2.4. Analytical determinationsGluco

2.4. Analytical determinations
Glucose, fructose, acetic acid and ethanol were determined by enzymatic kits following the manufacturer's instructions (BioSenTec, France). Total acidity was determined by potentiometric method on decarbonated wine and then titrated by NaOH 0.1 N solution to pH 7. The result is expressed in g l−1 H2SO4.

Volatile aroma compounds were analysed with the Stir Bar Sorptive Extraction Liquid Desorption method (SBSE-LD) (Coelho et al., 2009) adapted to our laboratory conditions. Each wine sample (20 ml) was spiked with 2 mg l−1 of 3-octanol and ethyl heptanoate (Fluka) as internal standard. The analyses were performed with an Agilent 6890N gas chromatograph equipped with an Agilent 7683 automatic liquid sampler coupled to an Agilent 5975B inert MSD (Agilent Technologies), 1 μl of solvent was injected. The gas chromatograph was fitted with a DB-Wax capillary column (60 m × 0.32 mm i.d. × 0.50 μm film thickness, J&W Scientific) and helium was used as carrier gas (1 ml min−1 constant flow). The GC oven temperature was programmed without initial hold time at a rate of 2.7 °C min−1 from 70 °C to 235 °C (hold 10 min). The injector was set to 250 °C and used in pulsed splitless mode (25 psi for 0.50 min). The temperatures of the interface, MS ion source and quadrupole were 270 °C, 230 °C and 150 °C, respectively. The Mass spectrometer was operated in electron impact ionisation mode (EI, 70 eV). The MS analyses were performed in full scan mode (TIC mode) with a scan range of 29–300 amu. Agilent MSD ChemStation software (G1701DA, Rev D.03.00) was used for instrument control and data processing. Identification of the compounds was performed using the NIST 05 mass spectral database, retention indices (RIs) reported in the literature (Tao and Zhang, 2010) and authentic standards (Fluka). For semi-quantification purposes, the relative peak areas of the 44 analytes were divided by the relative peak area of the 3-octanol (for alcohol, aldehyde and terpenol compounds) and by the relative peak area of the ethyl heptanoate for the other compounds, then multiplied by 2000 (data are given in μg l−1 relative to internal standard).

The thiol analysis was performed using the method reported by Rodríguez-Bencomo et al. (2009). Deuterated internal standards (3 MH d2, 500 ng l−1; 3MHA d5, 50 ng l−1; 4MMP d10, 20 ng l−1) were added to each wine sample (100 ml). Then EDTA (250 mg), cystein (158 mg) and o-methylhydroxylamine (100 mg) were added. The flask was purged with nitrogen and heated at 50 °C for 45 min. After cooling, pH was adjusted to 7 with an NaOH solution, and the thiols were extracted using a C18 cartridge (500 mg Bond Elut-ENV, Varian), previously conditioned with 5 ml methylene chloride, 5 ml methanol and 5 ml water. After the sample elution, various solution were passed through the cartridge: 20 ml phosphate buffer (0.2 M in 40% methanol solution), 5 ml distilled water, 5 ml 1,8-Diazabicyclo-[5,4,0]-undec-7-ene (DBU, 6.7% in water), 1 ml 2,3,4,5,6-Pentaflurobenzylbromide (PFBBr, 200 mg l−1 in hexane) wich was allowed to react