาวิทยาลัย Taif ที่โทรศัพท์มือถือได้สุ่มตัวอย่างจากผู้เรียนระหว่างมีนาคม 2554 และเดือนเมษายน 2012สุ่มตัวอย่างจำนวน 101 โทรศัพท์มือถือได้สุ่มตัวอย่างจากผู้เข้าร่วมทั้งในห้องโถงเช่นในคณะ asepticallyswabbing โทรศัพท์ทั้งที่ใช้ผ้ากอซแห้ง ตัวอย่างดีรวบรวมจากประชากร 5: 37 คณาจารย์ บุคลากร 30นักเรียน 21, 9 แพทย์ และพยาบาล 4 คลินิกมหาวิทยาลัยโทรศัพท์มือถือที่ใช้อย่างน้อยสองเดือนตัวอย่างในมาตรฐานเข้มข้นกับกอซฝ้ายก้นเจในกอซ caped พลาสติกหลอด CITOSWAB (Citotestlabware ผลิต จำกัด จีน) หลอดได้ให้มาพร้อมกับ 3 ml ของปอนด์ซุปสื่อมิลเลอร์ และ incubated ค้างคืนที่ 35 องศาเซลเซียส ในขณะการศึกษา ตรวจสอบงานไม่อยู่ดำเนินการศึกษา nosocomial ตัวอย่างจากมือถือโทรศัพท์ของผู้เรียนทั้งหมดจากวิทยาเขตถูกเก็บรวบรวมได้ในระหว่างประจำทำงานประจำวัน และแต่ละถูกถามเกี่ยวกับสุขอนามัยปฏิบัติคือ ถ้าเขาเคยทำความสะอาดโทรศัพท์มือถือของเขา หรือล้างพระหัตถ์หลังห้องน้ำ สำลีกอซที่สะสมทั้งหมดสัมผัสพื้นผิวภายนอกของโทรศัพท์ที่ใช้สำหรับการที่อย่างน้อยสองเดือน ดูแลได้ดำเนินการเพื่อให้แน่ใจว่าแป้นพิมพ์และปุ่มทั้งหมดถูก swabbed เนื่องจากพื้นที่เหล่านี้เป็นส่วนใหญ่บ่อย ๆ กับเคล็ดลับของนิ้วมือ โทรศัพท์มือถือdecontaminated กับ isopropylalchohol 70% และตัวอย่างแล้วswabs หลัง decontamination มีลายมากกว่าแกะเลือด agarmannitol เกลือ agar, eosin บลูเมทิลีนได agar (EMB), Streptococccusagar เลือกสื่อและ MacConkey agar แผ่น สำหรับคุณสมบัติของแบคทีเรียแอโรบิก วัฒนธรรมไม่รวมชนิดไร้อากาศ/เชื้อราได้นำ แผ่นมี incubated aerobically ที่° C 37 สำหรับ 48 hห้องปฏิบัติการวิเคราะห์ห้องปฏิบัติการวิเคราะห์ได้ดำเนินการในห้องทดลองของเทคโนโลยีชีวภาพและพันธุวิศวกรรมวิจัยศูนย์ (BGERC)ของมหาวิทยาลัย Taif, Taif, KSAInoculationสำลีเปี่ยมล้นไปด้วยในซุปป. 5 ml และ incubatedaerobically เกินคืนที่ 37°C.15898 Afr. J. BiotechnolการแจงนับของแบคทีเรียDilutions ประจำจากการเจริญเติบโตได้จากซุปธาตุอาหารกลางถูกชุบหลั่งใน agar จำนวน (PCA) และ incubated สำหรับเออที่ 37° C ภายใต้สภาพแอโรบิก จำนวนประมาณจากนั้นมีนับเป็นหน่วย (CFU) สำหรับตัวอย่างแต่ละโคโลนีตัวอย่างที่ inoculated ใน mannitol เกลือ agar (MSA), เลือดแกะagar (BA), และแผ่นสื่อ agar (PCA) จำนวนนับรวมแบคทีเรียและ ใน Sabouraud ขึ้น agar กลางสำหรับการตรวจนับเชื้อรา แผ่นซ้ำสำหรับแต่ละสื่อได้ทำสำหรับแต่ละการเจือจางอาณานิคมแยกบริสุทธิ์ทั้งหมดถูกย่อยอ่างไปแกะเลือด agarแผ่น (สำหรับการเจริญเติบโตของแบคทีเรีย heterotrophic) และ MacConkey agarแผ่น (การกำจัด) 24 ชมที่ 37° C สำหรับแยกโคโลนี และของรหัส (คอ 1984)แยกของชีวิตอาณานิคมที่แสดงการเจริญเติบโตดีและอักขระบนแผ่นได้เบิก และลายใน MSA ใหม่ BA และแผ่น agar ธาตุอาหาร Aอย่างรวดเร็วเติบโต โคโลนี่เห็นความแตกต่างและแยกต่างหาก morphologicallyแยกเฉพาะถูกเลือกสำหรับการวิเคราะห์เพิ่มเติม และบริสุทธิ์ โดยชุบซ้ำ การทดสอบ coagulase ภาพนิ่งที่แตกต่างกันแยก staphylococcal S. หมอเทศข้างลายและ coagulase เป็นค่าลบstaphylococci (CoNS) ดำเนิน (คอ 1984)รหัสของสิ่งมีชีวิตอาณานิคมแยกบริสุทธิ์ได้กรัมสังเกต และชีวเคมีแล้วรหัสทำ ใช้อินโดล catalase ซิเตรต