For LAMP assay, fresh infected plan

For LAMP assay, fresh infected plant material, bacterial DNA, and serial bacterial dilutions as described above, were used for diagnosis. Bacterial ooze was also used from green house infected material by diluting into 25 ul of water. For sample preparation from infected tissues, the cambium layer was exposed and a sterile pipet tip was rubbed three times across the surface at the transition zone. The pipet tips were dipped into a 200 µl microfuge tube containing 25 ul of sterile water and the process was repeated three times. The resulting samples were lysed in the BioRanger at 95 °C for 5-10 min and samples were immediately cooled on ice. These samples served as DNA template for the LAMP reactions from live plant material. In addition, the quick DNA was extracted by boiling and centrifuging the samples as described earlier. The LAMP reaction mixture included: Isothermal enzyme mix (15 ul OptiGene)

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

สำหรับการทดสอบ LAMP วัสดุจากพืชที่ติดเชื้อสด DNA ของแบคทีเรีย และการเจือจางแบคทีเรียแบบอนุกรมตามที่อธิบายไว้ข้างต้น ถูกนำมาใช้ในการวินิจฉัย แบคทีเรียที่ไหลซึมยังถูกใช้จากวัสดุที่ติดเชื้อในเรือนกระจกโดยการเจือจางลงในน้ำ 25 ไมโครลิตร สำหรับการเตรียมตัวอย่างจากเนื้อเยื่อที่ติดเชื้อ ชั้นแคมเบียมจะถูกเปิดออก และถูปิเปตทิปปลอดเชื้อสามครั้งให้ทั่วพื้นผิวที่โซนเปลี่ยนผ่าน ทิปปิเปตถูกจุ่มลงในหลอดไมโครฟิวจ์ขนาด 200 ไมโครลิตรที่มีน้ำปลอดเชื้อ 25 ไมโครลิตร และกระบวนการถูกทำซ้ำสามครั้ง ตัวอย่างที่ได้จะถูกนำไปแช่ใน BioRanger ที่อุณหภูมิ 95 °C เป็นเวลา 5-10 นาที และตัวอย่างจะถูกทำให้เย็นลงทันทีบนน้ำแข็ง ตัวอย่างเหล่านี้ทำหน้าที่เป็นเทมเพลต DNA สำหรับปฏิกิริยา LAMP จากวัสดุพืชที่มีชีวิต นอกจากนี้ DNA ที่รวดเร็วยังถูกสกัดโดยการต้มและปั่นแยกตัวอย่างตามที่อธิบายไว้ข้างต้น ส่วนผสมของปฏิกิริยา LAMP ประกอบด้วย: ส่วนผสมของเอนไซม์ไอโซเทอร์มอล (15 ul OptiGene)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

สำหรับการตรวจหา LAMP การวินิจฉัยจะดำเนินการโดยใช้วัสดุจากพืชที่ติดเชื้อสดดีเอ็นเอของแบคทีเรียและสารเจือจางของแบคทีเรียดังที่อธิบายไว้ข้างต้น โคลนแบคทีเรียยังใช้จากวัสดุที่ติดเชื้อในเรือนกระจกโดยการเจือจางลงในน้ำ 25 ไมโครลิตร สำหรับการเตรียมตัวอย่างจากเนื้อเยื่อที่ติดเชื้อจะสัมผัสกับชั้นการก่อตัวและถูปลายปิเปตที่ผ่านการฆ่าเชื้อบนพื้นผิวของเขตการเปลี่ยนผ่านสามครั้ง ปลายปิเปตจุ่มลงในหลอดแรงเหวี่ยงขนาด 200 ไมโครลิตรที่มีน้ำหมัน 25 ลิตรและทำซ้ำขั้นตอนสามครั้ง สลายตัวอย่างใน BioRanger ที่อุณหภูมิ 95°C เป็นเวลา 5-10 นาที และทำให้ตัวอย่างเย็นลงบนน้ำแข็งทันที ตัวอย่างเหล่านี้ใช้เป็นแม่แบบดีเอ็นเอสำหรับปฏิกิริยา LAMP ของวัสดุพืชที่มีชีวิต นอกจากนี้ ยังสกัดดีเอ็นเออย่างรวดเร็วด้วยการต้มและแรงเหวี่ยงตัวอย่างตามที่ได้เสนอข่าวไปก่อนหน้านี้ ผสมปฏิกิริยา LAMP รวมถึง: ผสม isothermal (15ul OptiGene)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

สําหรับการวิเคราะห์LAMPวัสดุพืชที่ติดเชื้อใหม่ดีเอ็นเอของแบคทีเรียและชุดของสารเจือจางแบคทีเรียที่อธิบายไว้ข้างต้นจะใช้สําหรับการวินิจฉัย โดยการเจือจางลงในน้ํา 25 มิลลิลิตร โคลนอ่อนของแบคทีเรียจากวัสดุที่ติดเชื้อในเรือนกระจกยังใช้. เพื่อเตรียมตัวอย่างจากเนื้อเยื่อที่ติดเชื้อให้สัมผัสกับชั้นการก่อตัวปลายท่อระบายน้ําที่ปราศจากเชื้อจะถูกเสียดสีสามครั้งบนพื้นผิวของพื้นที่เปลี่ยนผ่าน ท่อระบายน้ําถูกแช่อยู่ในท่อแรงเหวี่ยงขนาด200ลิตรที่มีน้ําปลอดเชื้อ25มิลลิลิตรซึ่งทําซ้ําสามครั้ง ตัวอย่างที่ได้จากการแตกตัวที่95°Cเป็นเวลา5-10นาทีในไบโอเรนเจอร์และตัวอย่างถูกระบายความร้อนทันทีบนน้ําแข็ง ตัวอย่างเหล่านี้ทําหน้าที่เป็นแม่แบบดีเอ็นเอสําหรับปฏิกิริยาLAMPจากวัสดุพืชที่มีชีวิต นอกจากนี้ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ดีเอ็นเอที่รวดเร็วจะถูกสกัดโดยการต้มและหมักตัวอย่าง ส่วนผสมปฏิกิริยาLAMPประกอบด้วย:ส่วนผสมของไอโซเทอร์มอล( 15μl OptiGene )