fruit. Rab GTPase enzymes give rise

fruit. Rab GTPase enzymes give rise to this control by regulating
vesicle docking through action as a molecular switch [19]. It has
now been shown that there are many related clades of Rabs across
many species throughout nature and these regulate docking with
different parts of the endomembrane system [20e23]. In particular,
the plant RabA GTPase class is deserving of investigation. Plant
species possess an expanded RabA class compared with their
mammalian Rab11 counterparts. In Arabidopsis there are 57 individual
RAB genes of which 26 belong to the RABA class [22].
SlRab11a (formerly LeRab11a), which is orthologous to RABA1a in
Arabidopsis is associated with the TGN and dominant negative
versions of the SlRab11a gene showed inhibited exocytosis of
secreted GFP [24]. In addition, an antisense SlRab11a construct
reduced tomato fruit softening, producing firmer fruit in comparison
to the Ailsa Craig wild type (ACþþ) and reduced levels of
several cell wall modifying enzymes in the fruit [25]. However, as
well as enzymes, many other compounds are transported through
the TGN to the plasma membrane and the apoplast. Therefore, we
decided to analyse other possible components of the cell wall that
might have been affected by inhibition of Rab11 activity.
2. Results
2.1. Confirmation of G4 antisense homozygous lines
Wild type and G4 antisense lines [25] were grown from seed and
PCRwas undertaken to confirm the presence of the antisense Rab11a
construct in the fruit. The results are shown in Supplementary
Fig. S1. As a confirmation of the expression of the antisense
phenotype, fruit was harvested at fixed times during ripening and
firmness was assessed using texture analysis (Supplementary
Fig. S2). This confirmed the slow softening phenotype of the G4
line. Photographs of fruit at the 40 day post breaker stage further
confirm this phenotype (Supplementary Fig. S3). At this point the
ACþþ tomatoes had lost their smooth structure and had cracked
exocarps which accounts for the infection shown.
2.2. mRNA expression profiling of SlRab11a during fruit
development and ripening
The expression of SlRab11a has only previously been determined
during ripening and only by northern blot. We determined the
expression profile for SlRab11a in the wild type during both fruit
development and ripening using quantitative real-time PCR and
specific primers. Fig. 1 shows that the mRNA level was at its
maximum at 15 days-post-anthesis (15 dpa) which was the earliest

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ผลไม้ เอนไซม์ Rab GTPase ให้ขึ้นการควบคุมนี้ โดยควบคุมเวสิเคิลเทียบผ่านการดำเนินการเป็นสวิตช์โมเลกุล [19] มีตอนนี้ ได้แสดงว่า มี clades จำนวนมากที่เกี่ยวข้องของ Rabs ข้ามหลายชนิดธรรมชาติและเหล่านี้ควบคุมเทียบกับส่วนต่าง ๆ ของระบบ endomembrane [20e23] โดยเฉพาะโรงเรียน RabA GTPase สมควรสอบสวนได้ โรงงานชนิดมีคลา RabA การขยายเมื่อเทียบกับของพวกเขาmammalian Rab11 คู่กัน ใน Arabidopsis มีอยู่ 57ยีน RAB ที่ 26 อยู่ในคลาส RABA [22]SlRab11a (ชื่อเดิม LeRab11a), ซึ่งเป็น orthologous กับ RABA1a ในArabidopsis จะสัมพันธ์กับระดับจากและตัวลบรุ่นของยีน SlRab11a แสดงให้เห็นว่าห้าม exocytosis ของsecreted GFP [24] นอกจากนี้ มี antisense SlRab11a สร้างผลไม้มะเขือเทศนุ่มนวล ผลไม้แน่นมากขึ้นเท่าในการเปรียบเทียบการผลิตลดลงชนิดป่า Ailsa Craig (ACþþ) และลดระดับหลายเซลล์ผนังแก้ไขเอนไซม์ในผลไม้ [25] อย่างไรก็ตาม เป็นขนส่งรวมทั้งเอนไซม์ สารอื่น ๆ ผ่านระดับจากเยื่อพลาสมาและ apoplast ดังนั้น เราเลือกการวิเคราะห์ส่วนประกอบอื่น ๆ เป็นไปได้ของเซลล์ผนังที่อาจได้รับผลกระทบ โดยยับยั้งการกิจกรรม Rab112. ผลลัพธ์2.1 การยืนยันรายการ homozygous antisense G4ชนิดป่าและ G4 antisense บรรทัด [25] ได้เติบโตขึ้นจากเมล็ด และดำเนินการยืนยันสถานะของ antisense Rab11a PCRwasสร้างในผลไม้ ผลลัพธ์จะแสดงใน Supplementaryฟิก S1 เป็นการยืนยันของนิพจน์ของ antisense ที่phenotype ผลไม้เก็บเกี่ยวในเวลา ripening ถาวร และไอซ์ถูกประเมินโดยใช้การวิเคราะห์เนื้อสัมผัส (Supplementaryฟิก S2) นี้ยืนยัน phenotype softening ช้าของ G4บรรทัด ภาพถ่ายผลไม้วัน 40 ลงตัดขั้นต่อไปยืนยันนี้ phenotype (ฟิกเสริม S3) จุดนี้ACþþ มะเขือเทศมีโครงสร้างเรียบหายไป และมีแตกexocarps ซึ่งมีการติดเชื้อแสดง2.2. mRNA นิพจน์สร้างโพรไฟล์ SlRab11a ระหว่างผลไม้พัฒนาและ ripeningกำหนดค่าของ SlRab11a ก่อนหน้านี้เท่านั้นระหว่าง ripening และ โดยคืนในตาเหนือเท่านั้น เรากำหนดส่วนกำหนดค่านิพจน์สำหรับ SlRab11a ชนิดป่าระหว่างผลไม้ทั้งพัฒนาและ ripening ใช้ PCR จริงเชิงปริมาณ และไพรเมอร์เฉพาะ Fig. 1 แสดงว่า ระดับ mRNA ถูกที่ของมันสูงสุดที่ 15 วันไปรษณีย์-anthesis (15 dpa) ที่ถูกสุด