oxidasecoagulase และยูทดสอบครั้งแรก และจากนั้น ทำการทดสอบ APIการทดสอบ coagulase ภาพนิ่งทั่ว staphylococcal แยกเป็น s ได้หมอเทศข้างลายและ coagulase ลบ staphylococci (CoNS) ดำเนินการแยกได้บริสุทธิ์ ระบุ และตั้งชื่อตามสัณฐาน สรีรวิทยา และชีวเคมีลักษณะแสดงของ Bergey คู่มือของ Determinative Bacteriology (Holt ร้อยเอ็ดal., 1994) และประวัติชุด APi (bioMerieux ฝรั่งเศส 2009)อาร์เอพีดี-PCR และเทคนิคลำดับ 16S rRNA ถูกนำมาใช้เพื่อลักษณะ และระบุเลือกแยกในระดับโมเลกุลอณูพันธุศาสตร์วิเคราะห์สกัดดีเอ็นเอใช้เพื่อดึงขี้เซลล์จากทั้งแบคทีเรียที่แยกได้genomic DNA ใช้ชุดสกัด (Jena ซื้อ เยอรมนี)ตามคำแนะนำของผู้ผลิตสุ่มเอาต์ polymorphic ดีเอ็นเอ (อาร์เอพีดี)ไพรเมอร์ต่าง ๆ เก้าใช้ในปฏิกิริยา PCR ซึ่งประกอบด้วยของ 10 Pmol ไพรเมอร์แต่ละกำหนดต่าง ๆ แมร์ 10 และ 25 50ng ของ genomic DNA และ μl 12.5 ของ 2 ×ผสม PCR หลัก SuperHot(Bioron, Ludwigshafen เยอรมนี) ชื่อและลำดับของoligoprimers เหล่านี้จะแสดงในตารางที่ 2 ขยาย PCR อาร์เอพีดีปฏิกิริยาดำเนินใน Eppendorf ® cycler ร้อนใช้โปรแกรม PCR ต่อไปนี้: ที่ 94° C, 4 นาที 1cycle 35 เพิ่มเติมวงจรประกอบด้วย 94° C สำหรับ 5 s, 37° C สำหรับ 20 s และ 72° C สำหรับ 20 sหลังจากขยาย ผลิตภัณฑ์ปฏิกิริยา PCR ได้ electrophoresedมี 100 bp บันไดเครื่องหมาย (Fermentas เยอรมนี) ใน 10 × 14เจ 1.5%-agarose ซม. (Bioshop แคนาดา) สำหรับ 30 นาที ใช้ Trisborate EDTAบัฟเฟอร์ เจมีสี ด้วย μg 0.5 ml ของ ethidiumโบรไมด์ (Bioshop แคนาดา)ขยาย PCR ของยีน 16S rRNAลำดับรองพื้นใช้ขยายส่วนยีน 16S rRNAถูก: U1 [5CCA GCA GCC GCG GTA ATA CG3] และ U2 [5ATCGG(C/T) มาตรวัด CTT GTT จีบบัญญัติ TC3] ตาม Kumar et al(2006) . PCR หลักผสมอยู่ 10 Pmol พื้นแต่ละ และΜl 12.5 ของการ 2 การผสมผสานหลัก SuperHot PCR (Bioron, Ludwigshafenเยอรมนี) ผสมกับ 50-100 ng ของดีเอ็นเอแม่แบบ ใส่ d.H2Oมีเพิ่มปริมาตรสุดท้ายของ 25 µl. ร้อน cycler (Uno IIBiometra เยอรมนี) โปรแกรม 94 ° C สำหรับ 4 นาที 94 ° C สำหรับ 1 นาที55° C สำหรับ 1 นาที 72° C สำหรับ 1.5 นาที จำนวนรอบรอบ 35และเวลาปฏิกิริยา PCR ลงเป็น 72° C สำหรับ 5 นาทีวิเคราะห์ผลิตภัณฑ์ PCRหลังจากขยาย ผลิตภัณฑ์ปฏิกิริยา PCR ได้ electrophoresedมี 100 bp บันไดเครื่องหมาย (Fermentas เยอรมนี) บน 10 ×14 ซม. 1.5% agarose เจล (Bioshop แคนาดา) สำหรับใช้ Trisborate EDTA 30 นาทีบัฟเฟอร์ เจมีสีกับไมโครกรัมเป็นเครื่อง 0.5 ml ของ ethidiumโบรไมด์ (Bioshop แคนาดา), visualized ภายใต้แสง UV และจัดทำเอกสารโดยใช้การ GeneSnap 4.00-ยีนอัจฉริยะไบโอภาพระบบ (Syngene เฟรเดอริก แมริแลนด์ สหรัฐอเมริกา)วิเคราะห์เจSDS polyacrylamide gels และไฟล์ภาพดิจิตอล agaroseวิเคราะห์โดยใช้ยีนเครื่องมือซอฟต์แวร์จาก Syngene ที่ densitometricการสแกนแต่ละ ตามขนาดลักษณะสามทำออกมา แต่ละวงถูกรับรู้ โดยความยาวความกว้างและความเข้ม ตาม จำนวนสัมพัทธ์ของแต่ละวงวัด และทำประตูลำดับเบสของยีน 16S rRNA990 bp ผลิตภัณฑ์ PCR ของแต่ละแยกมีบริสุทธิ์จากเกินไพรเมอร์และนิวคลีโอไทด์ โดยใช้ AxyPrep PCR ล้างชุด(เวลาออก AXYGEN ยูเนี่ยนซิตี้ แคลิฟอร์เนีย สหรัฐอเมริกา) และโดยตรงเรียงลำดับโดยใช้ไพรเมอร์เดียวกันตามที่อธิบายไว้ในการขยายกระบวนการ ผลิตภัณฑ์ถูกเรียงลำดับโดยใช้สีย้อมใหญ่เทอร์มิเนเตอร์วงจรลำดับเบสปฏิกิริยาพร้อมชุด (ABI ใช้Biosystems ฟอสเตอร์ซิตี้ แคลิฟอร์เนีย สหรัฐอเมริกา) ในการ 3130XL ทางพันธุกรรมวิเคราะห์ (Biosystems ใช้) ลำดับ 16S rDNA เชื้อแบคทีเรียรับได้แล้วสอดคล้องกับลำดับ 16S rDNA รู้จักในใช้เครื่องมือค้นหาการจัดตำแหน่งภายในพื้นฐาน (ระเบิด) ที่ Genbankแห่งชาติศูนย์ข้อมูลเทคโนโลยีชีวภาพ homology เปอร์เซ็นต์คะแนนเพื่อระบุเชื้อแบคทีเรียสร้างขึ้นกำหนดความสัมพันธ์ทางพันธุกรรมในการกำหนด ความสัมพันธ์ทางพันธุกรรมระหว่างศึกษาแบคทีเรีย ซัลเฟตโซเดียม dodecyl เจ polyacrylamide electrophoresis(SDS-หน้า) และสุ่มเอาต์ polymorphic ดีเอ็นเอ (อาร์เอพีดี) ข้อมูลได้คะแนนสำหรับ (1) หรือ (0) ของวงดนตรี ข้อมูลมีการถ่ายโอนโปรแกรมซอฟต์แวร์ทางสถิติ แพคเกจทางสถิติสำหรับสังคมศาสตร์ รุ่น 10.00 (โปรแกรม Inc ชิคาโก รัฐอิลลินอยส์สหรัฐอเมริกา) รับวิเคราะห์สถิติในรูปแบบของความคล้ายคลึงกันของ Jaccardสัมประสิทธิ์ (S), แสดงความคล้ายคลึงกันทางพันธุกรรมนี่แตกต่างกันตรวจสอบแบคทีเรียที่แยกได้จากการเปรียบเทียบ pair-wise ที่dendrogram ถูกสร้างขึ้นโดยใช้การเชื่อมโยงระหว่างค่าเฉลี่ยกลุ่ม

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วัสดุและวิธีการ
พื้นที่การศึกษาและการออกแบบ
การศึกษาได้ดำเนินการในวิทยาเขตของมหาวิทยาลัย Taif ที่
โทรศัพท์มือถือสุ่มจากผู้เข้าร่วมระหว่าง
เดือนมีนาคม 2011 และเดือนเมษายน 2012.
เก็บตัวอย่าง
ทั้งหมด 101 โทรศัพท์มือถือสุ่มจากผู้เข้าร่วม
ทั้งในห้องโถง เช่นเดียวกับในคณะที่ปลอดเชื้อ
เช็ดโทรศัพท์ทั้งหมดโดยใช้ผ้าฝ้ายหมันแห้ง ตัวอย่าง
ที่เก็บรวบรวมจากห้าประชากร: 37 อาจารย์ 30 บุคลากร
21 นักเรียนเก้าแพทย์และสี่พยาบาลที่คลินิกของมหาวิทยาลัย.
โทรศัพท์มือถือที่ใช้เวลาอย่างน้อยสองเดือนที่ได้รับการ
เก็บตัวอย่างในแบบปลอดเชื้อที่ได้มาตรฐานด้วยผ้าฝ้ายปลายหมัน
applicators ในหลอดพลาสติกคลุมหมัน CITOSWAB (Citotest
Labware ผลิต จำกัด , จีน) ท่อถูก
ที่มาพร้อมกับ 3 มิลลิลิตรของน้ำซุป LB สื่อมิลเลอร์และบ่มค้างคืน
ที่ 35 องศาเซลเซียส ในช่วงเวลาของการศึกษา, การตรวจสอบการใช้งานไม่ถูก
ดำเนินการสำหรับการติดเชื้อในโรงพยาบาล ตัวอย่างจากมือถือ
โทรศัพท์ของผู้เข้าร่วมจากมหาวิทยาลัยสุ่มเก็บ
ในระหว่างการทำงานในชีวิตประจำวันและในแต่ละถูกถามเกี่ยวกับสุขอนามัย
การปฏิบัตินั่นคือถ้าเขา / เธอเคยทำความสะอาดโทรศัพท์มือถือของเขาหรือล้าง
มือของเขาหลังจากที่ห้องน้ำ สำลีหมันถูกรีดไปทั่ว
พื้นผิวด้านนอกสัมผัสของโทรศัพท์มือถือที่ถูกนำมาใช้เป็นเวลา
อย่างน้อยสองเดือน การดูแลถูกนำตัวไปตรวจสอบให้แน่ใจว่าปุ่มกด
และปุ่มทั้งหมดถูก swabbed เนื่องจากพื้นที่เหล่านี้เป็นส่วนใหญ่
ที่พบบ่อยในการติดต่อกับเคล็ดลับของนิ้วมือ โทรศัพท์มือถือถูก
decontaminated กับ isopropylalchohol 70% และเก็บตัวอย่างแล้ว
Swabs หลังจากที่ปนเปื้อนที่ถูกกว่าแกะลายวุ้นเลือด
วุ้นเกลือแมนนิทอล, eosin เมทิลีนสีฟ้าวุ้น (EMB) Streptococccus
สื่อวุ้นเลือกและ MacConkey แผ่นวุ้นสำหรับ
ลักษณะของแบคทีเรียแอโรบิก; แบบไม่ใช้ออกซิเจนไม่มี / วัฒนธรรมเชื้อรา
ถูกนำ แผ่นถูกบ่มออกซิเจนที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 48 ชั่วโมง.
