Live, attenuated Salmonella enteric

Live, attenuated Salmonella enterica serovar Typhi strain Ty21a, a licensed oral typhoid fever vaccine,
has also been employed for use as a vector to deliver protective antigens of Shigella and other pathogens.
Importantly, lipopolysaccharide (LPS) alone has been shown to be a potent antigen for specific protection
against shigellosis. We reported previously the plasmid cloning of heterologous LPS biosynthetic genes
and the expression in Ty21a of either S. sonnei or of S. dysenteriae 1 LPS’s. The resulting plasmids encoding
Shigella LPS’s were reasonably stable for >50 generations of growth in nonselective media, but still contained
an antibiotic resistance marker that is objectionable to vaccine regulatory authorities. Deletion of
this antibiotic-resistance marker inexplicably resulted in significant plasmid instability. Thus, we sought
a method to insert the large
∼12 kb S. sonnei LPS gene region into the chromosome, that would allow
for subsequent removal of a selectable marker and would result in 100% genetic stability. Toward this
objective, we optimized an existing recombination method to mediate the insertion of a
∼12 kb region
encoding the S. sonnei LPS genes into the Ty21a genome in a region that is nonfunctional due to mutation.
The resulting strain Ty21a-Ss simultaneously expresses both homologous Ty21a and heterologous
S. sonnei O-antigens. This chromosomal insert was shown to be 100% genetically stable in vitro and in
vivo. Moreover, Ty21a-Ss elicited strong dual anti-LPS serum immune responses and 100% protection
in mice against a virulent S. sonnei challenge. This new vaccine candidate, absolutely stable for vaccine
manufacture, should provide combined protection against enteric fevers due to Salmonella serovar Typhi
as shown previously (and some Paratyphi infections) and against shigellosis due to S. sonnei.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

สด ไฟฟ้าเคร...ซัล enterica serovar Typhi ต้องใช้ Ty21a การอนุญาตปากไข้ไทฟอยด์วัคซีนมียังรับจ้างใช้เป็นเวกเตอร์ส่ง antigens ป้องกันของ Shigella และโรคอื่น ๆสำคัญ lipopolysaccharide (LPS) เพียงอย่างเดียวได้ถูกแสดงให้ ตรวจหาการมีศักยภาพในการป้องกันกับ shigellosis เรารายงานก่อนหน้านี้ plasmid โคลนของ LPS heterologous ยีน biosyntheticและนิพจน์ใน Ty21a S. sonnei ใด หรือ S. dysenteriae 1 LPS Plasmids ได้เข้ารหัสShigella LPS ของได้มั่นคงสมเหตุสมผลสำหรับ > 50 รุ่นเจริญเติบโตในสื่อ nonselective แต่ยังคงมีอยู่เครื่องต้านทานยาปฏิชีวนะที่ไม่เหมาะสมกับหน่วยงานกำกับดูแลวัคซีน การลบเครื่องหมายนี้ต้านทานยาปฏิชีวนะ inexplicably เกิดความไม่เสถียรของ plasmid ที่สำคัญ ดังนั้น เราค้นหาวิธีการแทรกขนาดใหญ่∼12 kb S. sonnei LPS ยีนภูมิภาคในโครโมโซม ที่จะช่วยให้สำหรับเครื่องหมายที่เลือกลบตามมา และจะส่งผลให้เสถียรภาพพันธุกรรม 100% ไปทางนี้วัตถุประสงค์ เราปรับวิธีการ recombination อยู่บรรเทาการแทรกตัวภูมิภาค ∼12 kbเข้ารหัสยีน S. sonnei LPS ในจีโนม Ty21a ในภูมิภาคที่ nonfunctional อาจเนื่องจากการกลายพันธุ์พันธุ์ผล Ty21a Ss พร้อมแสดงทั้ง Ty21a homologous และ heterologousS. sonnei O antigens แทรกของโครโมโซมนี้ถูกแสดงให้เป็น 100% มั่นคงแปลงพันธุกรรม ในหลอด และvivo นอกจากนี้ Ty21a Ss elicited LPS ป้องกันแข็งแรงคู่เซรั่ม 100% และการตอบสนองภูมิคุ้มกันป้องกันในหนูต่อ virulent S. sonnei ท้าทาย นี้ใหม่วัคซีนผู้สมัคร เสถียรสำหรับวัคซีนผลิต ควรป้องกันรวม fevers enteric เนื่องจากซัล serovar Typhiตามที่แสดงไว้ก่อนหน้านี้ (และบางเชื้อ Paratyphi) และ shigellosis เนื่องจาก S. sonnei