for 20 min, 1 ml mercaptogycerol solution (400 mg l−1 in DBU solution (6.7%), 20 min) and 5 ml water. The derivatised thiols were finally eluted using a mixture of hexane/diethyl ether (4 mL, 1/3 v/v). The extract was washed with a NaCl solution (5 × 1 ml, 200 g l−1), dried over anhydrous sodium sulphate, and concentrated to dryness under nitrogen flow. The analysis was performed by SPME using a Divinylbenzene/carboxen/PDMS fibre (2 cm, Supelco). The analytes were trapped on the fibre at 110 °C for 30 min and then thermically desorbed into the GC–MS injector at 270 °C for 10 min (splitless mode). The GC was equipped with an Optima-Wax capillary column (30 m × 0.25 mm × 0, 25 μm, Macherey–Nagel), programmed as follows : isotherm at 80 °C for 10 min, increase to 220 °C at 5 °C min−1, increase to 245 °C at 15 °C min−1 and isotherm at 245 °C for 15 min. Detection was performed by negative chemical ionisation using methane and Single Ion Monitoring.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.4 การวิเคราะห์ determinationsกลูโคส ฟรักโทส กรดอะซิติก และเอทานอลถูกกำหนด โดยเอนไซม์ในระบบชุดตามคำแนะนำของผู้ผลิต (BioSenTec ฝรั่งเศส) ว่าถูกกำหนด โดยวิธี potentiometric decarbonated ไวน์แล้ว titrated ด้วย NaOH 0.1 N โซลูชันการค่า pH 7 ผลลัพธ์จะแสดงใน g l−1 กำมะถันVolatile aroma compounds were analysed with the Stir Bar Sorptive Extraction Liquid Desorption method (SBSE-LD) (Coelho et al., 2009) adapted to our laboratory conditions. Each wine sample (20 ml) was spiked with 2 mg l−1 of 3-octanol and ethyl heptanoate (Fluka) as internal standard. The analyses were performed with an Agilent 6890N gas chromatograph equipped with an Agilent 7683 automatic liquid sampler coupled to an Agilent 5975B inert MSD (Agilent Technologies), 1 μl of solvent was injected. The gas chromatograph was fitted with a DB-Wax capillary column (60 m × 0.32 mm i.d. × 0.50 μm film thickness, J&W Scientific) and helium was used as carrier gas (1 ml min−1 constant flow). The GC oven temperature was programmed without initial hold time at a rate of 2.7 °C min−1 from 70 °C to 235 °C (hold 10 min). The injector was set to 250 °C and used in pulsed splitless mode (25 psi for 0.50 min). The temperatures of the interface, MS ion source and quadrupole were 270 °C, 230 °C and 150 °C, respectively. The Mass spectrometer was operated in electron impact ionisation mode (EI, 70 eV). The MS analyses were performed in full scan mode (TIC mode) with a scan range of 29–300 amu. Agilent MSD ChemStation software (G1701DA, Rev D.03.00) was used for instrument control and data processing. Identification of the compounds was performed using the NIST 05 mass spectral database, retention indices (RIs) reported in the literature (Tao and Zhang, 2010) and authentic standards (Fluka). For semi-quantification purposes, the relative peak areas of the 44 analytes were divided by the relative peak area of the 3-octanol (for alcohol, aldehyde and terpenol compounds) and by the relative peak area of the ethyl heptanoate for the other compounds, then multiplied by 2000 (data are given in μg l−1 relative to internal standard).The thiol analysis was