การวิเคราะห์ทางห้องปฏิบัติการ
การวิเคราะห์ทางห้องปฏิบัติการได้รับการดำเนินการในห้องปฏิบัติการของ
เทคโนโลยีชีวภาพและพันธุวิศวกรรมศูนย์วิจัย (BGERC)
ของ Taif มหาวิทยาลัย Taif, KSA.
ฉีดวัคซีน
สำลีถูกแช่ใน 5 ml น้ำซุป LB และบ่ม
ออกซิเจนคืนกว่าที่ 37 ° C.15898 Afr เจ Biotechnol.
แจงนับของแบคทีเรีย
เจือจางอนุกรมจากการเติบโตเป็นผลมาจากน้ำซุปสารอาหาร
ขนาดกลางถูกเทชุบบนวุ้นนับ (PCA) และบ่มเป็นเวลา
24 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 ° C ภายใต้เงื่อนไขแอโรบิก จำนวนประมาณ
อาณานิคมอดีตหน่วย (CFU) สำหรับแต่ละตัวอย่างนับแล้ว.
ตัวอย่างถูกเชื้อในอาหารเลี้ยงเชื้อเกลือแมนนิทอล (MSA) เลือดแกะ
วุ้น (BA) และแผ่นวุ้นนับ (PCA) สื่อสำหรับการนับรวม
แบคทีเรียและ Sabouraud กลางวุ้นเดกซ์โทรสสำหรับการนับ
เชื้อรา แผ่นที่ซ้ำกันสำหรับสื่อแต่ละถูกสร้างขึ้นมาสำหรับแต่ละเจือจาง.
ทั้งหมดอาณานิคมแยกบริสุทธิ์ถูกย่อยที่เพาะเลี้ยงบนอาหารเลี้ยงเชื้อในเลือดแกะ
แผ่น (สำหรับการเจริญเติบโตของแบคทีเรีย) และ MacConkey agar
แผ่น (สำหรับโคลิฟอร์ม) เป็นเวลา 24 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลาแยกอาณานิคมและ
บัตรประจำตัวก้าน (โคช์ส 1984).
การแยกของสิ่งมีชีวิต
อาณานิคมแสดงการเติบโตที่ดีและตัวอักษรบนแผ่นถูก
เลือกและลายบนใหม่ MSA, BA และจานอาหารเลี้ยงเชื้อ
เติบโตอย่างรวดเร็วอาณานิคมที่แตกต่างสายตาและแยกสัณฐาน
เชื้อที่ไม่ซ้ำกันได้รับเลือกสำหรับการวิเคราะห์ต่อไปและ
บริสุทธิ์โดยการชุบซ้ำแล้วซ้ำอีก ทดสอบสไลด์ coagulase แตกต่าง
staphylococcal แยกเป็นเชื้อ S. aureus และ coagulase ลบ
เชื้อ (ข้อเสีย) ได้ดำเนินการ (โคช์ส 1984).
บัตรประจำตัวของสิ่งมีชีวิต
อาณานิคมแยกบริสุทธิ์แกรมที่แตกต่างและชีวเคมีแล้ว
ทำบัตรประจำตัวโดยใช้อินโด, catalase, ซิเตรต, oxidase ,
coagulase และทดสอบ urease แรกและจากนั้นการทดสอบ API ได้ดำเนินการ.
แยกความแตกต่าง staphylococcal ทดสอบสไลด์ coagulase เป็น S.
aureus และ coagulase ลบเชื้อ (ข้อเสีย) ได้ดำเนินการ.
ที่แยกบริสุทธิ์ถูกระบุชื่อและขึ้นอยู่กับ
ลักษณะทางสัณฐานวิทยาสรีรวิทยา และลักษณะทางชีวเคมี
ที่นำเสนอในคู่มือการใช้งาน Bergey ของ Determinative แบคทีเรีย (โฮลท์และ
al., 1994) และโปรไฟล์ APi Kit (bioMerieux, ฝรั่งเศส, 2009).
RAPD-PCR และ 16S-rRNA เทคนิคลำดับถูกนำมาใช้เพื่อ
อธิบายลักษณะและระบุสายพันธุ์ที่เลือก ในระดับโมเลกุล.
พันธุศาสตร์ระดับโมเลกุลวิเคราะห์
สกัดดีเอ็นเอ
ตะกอนเซลล์จากแบคทีเรียทั้งหมดถูกนำมาใช้ในการสกัด
ดีเอ็นเอโดยใช้ (Jena Bioscience, เยอรมนี) ชุดสกัด
ทำตามคำแนะนำของผู้ผลิต.
