A TaqMan probe real-time polymerase

A TaqMan probe real-time polymerase chain reaction assay was developed for the determination of pork adulteration in commercial burgers. The assay combined porcine-specific primers and TaqMan probe for the selective amplification and detection of a 109-bp fragment of swine cytochrome b (cytb) gene. Specificity test with 10 ng DNA of 11 different meat-providing animal and fish
species yielded a quantification cycle (Cq) of 15.5±0.20 for the pork and negative results for the others in a 40-cycle reaction with a change of analysts and sources. Analysis of beef burger formulations with spiked pork showed the assay can determine 100–0.01% contaminated pork with a
PCR efficiency (E) of 93.8% and a correlation coefficient (R2) of 0.991. A plot of actual value against real-time PCRpredicted value also yielded a good linear regression, R2 0.998, and small root mean square error of calibration, RMSEC 0.42. A strong correlation was found between the
partial least square (PLS)-predicted values and real-time PCR-determined values. The accuracy of the method was ≥90% in all determinations of the standard set. Residual analysis also revealed a high precision in all determinations. Finally, a random analysis of 10 ng DNA of commercial
burgers from pork, beef, chicken, mutton, and chevon yielded a Cq of 15.56±0.22 to 16.24±0.35 from pork burgers, and negative results from the others, showing the suitability of the assay to determine pork in commercial burgers with a high accuracy and precision.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

สอบสวน TaqMan เรียลไทม์ลูกโซ่โพลิเมอร์ทดสอบปฏิกิริยาได้รับการพัฒนาสำหรับการกำหนดเจือปนเบอร์เกอร์เนื้อหมูในเชิงพาณิชย์ การทดสอบรวมไพรเมอร์สุกรที่เฉพาะเจาะจงและสอบสวน TaqMan สำหรับการขยายการคัดเลือกและการตรวจสอบชิ้นส่วน 109 bp ของข cytochrome สุกร (cytb) ยีน การทดสอบความจำเพาะ 10 นาโนกรัมดีเอ็นเอ 11 เนื้อสัตว์ที่แตกต่างกันให้สัตว์และปลา
สายพันธุ์ที่ให้ผลรอบปริมาณ (Cq) 15.5 ± 0.20 เนื้อหมูและผลเชิงลบสำหรับคนอื่น ๆ ในการเกิดปฏิกิริยา 40 รอบกับการเปลี่ยนแปลงของนักวิเคราะห์และแหล่งที่มา การวิเคราะห์สูตรเบอร์เกอร์เนื้อหมูถูกแทงทดสอบแสดงให้เห็นว่าสามารถตรวจสอบ 100-0.01% เนื้อหมูปนเปื้อนด้วย
ประสิทธิภาพ PCR (E) ของ 93.8% และค่าสัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์ (R2) ของ 0.991 พล็อตของมูลค่าที่เกิดขึ้นจริงกับเรียลไทม์ที่มีมูลค่า PCRpredicted ยังให้ผลการถดถอยเชิงเส้นที่ดี R2 0.998 และรากขนาดเล็กหมายถึงข้อผิดพลาดที่สองของการสอบเทียบ RMSEC 0.42 ความสัมพันธ์ที่แข็งแกร่งระหว่างถูกพบ
อย่างน้อยบางส่วนตาราง (PLS) ค่า -predicted และเรียลไทม์ค่า PCR-กำหนด ความถูกต้องของวิธีการที่เป็น≥90% ในการพิจารณาทั้งหมดของชุดมาตรฐาน การวิเคราะห์ที่เหลือยังเผยให้เห็นความแม่นยำสูงในการหาความทั้งหมด ในที่สุดการวิเคราะห์แบบสุ่มของ 10 มณฑลของดีเอ็นเอในเชิงพาณิชย์
จากเบอร์เกอร์เนื้อหมู, เนื้อวัว, เนื้อไก่, เนื้อแกะและ chevon ผลของ Cq 15.56 ± 0.22-16.24 ± 0.35 จากเบอร์เกอร์หมูและผลลบจากคนอื่น ๆ แสดงให้เห็นถึงความเหมาะสมของ ทดสอบเพื่อตรวจสอบเบอร์เกอร์เนื้อหมูในเชิงพาณิชย์ที่มีความแม่นยำสูงและความแม่นยำ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เป็น taqman โพรบเรียลไทม์การใช้ปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรส ( ที่ถูกพัฒนาขึ้นสำหรับการวิเคราะห์ปริมาณสิ่งเจือปนในเบอร์เกอร์หมูพาณิชย์ ( รวมจากที่เฉพาะเจาะจงชนิด taqman โพรบสำหรับการเพิ่มปริมาณงานและการตรวจสอบของ 109 BP ส่วนของสุกร - B ( cytb ) ยีน ทดสอบความจำกับ 10 ของดีเอ็นเอที่แตกต่างกัน 11 เนื้อสัตว์และปลา
ให้ชนิดและปริมาณของรอบ ( CQ ) 15.5 ± 0.20 สำหรับหมูและลบผลลัพธ์ของผู้อื่นในปฏิกิริยา 40 รอบกับการเปลี่ยนแปลงของนักวิเคราะห์และแหล่งข่าว การวิเคราะห์เนื้อเบอร์เกอร์หมูมีสูตรด้วยตะปู ( สามารถตรวจสอบได้ 100 – 0.01% ปนเปื้อนเนื้อหมูที่มีประสิทธิภาพ ( E )
) 93.8 % และค่าสัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์ ( R ) ของ 0.991 .แปลงค่าจริงกับค่า pcrpredicted เรียลไทม์ยังให้ผลดี การถดถอยเชิงเส้น , R2 0.998 และรากเล็กค่าเฉลี่ยความคลาดเคลื่อนกำลังสองของการสอบเทียบ rmsec 0.42 . ความสัมพันธ์ที่พบระหว่าง
บางส่วน Least Square ( PLS ) - ค่าพยากรณ์และ PCR แบบเรียลไทม์ กำหนด ค่า ความถูกต้องของวิธีการ≥ 90% ทั้งหมดรวมทั้งการตั้งค่ามาตรฐานการวิเคราะห์การตกค้างยังพบความแม่นยำสูงทั้งหมดรวมทั้ง . ในที่สุด การวิเคราะห์แบบสุ่ม 10 นาโนดีเอ็นเอพาณิชย์
เบอร์เกอร์หมู , เนื้อ , ไก่ , เนื้อแกะและ chevon จาก CQ ของ 15.56 ± 0.22 16.24 ± 0.35 จากเบอร์เกอร์หมู และผลเชิงลบจากคนอื่น แสดงให้เห็นถึงความเหมาะสมของการทดสอบเพื่อตรวจสอบเนื้อหมูเบอร์เกอร์เชิงพาณิชย์ที่มีความถูกต้องและความแม่นยำสูง .