performed using the method reported by Rodríguez-Bencomo et al. (2009). Deuterated internal standards (3 MH d2, 500 ng l−1; 3MHA d5, 50 ng l−1; 4MMP d10, 20 ng l−1) were added to each wine sample (100 ml). Then EDTA (250 mg), cystein (158 mg) and o-methylhydroxylamine (100 mg) were added. The flask was purged with nitrogen and heated at 50 °C for 45 min. After cooling, pH was adjusted to 7 with an NaOH solution, and the thiols were extracted using a C18 cartridge (500 mg Bond Elut-ENV, Varian), previously conditioned with 5 ml methylene chloride, 5 ml methanol and 5 ml water. After the sample elution, various solution were passed through the cartridge: 20 ml phosphate buffer (0.2 M in 40% methanol solution), 5 ml distilled water, 5 ml 1,8-Diazabicyclo-[5,4,0]-undec-7-ene (DBU, 6.7% in water), 1 ml 2,3,4,5,6-Pentaflurobenzylbromide (PFBBr, 200 mg l−1 in hexane) wich was allowed to react for 20 min, 1 ml mercaptogycerol solution (400 mg l−1 in DBU solution (6.7%), 20 min) and 5 ml water. The derivatised thiols were finally eluted using a mixture of hexane/diethyl ether (4 mL, 1/3 v/v). The extract was washed with a NaCl solution (5 × 1 ml, 200 g l−1), dried over anhydrous sodium sulphate, and concentrated to dryness under nitrogen flow. The analysis was performed by SPME using a Divinylbenzene/carboxen/PDMS fibre (2 cm, Supelco). The analytes were trapped on the fibre at 110 °C for 30 min and then thermically desorbed into the GC–MS injector at 270 °C for 10 min (splitless mode). The GC was equipped with an Optima-Wax capillary column (30 m × 0.25 mm × 0, 25 μm, Macherey–Nagel), programmed as follows : isotherm at 80 °C for 10 min, increase to 220 °C at 5 °C min−1, increase to 245 °C at 15 °C min−1 and isotherm at 245 °C for 15 min. Detection was performed by negative chemical ionisation using methane and Single Ion Monitoring.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.4 การตรวจวัดวิเคราะห์
กลูโคสฟรุกโตส, กรดอะซิติกและเอทานอลได้รับการพิจารณาโดยชุดของเอนไซม์ทำตามคำแนะนำของผู้ผลิต (BioSenTec, ฝรั่งเศส) ความเป็นกรดทั้งหมดถูกกำหนดโดยวิธีโพเทนชิไวน์ decarbonated และปรับขนาดแล้วโดย NaOH 0.1 ยังไม่มีวิธีการแก้ค่า pH 7. ผลจะแสดงใน GL-1 H2SO4. สารหอมระเหยที่ได้มาวิเคราะห์กับบาร์ผัด Sorptive สกัดของเหลววิธีการปลดปล่อย (SBSE-LD ) (Coelho et al., 2009) การปรับตัวให้เข้ากับสภาพห้องปฏิบัติการของเรา ตัวอย่างไวน์แต่ละ (20 มล.) ได้รับการถูกแทงด้วย 2 มิลลิกรัมต่อลิตร-1 จาก 3 อลและเอทิล heptanoate (Fluka) เป็นมาตรฐานภายใน วิเคราะห์ได้ดำเนินการกับก๊าซ Chromatograph Agilent 6890N พร้อมกับ Agilent 7683 ตัวอย่างของเหลวอัตโนมัติคู่กับ Agilent 5975B เฉื่อยเอ็มเอส (Agilent Technologies) 1 ไมโครลิตรของตัวทำละลายที่ถูกฉีด ก๊าซ Chromatograph ก็พอดีกับคอลัมน์ฝอย DB-Wax (60 เมตร× 0.32 มม id × 0.50 ไมโครเมตรความหนาของฟิล์ม, J & W วิทยาศาสตร์) และฮีเลียมที่ใช้เป็นก๊าซ (1 มลนาที 1 ไหลคงที่) GC อุณหภูมิเตาอบเป็นโปรแกรมโดยไม่ต้องถือเวลาเริ่มต้นในอัตรา 2.7 ° C-1 นาทีจาก 70 ° C ถึง 235 ° C (กดค้างไว้ 10 นาที) หัวฉีดถูกกำหนดถึง 250 องศาเซลเซียสและใช้ในโหมด Splitless ชีพจร (25 ปอนด์ต่อตารางนิ้ว 0.50 นาที) อุณหภูมิของอินเตอร์เฟซ, MS แหล่งกำเนิดไอออนและ quadrupole เป็น 270 ° C, 230 ° C และ 150 ° C ตามลำดับ สเปกโตรมิเตอร์มวลได้รับการดำเนินการในอิเล็กตรอนผลกระทบโหมด Ionisation (EI, 70 eV) MS วิเคราะห์ได้ดำเนินการในโหมดการสแกนเต็มรูปแบบ (โหมด TIC) กับช่วงสแกน 29-300 มวลอะตอม ซอฟแวร์เอ็มเอส Agilent ChemStation (G1701DA เรฟ D.03.00) ถูกนำมาใช้สำหรับการควบคุมเครื่องมือและการประมวลผลข้อมูล บัตรประจำตัวของสารประกอบที่ได้รับการดำเนินการโดยใช้ NIST 05 ฐานข้อมูลสเปกตรัมมวลดัชนีการเก็บรักษา (RIS) รายงานในวรรณคดี (เต่าและ Zhang, 2010) และมาตรฐานของแท้ (Fluka) สำหรับวัตถุประสงค์กึ่งปริมาณพื้นที่สูงสุดญาติของ 44 วิเคราะห์ถูกแบ่งออกจากพื้นที่ยอดญาติของ 3 อล (สำหรับเครื่องดื่มแอลกอฮอล์ลดีไฮด์และสารประกอบ terpenol) และพื้นที่สูงสุดญาติของ heptanoate เอทิลสำหรับสารประกอบอื่น ๆ แล้วคูณด้วย 2000 (ข้อมูลที่จะได้รับในไมโครกรัมต่อลิตร-1 เมื่อเทียบกับมาตรฐานภายใน). การวิเคราะห์ thiol ถูกดำเนินการโดยใช้วิธีการรายงานโดยRodríguez-Bencomo และคณะ (2009) มาตรฐานภายในดิวทีเรียม (3 MH d2 500 ศึกษา L-1; 3MHA d5, 50 ng L-1; 4MMP D10, 20 ศึกษา L-1) ถูกเพิ่มเข้าไปในแต่ละตัวอย่างไวน์ (100 มล.) EDTA แล้ว (250 มิลลิกรัม) cystein (158 มิลลิกรัม) และ o-methylhydroxylamine (100 มก.) มีการเพิ่ม กระติกน้ำที่ได้รับการชำระด้วยไนโตรเจนและความร้อนที่ 50 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 45 นาที หลังจากที่เย็นพีเอชได้รับการปรับให้ 7 กับการแก้ปัญหา NaOH และ thiols ถูกสกัดโดยใช้ตลับหมึก C18 (500 มก. บอนด์ Elut-ENV, Varian) ปรับอากาศก่อนหน้านี้กับ 5 ml เมทิลีนคลอไรด์, 5 ml เมทานอลและ 5 ml น้ำ หลังจากชะตัวอย่างการแก้ปัญหาต่าง ๆ ผ่านตลับหมึก: 20 มลฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (0.2 M ใน 40% วิธีการแก้ปัญหาเมทานอล), 5 ml น้ำกลั่น 5 ml 1,8-Diazabicyclo- [5,4,0] -undec- 7-ene (DBU 6.7% ในน้ำ), 1 มิลลิลิตร 2,3,4,5,6-Pentaflurobenzylbromide (PFBBr 200 มิลลิกรัมต่อลิตร-1 ในเฮกเซน) ชได้รับอนุญาตให้ตอบสนองเป็นเวลา 20 นาที, 1 มิลลิลิตร mercaptogycerol ( 400 มิลลิกรัมต่อลิตร-1 ในการแก้ปัญหา DBU (6.7%), 20 นาที) และ 5 ml น้ำ thiols derivatised ถูกชะที่สุดโดยใช้ส่วนผสมของเฮกเซน / อีเทอร์ (4 มิลลิลิตร 1/3 v / v) สารสกัดถูกล้างด้วยสารละลายโซเดียมคลอไรด์ (5 × 1 มิลลิลิตร 200 GL-1), แห้งกว่าโซเดียมซัลเฟตปราศจากและความเข้มข้นที่จะแห้งกร้านภายใต้การไหลของไนโตรเจน การวิเคราะห์ที่ได้รับการดำเนินการโดย SPME ใช้ divinylbenzene / carboxen / PDMS ใย (2 ซม., Supelco) วิเคราะห์ถูกขังอยู่ในเส้นใยที่ 110 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 นาทีแล้วหลุดออก thermically เป็นหัวฉีด GC-MS ที่ 270 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 10 นาที (โหมด Splitless) GC พร้อมกับคอลัมน์ฝอย Optima ขี้ผึ้ง (30 เมตร× 0.25 มม× 0, 25 ไมโครเมตร Macherey-แจคกี้), โปรแกรมดังนี้ isotherm ที่ 80 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 10 นาทีเพิ่มขึ้นถึง 220 ° C ที่ 5 องศาเซลเซียส นาที-1 เพิ่มขึ้นถึง 245 ° C ที่ 15 ° C นาทีที่ 1 และไอโซเทอมที่ 245 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 15 นาที การตรวจสอบได้ดำเนินการโดย Ionisation เคมีเชิงลบโดยใช้ก๊าซมีเทนและเดี่ยวไอออนตรวจสอบ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.4 . วิเคราะห์หา
กลูโคส ฟรุกโตส กรดและเอทานอลถูกกำหนดโดยใช้เอนไซม์ชนิดติดตั้งอิสระตามคําแนะนําของผู้ผลิต ( biosentec , ฝรั่งเศส ) ปริมาณกรดทั้งหมดถูกกำหนดโดยวิธีวิธีที่ decarbonated ไวน์แล้ว 0.1 N NaOH ตลอดเวลา โดยให้มีพีเอช 7 ผลจะแสดงใน G L − 1 กรดซัลฟิวริก .