ดีเอ็นเอ polymorphic ขยายแบบสุ่ม (RAPD)
เก้าไพรเมอร์ที่แตกต่างกันถูกนำมาใช้ในวิธี PCR ปฏิกิริยาซึ่งประกอบด้วย
10 pmol ของแต่ละที่แตกต่างกันไพร 10-Mer โดยพลการและ 25-50
ng ของดีเอ็นเอและ 12.5 ไมโครลิตรของ 2 × SuperHot PCR Master Mix
(Bioron, Ludwigshafen, เยอรมนี) ชื่อและลำดับของ
oligoprimers เหล่านี้จะปรากฏในตารางที่ 2 การขยาย RAPD-PCR
ปฏิกิริยาได้ดำเนินการใน Cycler Eppendorf®ความร้อนโดยใช้
โปรแกรม PCR ต่อไปนี้: 1cycle ที่ 94 ° C, 4 นาที; 35 เพิ่มเติม
รอบประกอบด้วย 94 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 วินาที, 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 20 และ 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 20 วินาที.
หลังจากที่ขยายผลิตภัณฑ์ปฏิกิริยาพีซีอาร์ถูก electrophoresed
100 bp เครื่องหมายบันได (Fermentas, เยอรมนี) เมื่อวันที่ 10 × 14
ซม. 1.5% เจล -agarose (Bioshop; แคนาดา) เป็นเวลา 30 นาทีโดยใช้ Trisborate-EDTA
บัฟเฟอร์ เจลถูกย้อมด้วย 0.5 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร ethidium
bromide (Bioshop; แคนาดา).
ขยาย PCR ของ 16S-rRNA ยีน
ลำดับประถมศึกษาใช้ในการขยายส่วนของยีน 16S rRNA-
คือ U1 [5CCA GCA GCC GCG GTA ATA CG3] และ U2 [5ATC
GG (C / T) TAC CTT GTT ACG ACT TC3] ตาม Kumar et al.
(2006) ผสม PCR มาสเตอร์มี 10 pmol ของแต่ละรองพื้นและ
12.5 ไมโครลิตรของ 2 × SuperHot PCR Master Mix (Bioron, Ludwigshafen,
เยอรมนี) ผสมกับ 50-100 ศึกษาดีเอ็นเอของแม่ หมัน d.H2O
ถูกบันทึกอยู่ในเล่มสุดท้ายของ 25 ไมโครลิตร Cycler ความร้อน (Uno ครั้งที่สอง
Biometra, เยอรมนี) โปรแกรมเป็น 94 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 4 นาที, 94 ° C เป็นเวลา 1 นาที,
55 ° C เป็นเวลา 1 นาที, 72 ° C เป็นเวลา 1.5 นาที, จำนวนรอบเป็น 35 รอบ
และโพสต์ เวลาการเกิดปฏิกิริยา PCR เป็น 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาที.
การวิเคราะห์ผลิตภัณฑ์พีซีอาร์
หลังจากการขยายผลิตภัณฑ์ปฏิกิริยาพีซีอาร์ถูก electrophoresed
100 bp เครื่องหมายบันได (Fermentas, เยอรมนี) เมื่อวันที่ 10 ×
14 ซม 1.5% agarose เจล (Bioshop; แคนาดา) เป็นเวลา 30 นาทีโดยใช้ Trisborate-EDTA
บัฟเฟอร์ เจลถูกย้อมด้วย 0.5 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร ethidium
bromide (Bioshop; แคนาดา), มองเห็นภายใต้แสงยูวีและ
เอกสารโดยใช้ GeneSnap 4.00 ยีน-Genius ไบโอถ่ายภาพ
ระบบ (Syngene; เฟรเดอริ, Maryland, USA).
การวิเคราะห์เจล
polyacrylamide SDS เจลและ agarose ไฟล์ภาพดิจิตอลที่ได้รับการ
วิเคราะห์โดยใช้ยีนซอฟต์แวร์เครื่องมือจาก Syngene densitometric
การสแกนแต่ละขึ้นอยู่กับสามมิติลักษณะของมัน
ได้รับการดำเนินการ แต่ละกลุ่มได้รับการยอมรับโดยความยาวของ
ความกว้างและความรุนแรง ดังนั้นจำนวนเงินที่ญาติของแต่ละวง
วัดและคะแนน.
ลำดับของยีน 16S rRNA-
990 bp PCR ผลิตภัณฑ์ของแต่ละไอโซเลตที่ถูกทำให้บริสุทธิ์จากส่วนเกิน
ไพรเมอร์และนิวคลีโอโดยใช้ AxyPrep PCR ชุดทำความสะอาด
(AXYGEN ชีววิทยาศาสตร์, ยูเนี่ยน ซิตี้, แคลิฟอร์เนียสหรัฐอเมริกา) โดยตรงและ
ลำดับขั้นตอนการใช้ไพรเมอร์เช่นเดียวกับที่อธิบายไว้สำหรับการขยาย
กระบวนการ ผลิตภัณฑ์ที่มีลำดับขั้นตอนการใช้บิ๊กย้อม
Terminator วงจรลำดับพร้อมปฏิกิริยา Kit (ABI Applied
Biosystems, ฟอสเตอร์ซิตี้, แคลิฟอร์เนียสหรัฐอเมริกา) ใน 3130XL พันธุกรรม
วิเคราะห์ (Applied Biosystems) แบคทีเรีย 16S rDNA-ลำดับ
ได้ถูกจัดชิดแล้วด้วยลำดับที่รู้จักกัน-16S rDNA ใน
Genbank โดยใช้เครื่องมือค้นหาของการจัดตำแหน่งในท้องถิ่นระดับล่าง (ระเบิด) ที่
ศูนย์แห่งชาติสำหรับข้อมูลเทคโนโลยีชีวภาพที่คล้ายคลึงกันและร้อยละ
คะแนนถูกสร้างขึ้นเพื่อระบุเชื้อแบคทีเรีย.
