2.1. Strain and culture conditionsL

2.1. Strain and culture conditions
L. acidophilus DSM 20079 is the DSMZ reference strain (Deutsche
Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH,
Braunschweig, Germany). Cells were grown at 37 C for 24 h in MRS
deMan, Rogosa and Sharpe broth [20] (casein peptone, tryptic
digest 10 g/L; meat extract 10 g/L; yeast extract 5 g/L; tween 80 1 g/
L; K2HPO4 2 g/L; Na-acetate 5 g/L; (NH4)2 citrate 2 g/L;
MgSO4  7H2O 0.20 g/L; MnSO4  H2O 0.05 g/L), pH 6.2, complemented
with 20 g/L of inulin, pectin or glucose, the last one used
as control. All chemicals were supplied by Sigma (Milano, Italy). All
solutions were sterilized; all manipulations were aseptically
performed.
2.2. Resistance to simulated gastric and intestinal juices
The artificial gastric juice contained MRS broth, plus 3 g/L
pepsin, with a final pH adjusted to 2.0. The artificial intestinal juice
contained MRS broth plus 1 g/L pancreatin and 4.5 g/L bile salts
(sodium glycocholate and sodium taurocholate, code number
X606C, Oxoid, Basingstoke, UK). Both solutions were filtersterilized
(0.22 mm, Millipore SpA, Milano, Italy). The strain was
treated using the protocol of De Giulio et al. [21]. Bacterial
suspensions were incubated in artificial gastric juice for 180 min at
37 C and recovered by centrifugation. After washing with sterile
physiological solution (8.5 g/L NaCl), the cell pellet was resuspended
in the simulated gastrointestinal juice (4.5 mL/100 mL of
cells). Samples were incubated at 37 C for 60 min. Cell viability
(cfu/mL) was evaluated by anaerobic culturing on MRS plates
(37 C, 48 h) before and after incubation in the two simulated
gastrointestinal juices. Each separate experiment was performed
three times.
3. Biochemical analysis
3.1. Protein profile
Cells were centrifuged (11,600 g, 4 C, 15 min; Heraeus, Cavenago
Brianza, MI, Italy) and washed twice in 0.05 M TriseHCl, pH
7.4 (1:5 w:vol). Pellets were resuspended in 300 mL 0.05MTriseHCl
pH 7.4 with 2% SDS and then sonicated for three 1-min cycles.
Following the addition of glass beads, samples were mixed for
5 min and boiled at 100 C for 3 min [22]. Glass beads and cell
debris were removed by centrifugation, and the supernatant was
collected. The protein content of the supernatant was evaluated
according to Bradford [23]. The protein extract was dissolved
according to Sugiyama et al. [24] in 2.5 mL of an isoelectrofocusing
buffer [7 M urea, 5 mM DTT, 4% (w/v) Chaps, and 2% Bio-Lyte 3/10
carrier ampholytes, Bio-Rad, Hercules, CA, USA], applied to Micro-
Rotofor (Bio-Rad, Hercules, CA, USA), and electrophoresed for 3 h
under a constant power of 1W at 15 C, according to the manufacturer’s
instructions. After electrophoresis, liquid fractions from
each compartment (about 200 mL) were carefully harvested, and
three volumes of acetone were added. Proteins were precipitated
and collected by centrifugation at 11,600 g for 10 min at 4 C. After
the supernatant was removed, the protein pellet was dried and
resuspended in 50 mL of ultrapure water. A 5-mL aliquot of each
sample was diluted with 84 mL of ultrapure water and 2 mL of
sample buffer (Experion Pro260 kit, Bio-Rad Hercules, CA, USA)
that contained 1 mL of b-mercaptoethanol. All samples were treated
at 100 C for 3 min. A 6-mL sample was analyzed by chip capillary
electrophoresis (Experion Pro260 Analysis Kit; Bio-Rad Hercules,
CA, USA) over a range of molecular weights from 1.2 to 260 kDa
[22].
