motility-activating saline solution consisting of 60 mmol/l NaHCO3
and 20 mmol/l glycin (pH 9) (Lahnsteiner, 2000) was used for
motility activation. In preliminary trials, motility was determined by
subjective estimations using a light microscope at 250× magnification.
Two μl sperm suspension was placed on a slide, 100 μl sperm
motility-activating saline solution was added and vigorously mixed.
After 5–10 s of motility activation, the percentage of progressive
motility was estimated to the nearest 10%. No cover slip was used for
the preparations.
For detailed analysis, computer assisted cell motility analysis was
used. Sperm motility was activated in a Makler chamber (depth 10 μm,
volume of 20 μl) which was cooled to 4 °C. Hundred microliters 4 °C
sperm motility-activating saline solution and 2 μl sperm suspension
were mixed in the chamber. The chamber was closed with a cover slip,
whereby excess amount of diluted semen was drained off and
transferred into an inverse phase contrast microscope where the
motility was recorded on videotapes (magnification 200×).
Ten±1 s after transfer (=after activation) in the Makler chamber,
sperm motility was measured using the Stroemberg Mika cell motility
analysis program. About 100 spermatozoa were analyzed from each
sample and sperm motility was classified as follows: spermatozoa
with an average path velocity 20 μm/s as motile. From the motile
spermatozoa the linearity index (LI) was calculated as LI=SL/AL,
where SL represents the straight line between the measuring points
and AL the actual swimming path between the measuring points.
Spermatozoa were classified in linear when having a linearity
index ≤0.9 μm, in non-linear when having a linearity
index >0.9 μm, and in circular when swimming in circles with a
maximal radius of 20 μm. Finally, the percentage of linear, non-linear,
and circular motile spermatozoa was calculated in relation to the total
number of motile spermatozoa.
น้ำเกลือเคลื่อนที่เปิดใช้งานซึ่งประกอบด้วย 60 มิลลิโมล / ลิตร NaHCO3
และ 20 มิลลิโมล / ลิตร glycin (pH 9) (Lahnsteiner, 2000) ที่ใช้สำหรับ
ยืนยันการใช้งานเคลื่อนที่ ในการทดลองเบื้องต้น, การเคลื่อนที่ถูกกำหนดโดย
ประมาณการอัตนัยโดยใช้กล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสงที่ 250 ×ขยาย.
สองระงับอสุจิไมโครลิตรถูกวางลงบนสไลด์ 100 ไมโครลิตรอสุจิ
เคลื่อนที่เปิดใช้งานน้ำเกลือถูกบันทึกและผสมอย่างจริงจัง.
หลังจากที่ 5-10 ของการเคลื่อนที่ การเปิดใช้งานร้อยละของความก้าวหน้า
การเคลื่อนที่ประมาณ 10% ใกล้ที่สุด ใบปะหน้าไม่ถูกนำมาใช้สำหรับ
การเตรียมการ.
สำหรับการวิเคราะห์รายละเอียดคอมพิวเตอร์ช่วยวิเคราะห์การเคลื่อนที่ของเซลล์ที่ถูก
นำมาใช้ การเคลื่อนไหวของอสุจิถูกเปิดใช้งานในห้อง Makler (ความลึก 10 ไมโครเมตร
ปริมาณ 20 ไมโครลิตร) ซึ่งถูกระบายความร้อนถึง 4 ° C ร้อย microliters 4 ° C
น้ำเกลือเคลื่อนที่เปิดใช้งานสเปิร์มและสเปิร์มที่ 2 ระงับไมโครลิตร
ถูกผสมอยู่ในห้อง ห้องถูกปิดด้วยใบปก
โดยจำนวนเงินส่วนเกินของน้ำอสุจิเจือจางได้ถูกระบายออกและ
โอนเข้ามาในขั้นตอนการผกผันกล้องจุลทรรศน์ความคมชัดที่
การเคลื่อนไหวถูกบันทึกลงบนวิดีโอเทป (กำลังขยาย 200 เท่า).
สิบ± 1 วินาทีหลังจากการโอน (= หลังจากเปิดใช้งาน) ในห้อง Makler,
การเคลื่อนไหวของอสุจิได้รับการวัดโดยใช้ Stroemberg มิกะเซลล์เคลื่อนที่
โปรแกรมการวิเคราะห์ ประมาณ 100 ตัวอสุจิที่ได้มาวิเคราะห์จากแต่ละ
ตัวอย่างและการเคลื่อนไหวของอสุจิถูกจำแนกได้ดังนี้ตัวอสุจิ
ที่มีความเร็วเฉลี่ยเส้นทาง <5 ไมครอน / s ที่ถูกกำหนดให้เป็น immotile,
อสุจิด้วยความเร็ว 5-20 ไมครอน / s ในขณะที่เคลื่อนที่ในประเทศ,
อสุจิด้วย ความเร็ว> 20 ไมครอน / s ในขณะที่เคลื่อนที่ จากเคลื่อนที่
อสุจิดัชนีเชิงเส้น (LI) ที่คำนวณได้เป็น LI = SL / AL,
SL ที่หมายถึงเส้นตรงระหว่างจุดตรวจวัด
และ AL เส้นทางว่ายน้ำที่เกิดขึ้นจริงระหว่างจุดวัด.
น้ำเชื้อโดยถูกจัดให้อยู่ในเชิงเส้นเมื่อมีความเป็นเชิงเส้น
ดัชนี ≤0.9ไมโครเมตรในการไม่เชิงเส้นเมื่อมีความเป็นเชิงเส้น
ดัชนี> 0.9 ไมโครเมตรและในวงกลมเมื่อว่ายน้ำในวงกลมที่มี
รัศมีสูงสุดของ 20 ไมโครเมตร สุดท้ายร้อยละของเชิงเส้นไม่เป็นเส้นตรง
และอสุจิเคลื่อนที่เป็นวงกลมที่คำนวณได้ในความสัมพันธ์กับรวม
จำนวนตัวอสุจิเคลื่อนที่
การแปล กรุณารอสักครู่..

ส่วนการใช้น้ำเกลือประกอบด้วย 60 mmol / L โซเดียมไบคาร์บอเนต
20 mmol / L ไกลซีน ( pH 9 ) ( lahnsteiner , 2000 ) ใช้
ส่วนการเปิดใช้งาน ในการทดลองเบื้องต้น , ส่วนวิเคราะห์
ภาคอัตนัยโดยใช้กล้องจุลทรรศน์ที่ 250 ×ขยาย .
2 l μอสุจิถูกระงับวางไว้บนภาพนิ่ง , 100 μ L
ส่วนอสุจิเปิดน้ำเกลือเพิ่มและผสมอย่างแข็งขัน
หลังจาก 5 – 10 วินาที ส่วนการเปิดใช้งาน ค่าเปอร์เซ็นต์การเคลื
คือประมาณใกล้ 10 % ปกไม่มีสลิปที่ใช้สำหรับการเตรียม
.
สำหรับการวิเคราะห์รายละเอียด คอมพิวเตอร์ช่วยในการวิเคราะห์การเคลื่อนที่ของเซลล์ได้
ใช้ . เปอร์เซ็นต์อสุจิเคลื่อนไหวทำงานใน makler แชมเบอร์ ( ความลึก 10 μ M ,
μปริมาณ 20 ลิตร ) ซึ่งเป็นเย็น 4 องศา ร้อยตัวเลข 4 ° C
เปอร์เซ็นต์อสุจิเคลื่อนไหวใช้น้ำเกลือ และ 2 μ L อสุจิระงับ
ปะปนกันอยู่ในห้อง ห้องที่ปิดด้วยฝาสลิปเงินส่วนเกินของน้ำเชื้อที่เจือจางด้วย
ถูกระบายออกและย้ายไปเป็นตรงกันข้ามต่างระดับกล้องจุลทรรศน์ที่ถูกบันทึกไว้ในเทป
การเคลื่อนที่ ( ขยาย 200 × )
1 S ±สิบหลังโอน ( = หลังจากที่เปิดใช้งาน ) ใน makler
ห้องของอสุจิได้ถูกวัดโดยใช้ stroemberg มิกะเซลล์การเคลื่อนที่
การวิเคราะห์โปรแกรม ประมาณ 100 มี 3 ตัวอย่าง และวิเคราะห์จากแต่ละ
เปอร์เซ็นต์อสุจิเคลื่อนไหวจัดดังนี้ 5
เฉลี่ยความเร็ว < เส้นทาง 5 μ M / S ถูกนิยามว่า immotile
5 , ที่มีความเร็ว 5 – 20 μ M / S เป็นมือถือในประเทศ
5 ที่มีความเร็ว > 20 μ M / S เป็น เคลื่อนที่ .
จากเคลื่อนที่5 ดัชนีเชิงเส้น ( Li ) คือคำนวณเป็นลี = SL / อัล
ที่ SL แทนเส้นตรงระหว่างจุดวัด
และอัลจริงว่ายเส้นทางระหว่างจุดวัด .
5 จำแนกเชิงเส้นเมื่อมี≤ดัชนี Linearity
0.9 μ M ในแบบเส้นตรง
เมื่อมีดัชนี > μ 0.9 เมตร และเมื่อว่ายวนเป็นวงกลมด้วย
รัศมีสูงสุด 20 μม. สุดท้าย ค่าเชิงเส้น , ไม่เชิงเส้น และวงกลมเคลื่อนที่อสุจิมีค่า
ในความสัมพันธ์กับจำนวนของอสุจิเคลื่อนที่ .
การแปล กรุณารอสักครู่..
