2. Materials and methods2.1. Koji p

2. Materials and methods
2.1. Koji preparation
Soybean were soaked in water for 6-8 h then autoclaved at 121 °C for 40 min. Wheat bran was roasted to
dark brown and cracked then 32% of total wheat bran was ground to powder and mixed with culture before
spreading to raw material to ensure through mixing of raw material. Different combinations of soybean and
wheat bran (40%:60%, 50%:50%, and 60%:40% w/w) inoculated with 0.1% of culture spore were used as
substrates for koji fermentation and incubated at 30°C for 72 h. Spores of A. oryzae S. NPUST-FS-206-A1 in
2 inoculum sizes (0.1% and 0.3% w/w) were inoculated into the raw material.
2.2. Enzyme extraction
To extract the enzyme, the fermented matter was mixed with 0.1 M phosphate buffer (pH 6.9) (1:2 w/v) by
a shaking incubator (150 rpm, 30 °C, 30 min). After centrifugation at 10,000 xg, 4 °C for 15 min, the
supernatant was collected as crude enzyme extract.
2.3. Analytical methods
The moisture content of a fermented sample was determined by an infrared moisture determination balance
(FD-720, Kett Electric Laboratory, Tokyo, Japan). The fermented matter was mixed with deionized water (1:2
w/v) and measured the pH value by a pH meter (DKK-TOA, HM-25G, Japan). Neutral and alkaline protease
activity were determined using 0.65% casein solution in 0.05 M phosphate buffer (pH 6.9) and 0.05 M
carbonate buffer (pH 10) as substrate, respectively. One unit of enzyme activity was defined as the amount of
enzyme that liberated 1μg of tyrosine per minute under assay conditions [7].
Amylase activity was measured with 1.0% soluble starch in 0.1 M sodium acetate buffer (pH 5.0). One
unit of enzyme activity was defined as the amount of enzyme that released 1 mM of reducing sugar as maltose
per minute under the assay conditions [5]. Reducing sugar content was determined by 3, 5-dinitrosalicylic
acid method [8]. All samples were analyzed in triplicate.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2. วัสดุและวิธีการ
2.1 เตรียมจิ
ถั่วเหลืองถูกนำไปแช่ในน้ำ 6-8 h แล้ว autoclaved ที่ 121 ° C สำหรับ 40 นาทีโป่งถูกย่างไป
สีดำสีน้ำตาล และรอยร้าวแล้ว 32% ของรำข้าวสาลีรวมถูกพื้นดินผง และผสมกับวัฒนธรรมก่อน
สู่วัตถุดิบที่ผ่านการผสมของวัตถุดิบให้ ชุดของถั่วเหลือง และ
รำข้าวสาลี (40%:60%, 50%:50% และ 60%:40% w/w) inoculated ด้วย 0.1% ของสปอร์วัฒนธรรมที่เคยเป็น
พื้นผิวสำหรับหมักจิ และ incubated ที่ 30 ° C สำหรับ 72 h. เพาะเฟิร์น A. แห้งระดับต่าง ๆ S. NPUST-FS-206-A1 ใน
2 ขนาด inoculum (0.1% และ 0.3% w/w) มี inoculated เป็นวัตถุดิบ
2.2 เอนไซม์สกัด
แยกเอนไซม์นี้ เรื่องร้าถูกผสมกับ 0.1 M ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 6.9) (1:2 w/v) โดย
บ่มเพาะวิสาหกิจงก ๆ (150 รอบต่อนาที 30 ° C, 30 นาที) หลังจาก centrifugation ที่ 10000 xg, 4 ° C สำหรับ 15 นาที
supernatant ถูกรวบรวมเป็นสารสกัดเอนไซม์ดิบ.