The analysis was completed using an Experion automated
electrophoresis system (Bio-Rad Hercules, CA, USA) and the
appropriate software (fluorescence detection with a 10-mW
semiconductor laser emitting at 630 nm). The automated analysis
took 30 min for a set of 10 samples

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.1. ความเครียด และสภาพวัฒนธรรมL. acidophilus DSM 20079 เป็นสายพันธุ์อ้างอิง DSMZ (Deutscheซัมม์ลุงโรเซน Mikroorganismen von und Zellkulturen GmbHไวก์ เยอรมนี) เซลล์ที่ปลูกที่ 37 C ใน 24 h ในนางdeMan, Rogosa และ Sharpe ซุป [20] (เคซีน peptone, trypticย่อย 10 g/L เนื้อแยก 10 g/L สารสกัดจากยีสต์ 5 g/L แต่ 80 1 กรัม /L K2HPO4 2 g/L อะซิเตนา 5 g/L (NH4) 2 ซิเตรท 2 g/LMgSO4 7H2O 0.20 g/L MnSO4 H2O 0.05 g/L), pH 6.2 ครบครันกับ 20 g/L ของอินนูลิ เพกทิน หรือ กลูโคส หนึ่งครั้งสุดท้ายที่ใช้เป็นการควบคุม สารเคมีทั้งหมดได้มาจากซิกม่า (มิลาโน อิตาลี) ทั้งหมดโซลูชั่นได้ผ่านการฆ่าเชื้อ ทั้งหมด manipulations ถูก asepticallyการดำเนินการ2.2. ความต้านทานน้ำผลไม้จำลองกระเพาะอาหาร และลำไส้น้ำผลไม้ในกระเพาะอาหารเทียมอยู่นางซุป บวก 3 g/Lเพพซิน กับค่า pH สุดท้ายปรับเป็น 2.0 น้ำผลไม้ลำไส้เทียมประกอบด้วยนางซุปบวก 1 แยก pancreatin และ 4.5 แยกน้ำดีเกลือ(glycocholate โซเดียมและโซเดียม taurocholate เลขรหัสX606C, Oxoid, Basingstoke สหราชอาณาจักร) ทั้งสองถูก filtersterilized(0.22 มม. มิลลิพอร์สปา มิลาโน อิตาลี) สายพันธุ์คือได้รับการรักษาโดยใช้โพรโทคอลเด Giulio ร้อยเอ็ด [21] แบคทีเรียระบบกันสะเทือนได้รับการกกในเทียมในกระเพาะอาหารน้ำผลไม้ 180 นาทีที่37 C และกู้คืน โดยหมุนเหวี่ยง หลังจากล้างด้วยผ่านการฆ่าเชื้อโซลูชันทางสรีรวิทยา (8.5 g/L NaCl), เม็ดเซลล์ถูก resuspendedในระบบทางเดินอาหารน้ำจำลอง (4.5 mL/100 mL ของเซลล์) ตัวอย่างได้รับการกกที่ 37 C 60 นาทีชีวิตเซลล์รับการประเมิน (cfu/mL) โดยนำไปเลี้ยงที่ไม่ใช้ออกซิเจนบนแผ่นนาง(37 C, 48 ชั่วโมง) ก่อน และ หลังในสองจำลองน้ำกระป๋องระบบทางเดินอาหาร ทำการทดลองแต่ละแยกต่างหากสามครั้ง3. วิเคราะห์ชีวเคมี3.1. โปรตีนโปรไฟล์เซลล์ที่ได้จาก (11,600 g, 4 C, 15 นาที ก๊าซ CavenagoBrianza, MI อิตาลี) และล้างใน 0.05 M TriseHCl, pH7.4 (w:vol 1:5) เม็ดถูก resuspended ใน 300 มล. 0.05MTriseHClpH ที่ 7.4 กับ 2% SDS และ sonicated สามนาที 1 รอบแล้วต่อการเพิ่มของลูกปัดแก้ว รวมตัวอย่างสำหรับ5 นาที และต้ม 100 c เป็นเวลา 3 นาที [22] ลูกปัดแก้วและเซลล์เศษถูกลบ โดยการหมุนเหวี่ยง และก็ supernatantการเก็บรวบรวม ปริมาณโปรตีนของ supernatant ถูกประเมินตามแบรดฟอร์ด [23] สารสกัดจากโปรตีนที่ละลายตาม Sugiyama et al. [24] ใน 2.5 mL ของการ isoelectrofocusingบัฟเฟอร์ [ยูเรีย 7 ม. 5 มม. DTT, Chaps 4% (w/v) และ 2% ไบโอ-Lyte 3/10ผู้ให้บริการ ampholytes, Bio-ล้อ เฮอร์คิวลิส CA, USA], ที่ใช้กับไมโคร-Rotofor (Bio-ล้อ เฮอร์คิวลิส CA, USA), และ electrophoresed สำหรับ 3 ชมภายใต้กำลังคงที่ของ 1W ที่ C 15 ตามของผู้ผลิตคำแนะนำ หลังจากอิ เศษของเหลวจากแต่ละช่อง (200 มิลลิลิตร) ถูกเก็บเกี่ยวอย่างระมัดระวัง และอะซีโตนในปริมาณสามถูกเพิ่ม มีการตกตะกอนโปรตีนและรวบรวม โดยหมุนเหวี่ยงที่ 11,600 g 10 นาทีที่ 4 ค.หลังจากsupernatant ถูกลบ ถูกแห้งเม็ดโปรตีน และresuspended ใน 50 mL ของน้ำบริสุทธิ์พิเศษ ส่วนลงตัว 5 มิลลิลิตรของแต่ละตัวอย่างถูกเจือจาง ด้วย 84 mL ของน้ำบริสุทธิ์พิเศษและ 2 mLบัฟเฟอร์ของตัวอย่าง (Experion Pro260 kit, Bio-ล้อเฮอร์คิวลิส CA, USA)ที่อยู่ 1 มล.ของ b-mercaptoethanol ตัวอย่างทั้งหมดได้รับการรักษา100 c เป็นเวลา 3 นาที ตัวอย่าง 6 มิลลิลิตรถูกวิเคราะห์ โดยเส้นเลือดฝอยชิปอิ (Experion Pro260 วิเคราะห์ชุด Bio-ล้อ HerculesCA, USA) ในช่วงของน้ำหนักโมเลกุลจาก 1.2 ไป 260 kDa[22]การวิเคราะห์โดยใช้การ Experion แบบอัตโนมัติเสร็จสมบูรณ์ระบบอิ (Bio-ล้อเฮอร์คิวลิส CA, USA) และซอฟต์แวร์ที่เหมาะสม (เรืองแสงที่ตรวจจับ 10-mWสารกึ่งตัวนำเลเซอร์เปล่งที่ 630 nm) การวิเคราะห์แบบอัตโนมัติใช้เวลา 30 นาทีสำหรับชุดของตัวอย่างที่ 10

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.1 ความเครียดและวัฒนธรรมเงื่อนไข
ลิตร acidophilus DSM 20079 เป็น DSMZ อ้างอิงความเครียด (Deutsche
Sammlung ฟอน Mikroorganismen คาดไม่ถึง Zellkulturen GmbH,
Braunschweig, เยอรมนี) เซลล์ที่ถูกปลูกที่ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมงใน MRS?
Deman, Rogosa และชาร์ปน้ำซุป [20] (เคซีนเปปโตน, ทริปซิ
ย่อย 10 g / l; สารสกัดจากเนื้อ 10 กรัม / l; สารสกัดจากยีสต์ 5 g / l; Tween 80 1 กรัม /
l; K2HPO4 2 กรัม / l; นาอะซิเตท 5 กรัม / ลิตร (NH4) 2 ซิเตรต 2 กรัม / l;
? MgSO4 7H2O 0.20 กรัม / ลิตร? MnSO4 H2O 0.05 กรัม / ลิตร), พีเอช 6.2, ครบครัน
ด้วย 20 กรัม / ลิตรของอินนูลิน, เพคตินหรือกลูโคสคนสุดท้ายที่ใช้
เป็นตัวควบคุม สารเคมีทั้งหมดถูกจัดทำโดยซิกม่า (Milano, อิตาลี) ทั้งหมด
การแก้ปัญหาที่ถูกฆ่าเชื้อ; กิจวัตรทุกคนปลอดเชื้อ
ดำเนินการ.