การกำหนดความสัมพันธ์ทางพันธุกรรม
เพื่อที่จะกำหนดความสัมพันธ์ทางพันธุกรรมของการศึกษา
แบคทีเรียโดเดซิลซัลเฟตโซเดียมใช้ polyacrylamide gel electrophoresis
(SDS-PAGE) และดีเอ็นเอเทคนิค random amplified polymorphic (RAPD) ข้อมูลที่
ได้รับคะแนนสำหรับการแสดงตน (1) หรือไม่มี (0) ของวง ข้อมูลที่
ถูกโอนไปยังโปรแกรมซอฟต์แวร์สถิติสถิติแพคเกจ
สำหรับสังคมศาสตร์รุ่น 10.00 (SPSS Inc, ชิคาโก, อิลลินอยส์,
สหรัฐอเมริกา) เพื่อให้ได้สถิติการวิเคราะห์ในรูปแบบของความคล้ายคลึงกัน Jaccard ของ
สัมประสิทธิ์ (S) แสดงให้เห็นถึงความคล้ายคลึงกันทางพันธุกรรมในหมู่ที่แตกต่างกัน
ตรวจสอบ แบคทีเรียจากการเปรียบเทียบคู่ฉลาด
dendrogram ถูกสร้างขึ้นโดยใช้การเชื่อมโยงเฉลี่ยระหว่าง
กลุ่ม

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วัสดุและวิธีการศึกษาและออกแบบ

พื้นที่ศึกษาในวิทยาเขตของมหาวิทยาลัยที่ taif
โทรศัพท์มือถือถูกสุ่มเก็บจากผู้เข้าร่วมระหว่าง
มีนาคม 2554 และเดือนเมษายน 2555 .
3
รวม 101 โทรศัพท์มือถือถูกสุ่มเก็บจากผู้เข้าร่วม
ทั้งในหอพักเช่นเดียวกับในคณะ aseptically
ซับมือโทรศัพท์ทั้งการใช้ผ้าฝ้ายหมันแห้งจำนวนประชากร : 37
จำนวน 5 คณะ สมาชิก 30 บุคลากร
21 คน เก้า แพทย์ พยาบาลที่คลินิกสี่มหาวิทยาลัย .
โทรศัพท์มือถือซึ่งใช้อย่างน้อยสองเดือน
ตัวอย่างในมาตรฐานปลอดเชื้อแฟชั่นผ้าฝ้าย tipped applicators ในหมันหมัน
Caped citoswab ( บริษัทผลิตพลาสติกหลอด citotest Labware
จำกัด ( ประเทศจีน )ท่อ คือ
มาพร้อมกับ 3 มล. ของน้ำบ่มค้างคืนปอนด์มิลเลอร์สื่อ
ที่ 35 องศา ในช่วงเวลาของการศึกษา ไม่ใช้งานสอบสวนถูก
ดำเนินการสำหรับการติดเชื้อเชื้อโรค ตัวอย่างจากโทรศัพท์มือถือ
ของผู้เข้าร่วมทั้งหมดจากวิทยาเขตจำนวนสุ่มระหว่างรูทีนประจำวัน
งานและแต่ละคนถูกถามเกี่ยวกับสุขลักษณะ
นั่นคือถ้าเขา / เธอเคยทำความสะอาดโทรศัพท์มือถือของเขาหรือล้าง
มือหลังเข้าห้องน้ำ ไม้กวาดฝ้ายเป็นหมันก็กลิ้งมาทั้งหมด
สัมผัสพื้นผิวด้านนอกของโทรศัพท์มือถือซึ่งใช้สำหรับ
อย่างน้อยสองเดือน การถ่ายเพื่อให้แน่ใจว่าปุ่มกด
และปุ่มทั้งหมดทำความสะอาด เนื่องจากพื้นที่เหล่านี้ส่วนใหญ่
บ่อยติดต่อกับเคล็ดลับของนิ้วมือ โทรศัพท์มือถือถูก
decontaminated กับ isopropylalchohol 70% แล้วหลังจากที่สารพิษจากตัวอย่าง
ลายกว่าแกะเลือดวุ้น
MA โอซินีน , วุ้นสีฟ้า ( EMB ) streptococccus
สื่อวุ้นโดย Lynx แผ่นสำหรับ
คุณสมบัติของแบคทีเรียที่ใช้ออกซิเจน ไม่มีเชื้อรา ไร้วัฒนธรรม /
ถูกถ่าย แผ่น aerobically ถูกบ่มที่ 37 ° C เป็นเวลา 48 ชั่วโมง

ห้องปฏิบัติการวิเคราะห์การวิเคราะห์ทางห้องปฏิบัติการได้ดำเนินการในห้องปฏิบัติการของศูนย์วิจัย
เทคโนโลยีชีวภาพและพันธุวิศวกรรม ( bgerc )
ของ taif มหาวิทยาลัย taif , KSA
.