2.3 วิธีวิเคราะห์
ชื้นของตัวอย่างร้าถูกกำหนด โดยดุลกำหนดความชื้นอินฟราเรด
(FD-720, Kett ห้องปฏิบัติการไฟฟ้า โตเกียว ญี่ปุ่น) เรื่องหมักที่ผสม ด้วยน้ำ deionized (1:2
w/v) วัดค่า pH เครื่องวัดค่า pH (DKK-โตอะ HM - 25 G ญี่ปุ่น) เป็นกลางและด่างรติเอส
กิจกรรมถูกกำหนดใช้โซลูชันเคซีน 0.65% ใน 0.05 M ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 6.9) และ 0.05 M
carbonate บัฟเฟอร์ (pH 10) เป็นพื้นผิว ตามลำดับ หน่วยหนึ่งของเอนไซม์ถูกกำหนดเป็นจำนวน
เอนไซม์ที่ liberated 1μg ของ tyrosine ต่อนาทีภายใต้การทดสอบเงื่อนไข [7]
กิจกรรม amylase ถูกวัด ด้วยแป้งละลาย 1.0% ใน 0.1 M โซเดียม acetate บัฟเฟอร์ (pH 5.0) หนึ่ง
หน่วยของเอนไซม์ถูกกำหนดเป็นจำนวนเอนไซม์ที่ปล่อยออกมา 1 มม.ลดน้ำตาล maltose เป็น
ต่อนาทีภายใต้เงื่อนไขการทดสอบ [5] ลดน้ำตาลเนื้อหาถูกกำหนด โดย 3, 5-dinitrosalicylic
วิธีกรด [8] มีวิเคราะห์ตัวอย่างทั้งหมดใน triplicate

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2. วัสดุและวิธีการ
2.1 เตรียมโคจิ
ถั่วเหลืองถูกแช่ในน้ำเป็นเวลา 6-8 ชั่วโมงจากนั้นเบาที่ 121 ° C เป็นเวลา 40 นาที รำข้าวสาลีได้รับการคั่วไป
สีน้ำตาลเข้มและแตกแล้ว 32% ของรำข้าวสาลีรวมเป็นพื้นดินเป็นผงและผสมกับวัฒนธรรมก่อนที่จะ
แพร่กระจายไปเป็นวัตถุดิบเพื่อให้แน่ใจว่าผ่านการผสมของวัตถุดิบ ชุดที่แตกต่างกันของถั่วเหลืองและ
รำข้าวสาลี (40%: 60%, 50%: 50%, 60% และ 40% w / w) เชื้อด้วย 0.1% ของวัฒนธรรมสปอร์ถูกนำมาใช้เป็น
สารตั้งต้นในการหมักโคจิและบ่มที่ 30 ° C 72 ชั่วโมง สปอร์ของ A. oryzae เอ NPUST-FS-206-A1 ใน
2 ขนาดคือเชื้อ (0.1% และ 0.3% w / w) มีเชื้อเป็นวัตถุดิบ
2.2 การสกัดเอนไซม์
เพื่อแยกเอนไซม์เรื่องหมักผสมกับ 0.1 M ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 6.9) (1:02 w / v) โดย
ศูนย์บ่มเพาะการสั่น (150 รอบต่อนาทีที่ 30 ° C, 30 นาที) หลังจากการหมุนเหวี่ยงที่ 10,000 xg เป็น 4 ° C เป็นเวลา 15 นาที,
ใสถูกเก็บรวบรวมเป็นเอนไซม์สกัดหยาบ
2.3 วิธีการวิเคราะห์
ปริมาณความชื้นของตัวอย่างหมักถูกกำหนดโดยความชื้นอินฟราเรดการกำหนดความสมดุล
(FD-720, Kett ห้องปฏิบัติการไฟฟ้า, โตเกียว, ญี่ปุ่น) เรื่องหมักผสมกับน้ำกลั่นปราศจากไอออน (1:02
w / v) และวัดค่าพีเอชเมตรโดยพีเอช (DKK-TOA, HM-25G, ญี่ปุ่น) น้ำย่อยที่เป็นกลางและด่าง
กิจกรรมได้รับการพิจารณาใช้วิธีเคซีน 0.65% ใน 0.05 M ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 6.9) และ 0.05 M