2.2 ความต้านทานต่อน้ำผลไม้จำลองในกระเพาะอาหารและลำไส้
น้ำย่อยเทียมที่มี MRS น้ำซุปบวก 3 กรัม / ลิตร
น้ำย่อยที่มีค่า pH สุดท้ายปรับ 2.0 น้ำผลไม้ลำไส้เทียม
ที่มีน้ำซุป MRS บวก 1 กรัม / ลิตร Pancreatin และ 4.5 กรัม / เกลือน้ำดี L
(โซเดียม glycocholate และโซเดียม taurocholate จำนวนรหัส
X606C, Oxoid เบซิงสหราชอาณาจักร) การแก้ปัญหาทั้งสองถูก filtersterilized
(0.22 มมร์คสปา, Milano, อิตาลี) สายพันธุ์ที่ได้รับ
การรักษาโดยใช้โปรโตคอลของเดอลิโออัล et [21] แบคทีเรีย
แขวนลอยถูกบ่มในน้ำย่อยเทียมสำหรับ 180 นาทีที่
37 องศาเซลเซียสและกู้คืนโดยการหมุนเหวี่ยง หลังจากล้างด้วยการฆ่าเชื้อ
แก้ปัญหาทางสรีรวิทยา (8.5 กรัม / ลิตรโซเดียมคลอไรด์) ตะกอนเซลล์ที่ถูก resuspended
ในระบบทางเดินอาหารน้ำผลไม้จำลอง (4.5 mL / 100 มลของ
เซลล์) ตัวอย่างที่ถูกบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 60 นาที เซลล์มีชีวิต
(CFU / มิลลิลิตร) ถูกประเมินโดยการเพาะเลี้ยงแบบไม่ใช้ออกซิเจนบนจาน MRS
(37? C, 48 ชั่วโมง) ก่อนและหลังการบ่มในสองจำลอง
น้ำผลไม้ทางเดินอาหาร การทดสอบแต่ละแยกต่างหากได้ดำเนินการ
สามครั้ง.
3 การวิเคราะห์ทางชีวเคมี
3.1 รายละเอียดโปรตีน
เซลล์ที่ถูกหมุนเหวี่ยง (? 11,600 กรัม 4 C, 15 นาที; Heraeus, Cavenago
Brianza, MI, อิตาลี) และล้างครั้งที่สองใน 0.05 M TriseHCl พีเอช
7.4 (1: 5 w: ปริมาตร) เม็ดถูก resuspended ใน 300 มล 0.05MTriseHCl
ค่า pH 7.4 มี 2% SDS แล้ว sonicated สำหรับสามรอบ 1 นาที.
ต่อไปนอกจากลูกปัดแก้วตัวอย่างถูกผสมสำหรับ
5 นาทีและต้มที่ 100 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 3 นาที [22] ลูกปัดแก้วและมือถือ
เศษถูกถอดออกโดยการหมุนเหวี่ยงและสารละลายที่ถูก
เก็บรวบรวม ปริมาณโปรตีนใสได้รับการประเมิน
ตามแบรดฟอ [23] สารสกัดจากโปรตีนก็เลือนหายไป
ตามซึกิยามา et al, [24] ใน 2.5 มิลลิลิตรของ isoelectrofocusing
บัฟเฟอร์ [7 M ยูเรีย 5 มิลลิ DTT, 4% (w / v) Chaps และ 2% ไบโอเต้ 3/10
ผู้ให้บริการ ampholytes, Bio-Rad, Hercules, CA, USA] นำไปใช้กับไมโคร
ROTOFOR? (Bio-Rad, Hercules, CA, USA) และ electrophoresed เวลา 3 ชั่วโมง
ภายใต้อำนาจคงที่ของ 1W ที่ 15 องศาเซลเซียสตามที่ผู้ผลิต
คำแนะนำ หลังจาก electrophoresis เศษส่วนของเหลวจาก
แต่ละช่อง (ประมาณ 200 มิลลิลิตร) เก็บเกี่ยวอย่างระมัดระวังและ
สามเล่มของอะซิโตนถูกเพิ่ม โปรตีนที่ได้รับการตกตะกอน
และเก็บรวบรวมโดยการหมุนเหวี่ยงที่ 11,600 กรัมเป็นเวลา 10 นาทีที่ 4 องศาเซลเซียส หลังจาก