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ผลไม้ เอนไซม์ใน Rab GTPase ก่อให้เกิดการควบคุมนี้โดยการควบคุม
เชื่อมต่อตุ่มผ่านการกระทำเป็นสวิตช์โมเลกุล [19] มันได้
รับการแสดงให้เห็นว่ามี clades ที่เกี่ยวข้องหลาย Rabs ข้าม
สายพันธุ์จำนวนมากตลอดทั้งธรรมชาติและเหล่านี้ควบคุมการเชื่อมต่อกับ
ส่วนต่าง ๆ ของระบบ endomembrane [20e23] โดยเฉพาะอย่างยิ่ง
พืช Raba GTPase ชั้นสมควรของการสืบสวน พืช
สายพันธุ์ที่มีระดับ Raba ขยายตัวเมื่อเทียบกับของพวกเขา
counterparts Rab11 เลี้ยงลูกด้วยนม ใน Arabidopsis มี 57 บุคคล
ยีน RAB ที่ 26 อยู่ในระดับ RABA [22].
SlRab11a (ก่อน LeRab11a) ซึ่งเป็น orthologous เพื่อ RABA1a ใน
Arabidopsis มีความเกี่ยวข้องกับ TGN และลบที่โดดเด่น
รุ่นของยีน SlRab11a แสดงให้เห็น exocytosis ยับยั้งของ
หลั่ง GFP [24] นอกจากนี้ antisense SlRab11a สร้าง
ลดลงอ่อนผลไม้มะเขือเทศผลไม้ที่ผลิตกระชับในการเปรียบเทียบ
กับ Ailsa Craig ป่าประเภท (ACþþ) และลดระดับของ
เซลล์หลายผนังปรับเปลี่ยนเอนไซม์ในผลไม้ [25] อย่างไรก็ตามในขณะ
เดียวกับเอนไซม์สารประกอบอื่น ๆ อีกมากมายจะถูกส่งผ่าน
ไปยัง TGN เยื่อหุ้มและ apoplast ดังนั้นเราจึง
ตัดสินใจที่จะวิเคราะห์ส่วนประกอบที่เป็นไปได้อื่น ๆ ของผนังเซลล์ที่
อาจได้รับผลกระทบโดยการยับยั้งของกิจกรรม Rab11.
2 ผล
2.1 การยืนยันของเส้น homozygous antisense G4
ชนิดป่าและสาย antisense G4 [25] ได้รับการเจริญเติบโตจากเมล็ดและ
PCRwas ดำเนินการเพื่อยืนยันการปรากฏตัวของ Rab11a antisense
สร้างในผลไม้ ผลที่ได้แสดงในเสริม
รูป S1 การยืนยันของการแสดงออกของ antisense
ต้นผลไม้เก็บเกี่ยวในช่วงเวลาที่คงที่ระหว่างการสุกและ
ความแน่นได้รับการประเมินโดยใช้การวิเคราะห์พื้นผิว (เสริม
รูป. S2) นี้ได้รับการยืนยันฟีโนไทป์อ่อนช้าของ G4
สาย ภาพของผลไม้ในขั้นตอนโพสต์เบรกเกอร์ 40 วันต่อไป
นี้ยืนยันฟีโนไทป์ (เสริมรูป. S3) ณ จุดนี้
มะเขือเทศACþþได้สูญเสียโครงสร้างเรียบของพวกเขาและได้แตก
exocarps ที่บัญชีสำหรับการติดเชื้อที่แสดง.
2.2 mRNA โปรไฟล์การแสดงออกของ SlRab11a ในช่วงผลไม้
สุกพัฒนาและ
การแสดงออกของ SlRab11a มีเพียงก่อนหน้านี้ถูกกำหนด
ระหว่างการสุกและโดยเฉพาะภาคเหนือดวง เรากำหนด
รายละเอียดการแสดงออกสำหรับ SlRab11a ในป่าประเภทผลไม้ทั้งในช่วง
การพัฒนาและการทำให้สุกโดยใช้วิธี PCR เชิงปริมาณแบบ real-time และ
ไพรเมอร์ที่เฉพาะเจาะจง มะเดื่อ 1 แสดงให้เห็นว่าระดับ mRNA เป็นที่ดี
สูงสุดที่ 15 วัน-post-ดอกบาน (15 DPA) ซึ่งเป็นที่เก่าแก่ที่สุด