บัฟเฟอร์คาร์บอเนต (pH 10) เป็นสารตั้งต้นตามลำดับ หน่วยหนึ่งของกิจกรรมของเอนไซม์ถูกกำหนดเป็นปริมาณของ
เอนไซม์ที่มีอิสรเสรี1μgของซายน์ต่อนาทีภายใต้เงื่อนไขการทดสอบ [7]
กิจกรรมอะไมเลสเป็นวัดที่มี 1.0% แป้งละลายในบัฟเฟอร์ 0.1 M โซเดียมอะซิเตท (pH 5.0) หนึ่ง
หน่วยของเอนไซม์ถูกกำหนดเป็นปริมาณของเอนไซม์ที่ปล่อยออกมา 1 มิลลิของการลดน้ำตาลมอลโตสเป็น
ต่อนาทีภายใต้เงื่อนไขการทดสอบได้ [5] การลดปริมาณน้ำตาลถูกกำหนดโดย 3, 5-dinitrosalicylic
วิธีกรด [8] ตัวอย่างทั้งหมดถูกวิเคราะห์ในเพิ่มขึ้นสามเท่า

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2 . วัสดุและวิธีการ
2.1 . ถั่วเหลือง
โคจิการเตรียมชุ่มน้ำ 6-8 H แล้วสังเคราะห์ที่ 121 ° C เป็นเวลา 40 นาที รําข้าวสาลี คือย่าง

สีน้ำตาลเข้ม และรอยร้าวแล้ว 32% ของรำข้าวสาลี รวมกับผงและดินผสมกับวัฒนธรรมก่อน
กระจายวัตถุดิบ เพื่อให้ผ่านการผสมของวัตถุดิบ ชุดค่าผสมที่แตกต่างกันของถั่วเหลืองและรำข้าวสาลี
( 40 : 60 % , 50% : 50% และ 60% :40 % w / w ) ใส่ 0.1% ของสปอร์วัฒนธรรมใช้เป็นโคจิการหมักและบ่ม
จำนวน 30 ° C เป็นเวลา 72 ชั่วโมง สปอร์ของ A . oryzae . npust-fs-206-a1 ใน
2 ขนาด 3 ( 0.1% และ 0.3 % w / w ) เป็นเชื้อวัตถุดิบ .
2.2 .
การสกัดเอนไซม์สกัดเอนไซม์ที่หมักขึ้นผสมกับ 0.1 M phosphate buffer pH 6.9 ) ( 1 : 2 w / v ) โดยการเขย่าเครื่องฟักไข่ ( 150 รอบต่อนาที30 องศา C 30 นาที ) หลังการปั่นเหวี่ยงที่ 10000 XG 4 ° C เป็นเวลา 15 นาที ,
น่านรวบรวมเป็นเอนไซม์ที่สกัด
2.3 วิธีการวิเคราะห์
ความชื้นของตัวอย่างที่ถูกกำหนดโดยหมักอินฟราเรดความชื้นการหาสมดุล
( fd-720 เขตไฟฟ้า , ห้องปฏิบัติการ , โตเกียว , ญี่ปุ่น ) เรื่องหมักผสมกับน้ำ 1 : 2
( คล้ายเนื้อเยื่อประสานw / v ) และวัดค่า pH ด้วย pH meter ( dkk-toa hm-25g , ญี่ปุ่น ) ความเป็นกลางและด่าง กิจกรรมเอนไซม์โปรติเอส
ตัดสินใจใช้แก้ปัญหาเคซีน 0.65 % ใน 0.05 M ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 6.9 ) และ 0.05 M
คาร์บอเนตบัฟเฟอร์ pH 10 ) เป็นสับสเตรท ตามลำดับ หนึ่งหน่วยของเอนไซม์ถูกกำหนดเป็นปริมาณของเอนไซม์ที่เป็นμ G
1 แต่อย่างใดต่อนาทีภายใต้เงื่อนไข [ 7 ]
( . . .กิจกรรมเอนไซม์อะไมเลสคือวัดที่มี 1.0% ละลายแป้งใน 0.1 โมลาร์โซเดียมอะซิเตตบัฟเฟอร์ pH 5.0 ) หนึ่งหน่วยของกิจกรรมเอนไซม์
หมายถึงปริมาณของเอนไซม์ที่ปล่อยออกมา 1 มิล ลดน้ำตาลมอลโตส
ต่อนาทีภายใต้เงื่อนไขการทดสอบ [ 5 ] ปริมาณน้ำตาลรีดิวซ์ถูกกำหนดจาก 3 , 5-dinitrosalicylic
วิธีกรด [ 8 ] กลุ่มตัวอย่างทั้งหมด วิเคราะห์ข้อมูลทั้งสามใบ