ใสจะถูกลบออกเม็ดโปรตีนแห้งและ
resuspended ใน 50 มิลลิลิตรของน้ำบริสุทธิ์ หาร 5 มิลลิลิตรของแต่ละ
ตัวอย่างถูกเจือจางด้วย 84 มิลลิลิตรของน้ำบริสุทธิ์และ 2 มล
บัฟเฟอร์ตัวอย่าง (ชุด Experion? Pro260, Bio-Rad Hercules, CA, USA)
ที่มี 1 มิลลิลิตรของ B-mercaptoethanol ตัวอย่างทั้งหมดได้รับการรักษา
ที่ 100 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 3 นาที ตัวอย่าง 6 มิลลิลิตรวิเคราะห์โดยชิปเส้นเลือดฝอย
electrophoresis (Experion Pro260 วิเคราะห์ Kit? Bio-Rad Hercules,
CA, USA) ในช่วงน้ำหนักโมเลกุล 1.2-260 kDa
. [22]
การวิเคราะห์เสร็จสมบูรณ์ใช้ Experion? อัตโนมัติ
ระบบอิเล็ก (Bio-Rad Hercules, CA, USA) และ
ซอฟแวร์ที่เหมาะสม (การตรวจสอบการเรืองแสงที่มี 10 เมกะวัตต์
เซมิคอนดักเตอร์เลเซอร์เปล่งแสงที่ 630 นาโนเมตร) การวิเคราะห์อัตโนมัติ
เอา 30 นาทีสำหรับชุดของ 10 ตัวอย่าง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.1 . ความเครียดและเพาะเลี้ยงL . acidophilus DSM 20079 เป็น dsmz อ้างอิงเมื่อย ( เยอรมันsammlung ฟอน mikroorganismen และ zellkulturen GmbH ,บราวน์ชไวก์ เยอรมนี ) เซลล์มีการเติบโตที่อุณหภูมิ 37 24 ชั่วโมง .ดีเมิน rogosa ชาร์ป , และน้ำซุป [ 20 ] ( extract , อาหาร ,ย่อย 10 g / l ; สารสกัด 10 กรัม / ลิตร เนื้อ แยก 5 กรัม / ลิตร ยีสต์ ; Tween 80 1 กรัมต่อลิตรl ; k2hpo4 2 g / l ; นาเทต 5 g / l ; ( NH4 ) 2 ซิเตรต 2 กรัม / ลิตรMgSO4 ใ 7h2o 0.20 กรัม / ลิตร mnso4 H2O 0.05 กรัมต่อลิตร pH 6.2 , ครบครัน )20 กรัมต่อลิตรของอินนูลิน เพกติน หรือกลูโคส สุดท้ายใช้เป็นควบคุม ทั้งหมดเคมีภัณฑ์ถูกจัดโดย Sigma ( มิลาน , อิตาลี ) ทั้งหมดโซลูชั่นการจัดการเป็น aseptically ฆ่าเชื้อ ; ทั้งหมดแสดง2.2 . ความต้านทานในกระเพาะอาหารและลำไส้ผลไม้จำลองน้ำย่อยเทียมที่มีอยู่ MRS broth และ 3 กรัมต่อลิตรเพพซิน กับสุดท้ายปรับ pH 2.0 น้ำไส้เทียมประกอบด้วย MRS broth บวก 1 กรัม / ลิตร Pancreatin 4.5 กรัมต่อลิตร และเกลือน้ำดี( ไกลโคโคเลตและโซเดียมทอโรโคเลต หมายเลขรหัสx606c oxoid Basingstoke , สหราชอาณาจักร , , ) ทั้งโซลูชั่น filtersterilized( 0.22 มม. มิลลิสปา , มิลาน , อิตาลี ) สายพันธุ์ คือถือว่าการใช้โปรโตคอลของเดอจูลิโอ et al . [ 21 ] แบคทีเรียช่วงล่างถูกบ่มในน้ำย่อยเทียม 180 นาทีที่37 องศาเซลเซียส และกู้คืนโดยการปั่นเหวี่ยง หลังจากล้างด้วยปลอดเชื้อวิธีทางสรีรวิทยา ( 8.5 กรัม / ลิตรโซเดียมคลอไรด์ ( NaCl ) , เซลล์เม็ดเป็น