หอมระเหยสารวิเคราะห์กับผัดบาร์ sorptive คายของเหลววิธีสกัด ( sbse-ld ) ( Coelho et al . , 2009 ) ปรับให้เข้ากับเงื่อนไขปฏิบัติการของเรา แต่ละไวน์ตัวอย่าง ( 20 มล. ) ถูกด้วย 2 mg L − 1 3-octanol และเอทิล heptanoate ( fluka ) เป็นมาตรฐานภายในวิเคราะห์ได้ด้วยแก๊สโครมาโตกราฟ 6890n Agilent พร้อมกับ Agilent 7683 ของเหลวอัตโนมัติตัวอย่างคู่กับเลนต์ 5975b แบบอัตโนมัติ ( ด้านเทคโนโลยี ) , 1 μชั้นของตัวทำละลายคือฉีด แก๊สโครมาโตกราฟติดตั้ง DB ขี้ผึ้งหลอดเลือดฝอยคอลัมน์ ( 60 m × 0.32 มม. บัตร× 0.50 μ M ฟิล์มหนาเจ& W ทางวิทยาศาสตร์ ) และฮีเลียมถูกใช้เป็นแก๊สตัวพา ( 1 มิลลิลิตรต่อนาที− 1 การไหลคงที่ ) GC เตาอบอุณหภูมิโปรแกรมโดยไม่มีเวลาค้างเริ่มต้นในอัตรา 2.7% ° C มิน− 1 จาก 70 องศา C ถึง 235 / C ( ค้างไว้ 10 นาที ) หัวฉีดตั้งไว้ที่ 250 องศา C และใช้ในโหมดการ splitless ( 25 psi สำหรับ 0.50 min ) อุณหภูมิของอินเตอร์เฟซ MS รายละเอียดที่มาและคำเป็น 270 ° C 230 องศา C และ 150 องศา Cตามลำดับ ดำเนินการในสเปกโตรมิเตอร์มวลอิเล็กตรอนโหมดผลกระทบ ionisation ( EI 70 eV ) คุณวิเคราะห์ได้เต็มสแกนโหมด ( โหมด TIC ) ด้วยการสแกนช่วง 29 – 300 อามุ . ด้านซอฟต์แวร์อัตโนมัติ chemstation ( g1701da หลวงพ่อ d.03.00 ) ใช้สำหรับควบคุมอุปกรณ์ และการประมวลผลข้อมูล การจำแนกสารประกอบการใช้มวลสเปกตรัม NIST 05 ฐานข้อมูลดัชนีความคงทน ( RIS ) รายงานในวรรณคดี ( เต๋า และจาง , 2010 ) และมาตรฐานของแท้ ( fluka ) สำหรับกึ่งปริมาณสัมพัทธ์สูงสุดมีพื้นที่ 44 สารแบ่งโดยสัมพัทธ์สูงสุด พื้นที่ของ 3-octanol ( แอลกอฮอล์ , สารประกอบอัลดีไฮด์ และ terpenol ) และโดยสัมพัทธ์สูงสุด พื้นที่ของการ heptanoate สำหรับสารประกอบอื่น ๆแล้วคูณด้วย 2 , 000 ( ข้อมูลจะได้รับในμ G L − 1 เทียบกับมาตรฐานภายใน ) .