( ผ้าฝ้ายถูกแช่อยู่ในน้ำประมาณ 5 ปอนด์ )
aerobically ข้ามคืนที่ 37 องศา c.15898 AFR . เจ biotechnol .
แจงแบคทีเรีย
อนุกรมเจือจางจากที่เกิดการจาก
ซุปสารอาหารขนาดกลางเป็นเทชุบนับ ( PCA ) และบ่มที่ 37 ° C
24 ชั่วโมง ภายใต้สภาวะที่มีออกซิเจน . จํานวนประมาณ
อาณานิคมสร้างหน่วย ( CFU ) สำหรับแต่ละตัวอย่างถูกนับ .
จำนวนเชื้อใน MA ( MSA ) แกะเลือด
( BA ) และ Planetmath reference ( PCA ) สื่อนับรวม
แบคทีเรียและ sabouraud dextrose agar medium สำหรับการนับ
เชื้อราสำเนาแผ่นสำหรับแต่ละสื่อที่ทำเพื่อแต่ละ dilution
บริสุทธิ์กาเวียน ถูกย่อยลงเลี้ยงแกะเลือดวุ้น
แผ่น ( สำหรับการเจริญเติบโตของแบคทีเรียแบบ ) และ Lynx
แผ่น ( เข้มข้น ) เป็นเวลา 24 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 องศา C สำหรับการแยกและระบุลักษณะโคโลนี
( Koch , 1984 ) .
• สิ่งมีชีวิต
อาณานิคมแสดงการเติบโตที่ดีและตัวอักษรบนแผ่นถูก
เลือกลายใหม่ MSA , BA , และแผ่นวุ้นสารอาหาร a
เติบโตอย่างรวดเร็ว มองเห็นชัดเจน หมู่และแยกจากสายพันธุ์คัดเลือกเฉพาะ

ซ้ำการวิเคราะห์ต่อไปและบริสุทธิ์โดยการชุบ สไลด์ลูกเมียทดสอบแตกต่าง
staphylococcal เชื้อ S . aureus ในและและลูกเมียลบ
( ข้อเสีย ) ได้
( Koch , 1984 )การจำแนกสิ่งมีชีวิต
สกัดบริสุทธิ์เป็นกรัมและชีวเคมีจากอาณานิคม
การทำโดยใช้ indole , Catalase , ซิเตรต เอนไซม์
ลูกเมีย และที่มีการทดสอบก่อนและทดสอบ API กำหนด
สไลด์ลูกเมียแยกเป็น S
staphylococcal ทดสอบความแตกต่าง และลูกเมีย ) และลบ ( ข้อเสีย )
การวิจัย ไอโซเลตเป็นบริสุทธิ์การระบุและตั้งชื่อตาม
ลักษณะทางสัณฐานวิทยา สรีรวิทยา และชีวเคมี
นำเสนอในวิธีตามคู่มือของตัวกำหนดแบคทีเรียวิทยา ( โฮลท์และ
al . , 1994 ) และโปรไฟล์ชุด API ( biomerieux , ฝรั่งเศส , 2009 ) และลำดับเบส 16S rRNA
ชื่อเรื่อง เทคนิคที่ใช้เพื่ออธิบายลักษณะและระบุสายพันธุ์
เลือกระดับ

การวิเคราะห์โมเลกุลพันธุศาสตร์โมเลกุลการสกัดดีเอ็นเอจากเซลล์เม็ด
แบคทีเรียไอโซเลทที่ใช้สกัดดีเอ็นเอโดยใช้
( Jena วิทยาศาสตร์ชีวภาพ , เยอรมนี ) แยกตามคําแนะนําของผู้ผลิตชุด
.
Amplified Polymorphic DNA ( RAPD )
9 ชนิดต่าง ๆที่ใช้ในปฏิกิริยา PCR ประกอบด้วย
10 pmol ที่แตกต่างกันของแต่ละข้อ 10 เมอร์ ไพรเมอร์ และ 25 ถึง 50
ng ของดีเอ็นเอ และ 12 .5 μ L 2 ×ฮอต PCR Master Mix
( bioron ลุดวิกส์ฮาเฟ่น , เยอรมนี ) ชื่อและลำดับของ
oligoprimers เหล่านี้อยู่ในรางที่ 2 ส่วนชื่อเรื่อง (
ปฏิกิริยาการเพนดอร์ฟ®ความร้อนวงจรโดยใช้โปรแกรมต่อไปนี้ : 1cycle
PCR ที่ 94 ° C , 4 นาที ; รอบ 35 เพิ่มเติมประกอบด้วย 94 ° C
5 S , 37 ° C เป็นเวลา 20 และ 72 ° C เป็นเวลา 20 S .
หลังจากขยายการตรวจปฏิกิริยาผลิตภัณฑ์ electrophoresed
100 BP บันไดเครื่องหมาย ( fermentas , เยอรมนี ) 10 × 14
เซนติเมตร 1.5 % เจล ( bioshop ; แคนาดา ) สำหรับ 30 นาทีโดยใช้ trisborate EDTA
บัฟเฟอร์ เจลμเปื้อน 0.5 g / ml คู่
โบรไมด์ ( bioshop ; แคนาดา )
PCR แบบเบส 16S rRNA ยีน
รองพื้นลำดับเบส 16S rRNA ยีนใช้เพื่อขยายส่วน
:U1 [ 5cca GCA GCC gcg GTA ATA cg3 ] และ U2 [ 5atc
GG ( C / T ) พระราชบัญญัติบริษัทซีทีที gtt ACG tc3 ] ตาม Kumar et al .