resuspendedในทางเดินอาหาร น้ำผลไม้ จำลอง ( 4.5 มล. / 100 มิลลิลิตรเซลล์ ) ตัวอย่างที่บ่มที่ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 60 นาที เซลล์( CFU / ml ) คือการประเมินโดยการเพาะเลี้ยงในจานแบบนาง( 37 องศาเซลเซียส 48 ชั่วโมง ) ก่อนและหลังบ่มในช่วงสองจำลองน้ำผลไม้ทางเดินอาหาร ทดสอบแต่ละแยกสามครั้ง3 . การวิเคราะห์ทางชีวเคมี3.1 . โปรไฟล์ของโปรตีนเซลล์มีไฟฟ้า ( 11600 g 4 C , 15 นาที ; Heraeus cavenago ,บริ มิ , อิตาลี ) และล้างสองครั้งใน 0.05 M trisehcl , พีเอช7.4 ( 1 : 5 W : Vol ) อัตรา resuspended ใน 0.05mtrisehcl 300 มล.พีเอช 7.4 2 % SDS แล้ว sonicated สาม 1-min รอบต่อไปนี้นอกเหนือจากลูกปัดแก้วจำนวนผสมสำหรับ5 นาที และต้มที่ 100 องศาเซลเซียส นาน 3 นาที [ 22 ] ลูกปัดแก้ว และ เซลล์เศษถูกเอาออกโดยการเหวี่ยงแยก และนำ คือรวบรวม ปริมาณโปรตีนของน่านคือประเมินตามแบรดฟอร์ด [ 23 ] สารสกัดโปรตีนที่ละลายได้ตาม ซูกิยาม่า et al . [ 24 ] ในการ isoelectrofocusing 2.5 มล.บัฟเฟอร์ [ 7 M ยูเรีย ส่วน 5 มม. , 4 % ( w / v ) Chaps และร้อยละ 2 3 / 10 ไบโอไลฟ์ผู้ให้บริการ น้ำหนักแรกเกิดน้อยกว่าปกติ ชีวภาพราด , Hercules , CA , USA ) ใช้กับไมโคร -rotofor ( ไบโอ ราด , Hercules , CA , USA ) และ electrophoresed เป็นเวลา 3 ชม.ภายใต้อำนาจคงที่ของ 1W ที่ 15 องศาเซลเซียส ตามของผู้ผลิตคําแนะนํา หลังจากอิเล็กเศษส่วนจากของเหลวแต่ละช่อง ( 200 ml ) และเก็บให้ดี3 ชุด สำหรับเพิ่มเข้ามาอีก ตกตะกอนโปรตีนคือและเก็บรวบรวมโดยการปั่นเหวี่ยงที่ 11600 G สำหรับ 10 นาทีที่ 4 องศาเซลเซียส หลังจากที่นำออกโปรตีนเม็ดแห้งและresuspended 50 มล. ของน้ำบริสุทธิ์มาก . เป็น 5-ml ส่วนลงตัวของแต่ละตัวอย่างที่เจือจางด้วยน้ำบริสุทธิ์มาก 84 กรัมและ 2 มิลลิลิตรตัวอย่างบัฟเฟอร์ ( experion pro260 Kit ไบโอ ราด Hercules , CA , USA )ที่อยู่ 1 มิลลิลิตร b-mercaptoethanol . ตัวอย่างทั้งหมดจะถูกปฏิบัติที่ 100 องศาเซลเซียส นาน 3 นาที เป็น 6-ml ตัวอย่างโดยใช้ชิปหลอดเลือดฝอยอิเล็กโตรโฟรีซิส ( ชุด ; ไบโอ ราด เฮอร์คิวลิส experion pro260 การวิเคราะห์แคลิฟอร์เนีย สหรัฐอเมริกา ) ในช่วงน้ำหนักโมเลกุล 1.2 260 กิโลดาลตัน[ 22 ]การวิเคราะห์โดยใช้การ experion แบบอัตโนมัติระบบอิเล็กโตรโฟรีซิส ( ไบโอ ราด Hercules , CA , USA ) และซอฟต์แวร์ที่เหมาะสม ( การตรวจหาด้วย 10 เมกะวัตต์เซมิคอนดักเตอร์เลเซอร์เปล่งที่ 630 nm ) การวิเคราะห์แบบอัตโนมัติใช้เวลา 30 นาทีสำหรับชุดของ 10 ตัวอย่าง