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

สดเชื้อ Salmonella enterica serovar ลดความเครียด Typhi Ty21a, ได้รับใบอนุญาตในช่องปากวัคซีนไข้ไทฟอยด์,
ยังได้รับการว่าจ้างเพื่อใช้เป็นเวกเตอร์ที่จะส่งมอบแอนติเจนป้องกันของ Shigella และเชื้อโรคอื่น ๆ .
ที่สำคัญ lipopolysaccharide (LPS) คนเดียวที่ได้รับการแสดงให้เห็นว่ามีศักยภาพ แอนติเจนที่เฉพาะเจาะจงสำหรับการป้องกัน
ต่อต้านโรคบิด เรารายงานก่อนหน้านี้พลาสมิดโคลนของยีนสังเคราะห์ heterologous LPS
และการแสดงออกใน Ty21a ทั้ง S. sonnei หรือ S. dysenteriae 1 LPS ของ พลาสมิดเข้ารหัสผล
Shigella ของ LPS เป็นเหตุผลที่มั่นคงสำหรับ> 50 รุ่นของการเจริญเติบโตในสื่อ nonselective แต่ยังคงมี
เครื่องหมายต้านทานยาปฏิชีวนะที่เป็นที่รังเกียจของวัคซีนหน่วยงานกำกับดูแล การลบ
เครื่องหมายต้านทานยาปฏิชีวนะนี้ส่งผลอย่างลึกลับในความไม่แน่นอนพลาสมิดที่มีนัยสำคัญ ดังนั้นเราจึงแสวงหา
วิธีการที่จะใส่ขนาดใหญ่
~12 กิโล S. ภูมิภาค sonnei LPS ยีนในโครโมโซมที่จะช่วยให้
การกำจัดที่ตามมาของเครื่องหมายเลือกและจะส่งผลให้ 100% ความมั่นคงทางพันธุกรรม ในช่วงนี้
มีวัตถุประสงค์เราปรับวิธีการรวมตัวกันอีกที่มีอยู่เพื่อเป็นสื่อกลางในการแทรกของ
ภูมิภาคกิโล ~12
เข้ารหัสยีน S. sonnei LPS ในจีโนม Ty21a ในภูมิภาคที่เป็น nonfunctional เนื่องจากการกลายพันธุ์.
สายพันธุ์ที่เกิด Ty21a-Ss พร้อมทั้งเป็นการแสดงออกถึงความ คล้ายคลึงกัน Ty21a และ heterologous
S. sonnei O-แอนติเจน แทรกโครโมโซมนี้ได้แสดงให้เห็นว่า 100% ทางพันธุกรรมที่มีความเสถียรในหลอดทดลองและใน
สัตว์ทดลอง นอกจากนี้ Ty21a-Ss ออกมาตอบสนองที่แข็งแกร่งคู่เซรั่มต่อต้าน LPS ภูมิคุ้มกันและคุ้มครอง 100%
ในหนูกับความท้าทายที่รุนแรง S. sonnei ผู้สมัครนี้วัคซีนใหม่อย่างมั่นคงสำหรับวัคซีน
ผลิตควรให้ความคุ้มครองรวมกับไข้ลำไส้เนื่องจากเชื้อ Salmonella Typhi serovar
ที่แสดงก่อนหน้านี้ (และบางส่วนติดเชื้อ paratyphi) และต่อต้าน shigellosis เนื่องจาก S. sonnei

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

อยู่ การได้รับเชื้อ enterica ไนเครียด ty21a , ใบอนุญาตในช่องปากโรคไข้ รากสาดวัคซีน
ยังถูกใช้เพื่อใช้เป็นเวกเตอร์การส่งมอบการป้องกันแอนติเจนของชิเกลล่า และเชื้อโรคอื่น ๆ .
ที่สำคัญสีดำเข้ม ( หล่อลื่น ) คนเดียว ได้ถูกแสดงเป็น แอนติเจนที่เฉพาะเจาะจงกับพลังป้องกัน
ชิเกลโลซิส .เรารายงานก่อนหน้านี้การโคลนยีนชนิดสเปรย์พลาสมิดของลุงแซม
และการแสดงออกใน ty21a ของ S . sonnei หรือ S . dysenteriae 1 สเปรย์หล่อลื่น . ผลของพลาสมิดการเข้ารหัส
ชิเกลลาหล่อลื่นอยู่พอสมควรคง 50 รุ่นของการเจริญเติบโตใน nonselective สื่อ แต่ยังคงมีเครื่องหมาย
ต้านทานยาปฏิชีวนะที่รังเกียจของวัคซีนและการคาดการณ์ .การลบ
นี้ความต้านทานยาปฏิชีวนะเครื่องหมายลึกลับส่งผลให้เกิดเสถียรภาพ plasmid ที่สําคัญ เราจึงแสวงหาวิธีการแทรกมาก

∼บางครั้ง . sonnei หล่อลื่นยีนเขต 12 ในโครโมโซม ซึ่งจะช่วยในการกำจัดของเครื่องหมาย
ตามมาได้ และจะส่งผล 100% ทางความมั่นคง ต่อวัตถุประสงค์นี้
,เราปรับวิธีที่มีอยู่การไกล่เกลี่ยการแทรกของ

บางครั้งเขต 12 ∼การเข้ารหัสเอส sonnei หล่อลื่นยีนเข้าสู่จีโนม ty21a ในภูมิภาคที่ nonfunctional เนื่องจากการกลายพันธุ์ที่เกิดความเครียด
ty21a SS พร้อมกันแสดงทั้งความคล้ายคลึงและ ty21a ด้วยตัวเอง
S . sonnei o-antigens . แทรกโครโมโซมนี้เป็น 100% พันธุกรรมคงที่ในหลอดทดลองและใน
สิ่งมีชีวิตนอกจากนี้ ty21a SS ได้มาแข็งแรงคู่เซรั่ม anti สเปรย์หล่อลื่นและการตอบสนองทางภูมิคุ้มกัน 100%
หนูต่อต้านรุนแรง . sonnei ท้าทาย ผู้สมัครวัคซีนใหม่นี้ มั่นคง อย่างวัคซีน
ผลิต ควรให้รวมป้องกันไข้ต่อ เนื่องจากเชื้อไทฟอยด์
ไนแสดงก่อนหน้านี้ ( และบางเชื้อ paratyphi ) และกับชิเกลโลซิส เนื่องจาก sonnei
. . .