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ผลไม้ RAB จีทีพีเปสเอนไซม์ก่อให้เกิดการควบคุมโดยการควบคุม
เวสิเคิล docking ผ่านการกระทำเป็นสวิตช์โมเลกุล [ 19 ] มันมี
ตอนนี้ถูกแสดง มีหลายที่เกี่ยวข้อง clades ของ rabs ข้าม
หลายชนิดตลอดทั้งธรรมชาติและเหล่านี้ควบคุม Docking กับ
ส่วนต่างๆของระบบ [ endomembrane 20e23 ] โดย
พืช . จีทีพีเปสชั้นสมควรได้รับการตรวจสอบ พืช
ชนิดมีการขยายชั้นเรียนเมื่อเทียบกับ counterparts . rab11 ) ของตนเอง

ใน Arabidopsis มี 57 บุคคล
รับยีนซึ่งเป็นของชั้น 26 . [ 22 ] .
slrab11a ( เดิม lerab11a ) ซึ่งเป็น orthologous เพื่อ raba1a ใน
Arabidopsis เกี่ยวข้องกับ TGN และรุ่นลบ
เด่นของ slrab11a ยีนยับยั้งการหลั่งของ GFP แสดง nucleotide
[ 24 ] นอกจากนี้การสร้าง antisense slrab11a
ลดลงมะเขือเทศผลไม้อ่อน การผลิตผลไม้กระชับในการเปรียบเทียบกับ Ailsa Craig
ไพรม์ไทม์ ( AC þþ ) และลดระดับของ
ผนังเซลล์หลายเอนไซม์ดัดแปรผล [ 25 ] อย่างไรก็ตาม ขณะที่
รวมทั้งเอนไซม์ สารอื่น ๆอีกมากมาย ถูกขนส่งผ่าน
TGN ในเยื่อหุ้มเซลล์และแอโพพลาสต์ . ดังนั้นเราจึง
ตัดสินใจที่จะวิเคราะห์องค์ประกอบของผนังเซลล์ที่เป็นไปได้อื่น ๆที่อาจได้รับผลกระทบจาก
การยับยั้งกิจกรรม rab11 .
2 ผลลัพธ์
2.1 . การยืนยันของยีน antisense G4
ป่าประเภทสายและสาย antisense G4 [ 25 ] ปลูกจากเมล็ดและ
pcrwas ดำเนินการเพื่อยืนยันการปรากฏตัวของ antisense rab11a
สร้างในผลไม้ ผลลัพธ์ที่ได้จะแสดงในรูปเสริม
S1 .เป็นคำยืนยันของการแสดงออกของ antisense
+ ผลไม้เก็บเกี่ยวในเวลาในการแก้ไข และประเมินโดยการวิเคราะห์เนื้อแน่น
( S2
รูปเสริม ) นี้ยืนยันช้าอาศัยฟีโนไทป์ของบรรทัด g4

ภาพผลไม้ที่ 40 วันโพสต์แบ่งเวทีต่อไป
ยืนยัน ( เพิ่มเติมรูป + S3 ) ณจุดนี้
มะเขือเทศþþ AC ได้สูญเสียโครงสร้างเรียบ และแตก
exocarps ซึ่งบัญชีสำหรับการติดเชื้อที่แสดง
2.2 . การแสดงออกของ mRNA โปรไฟล์ของ slrab11a ในระหว่างการพัฒนาและการสุกผลไม้

การแสดงออกของ slrab11a ก่อนหน้านี้ได้เพียงว่า
ระหว่างการสุกและโดยเฉพาะภาคเหนือเปรอะเปื้อน . เรามุ่งมั่น
การแสดงออกโปรไฟล์สำหรับ slrab11a ในประเภทป่า ทั้งในระหว่างผลไม้
การพัฒนาและการใช้เทคนิคเชิงปริมาณแบบเรียลไทม์และ
ไพรเมอร์จำเพาะ รูปที่ 1 แสดงให้เห็นว่าระดับ mRNA ของตนได้สูงสุด 15 วัน หลังดอกบาน
ที่ 15 DPA ) ซึ่งเป็นที่สุด