( 2006 ) pcr Master Mix จำนวน 10 pmol ของแต่ละสีและ
μ 12.5 ลิตร 2 ×ฮอต PCR Master Mix ( bioron Ludwigshafen
, , เยอรมนี ) ผสมกับ 50 ถึง 100 กรัมของแม่แบบดีเอ็นเอ หมัน d.h2o
ถูกเพิ่มปริมาณสุดท้าย 25 µ . ความร้อนรอบ ( Uno 2 biometra
,เยอรมนี ) โปรแกรม 94 °องศาเซลเซียสเป็นเวลา 4 นาที 94 ° C เป็นเวลา 1 นาที
55 °องศาเซลเซียสนาน 1 นาที 72 ° C เป็นเวลา 1.5 นาที จำนวนรอบเท่ากับ 35 รอบ
และโพสต์เพื่อตรวจหาเวลา 72 ° C เป็นเวลา 5 นาที

การวิเคราะห์ผลิตภัณฑ์ PCR หลังจากเพิ่มจำนวน , เพื่อตรวจหาผลิตภัณฑ์ electrophoresed
100 BP บันไดเครื่องหมาย ( fermentas , เยอรมนี ) 10 ×
14 เซนติเมตร 1.5 % เจล ( bioshop ;แคนาดา ) 30 นาที ใช้ trisborate EDTA
บัฟเฟอร์ เจลใช้ย้อมµ 0.5 g / ml คู่
โบรไมด์ ( bioshop ; แคนาดา ) มองเห็นภายใต้แสงยูวี และเอกสารที่ใช้ genesnap

ระบบไบโอ 4.00-gene อัจฉริยะภาพ ( syngene ; Frederick , Maryland , USA )

SDS polyacrylamide เจลเจลการวิเคราะห์และไฟล์ภาพดิจิตอล , มี
โดยใช้เครื่องมือของซอฟต์แวร์จาก syngene .การ densitometric
สแกนของแต่ละคนขึ้นอยู่กับขนาดของลักษณะของมัน 3
ได้ดําเนินการ แต่ละวงได้รับการยอมรับโดยความยาวของมัน
ความกว้างและความเข้ม ดังนั้น ยอดเงินของแต่ละวงญาติ
วัดและคะแนนการจัดลำดับของยีน 16S rRNA .

990 BP PCR ผลิตภัณฑ์ของแต่ละแยกได้บริสุทธิ์จากไพรเมอร์ส่วนเกิน
และนิวคลีโอไทด์ โดยการใช้ axyprep PCR ทำความสะอาดชุด
( axygen ชีววิทยา ยูเนียนซิตี , แคลิฟอร์เนีย , สหรัฐอเมริกา ) และลำดับการใช้ไพรเมอร์โดยตรง
เดียวกันตามที่อธิบายไว้ในขั้นตอนการเพิ่ม

ผลิตภัณฑ์นี้ใช้ย้อม
Terminator รอบใหญ่ลำดับชุดปฏิกิริยาพร้อม ( ABI ประยุกต์
Biosystems ฟอสเตอร์ ซิตี้ , แคลิฟอร์เนีย , สหรัฐอเมริกา ) ใน 3130xl พันธุกรรม
วิเคราะห์ ( Applied Biosystems ) ของ 16S rDNA ลำดับ
ที่ได้รู้จักแล้วสอดคล้องกับลำดับ 16S rDNA ใน
ขนาดโดยใช้เครื่องมือค้นหาการปรับพื้นฐานท้องถิ่น ( ระเบิด ) ที่
ศูนย์ข้อมูลเทคโนโลยีชีวภาพแห่งชาติ และร้อยละ คะแนนถูกสร้างขึ้นเพื่อระบุตัว

การหาความสัมพันธ์ทางพันธุกรรมของแบคทีเรีย เพื่อกำหนด

ศึกษาความสัมพันธ์ทางพันธุกรรมของแบคทีเรียโซเดียมโดเดซิลซัลเฟต polyacrylamide gel electrophoresis ( SDS-PAGE )
แบบ polymorphic DNA ( RAPD ) ของคะแนนสำหรับการแสดงข้อมูล
( 1 ) หรือขาด ( 0 ) วงดนตรี ข้อมูลที่ถูกโอนไปยังโปรแกรม

แพคเกจซอฟต์แวร์ทางสถิติ สถิติสำหรับสังคมศาสตร์ รุ่นที่ 10 ( SPSS Inc , Chicago , Illinois , สหรัฐอเมริกา
) เพื่อให้ได้สถิติวิเคราะห์ในรูปแบบของความเหมือน
Jaccardสัมประสิทธิ์ ( s ) , แสดงความคล้ายคลึงกันทางพันธุศาสตร์ของเชื้อที่แยกได้จากการตรวจสอบแตกต่างกัน
คู่ปัญญาเปรียบเทียบ
เดนโดรแกรมที่ถูกสร้างขึ้นโดยใช้ค่าเฉลี่ยระหว่าง
กลุ่ม