ขนาดทำการวิเคราะห์โดยใช้วิธีรายงานโดยลุยส์โรดรีเกซ มาร์ติน bencomo et al . ( 2009 ) มาตรฐานภายใน deuterated ( 3 MH D2 , 500 ng L − 1 ; 3mha D5 , 50 ng L − 1 ; 4mmp D10 20 ng L − 1 ) ถูกเพิ่มไปยังแต่ละไวน์ตัวอย่าง ( 100 ml ) จากนั้น EDTA ( 250 มิลลิกรัม )ซีสเทอีน ( 158 มิลลิกรัม ) และ o-methylhydroxylamine ( 100 มก. ) มีการเพิ่ม ขวดเหล้าถูกล้างด้วยไนโตรเจนและอุณหภูมิ 50 องศา C 45 นาที หลังจากการปรับ pH เป็น 7 ด้วยสารละลายโซเดียมไฮดรอกไซด์ และ thiols ถูกสกัดโดยใช้ c18 ตลับ ( 500 มิลลิกรัม บอนด์ elut Env เครื่องปรับอากาศ , ) ก่อนหน้านี้ 5 คลอไรด์เมทิลีนมิลลิลิตร ต่อน้ำ 5 มิลลิลิตร และ 5 . หลังจากใช้ตัวอย่าง ,โซลูชั่นต่าง ๆได้ผ่านตลับ : 20 ml ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ ( 0.2 M ในสารละลายเมทานอล 20% ) 5 มล. น้ำกลั่น , 5 ml 1,8-diazabicyclo - [ ] - 5,4,0 undec-7-ene ( ของ 6.7 % , น้ำ ) , 2,3,4,5,6-pentaflurobenzylbromide 1 ml ( pfbbr 200 mg L − 1 ในเฮกเซน ) ซึ่งจะได้รับอนุญาตให้ตอบโต้ 20 นาที mercaptogycerol โซลูชั่น 1 ml ( 400 mg L − 1 ในของสารละลาย ( 6.7% ) , 20 min ) และ 5 มิลลิลิตรต่อน้ำการ derivatised thiols ได้ในที่สุด ตัวอย่างการใช้ส่วนผสมของเฮกเซน / อีเทอร์ ( 4 + 1 / 3 v / v ) สารล้างด้วยสารละลายโซเดียมคลอไรด์ ( 5 × 200 g L − 1 มล. ) แห้งกว่าแอนไฮดรัสโซเดียมซัลเฟตและเข้มข้นแห้งภายใต้การไหลของแก๊สไนโตรเจน ผลจากการวิเคราะห์โดย spme โดยใช้ไดไวนิลเบนซีน / carboxen / โดยไฟเบอร์ ( 2 เซนติเมตร supelco )ส่วนกรณีถูกขังอยู่ในเส้นใยที่ 110 องศา C 30 นาทีจากนั้น thermically ศึกษาลงใน MS ที่ 270 องศาหัวฉีด GC ) นาน 10 นาที ( โหมด splitless ) GC เป็นอุปกรณ์ที่มี Optima ขี้ผึ้งหลอดเลือดฝอยคอลัมน์ ( 30 m × 0.25 มม. × 0 , 25 μ M , macherey –นาเกล ) , โปรแกรมดังนี้ ไอโซเทอมที่ 80 องศานาน 10 นาที เพิ่มเป็น 220 องศา C ที่ 5 ° C มิน− 1เพิ่มขึ้นถึง 245 ° C ที่ 15 ° C มิน− 1 และ 2 ที่ 245 ° C เป็นเวลา 15 นาที การตรวจสอบทำโดย ionisation เคมีลบโดยใช้ก๊าซมีเทนและการตรวจสอบไอออนเดี่ยว