2. Materials and methods2.1. Microo

2. Materials and methods
2.1. Microorganisms and culture media
The microorganism used was S. equi subsp. zooepidemicus ATCC
35426. Stock cultures were stored at −80 ◦C in complex medium
(defined in Table 1) with 25% glycerol. The inocula were prepared
following themethodology described by Armstrong et al.[23]. Thus,
cellular suspensions of S. zooepidemicus from 16 h aged in complex medium, were transferred in serial 10-fold dilutions of peptonebuffered
solution, 0.1 mL samples were plated on sheep blood agar
plates (SBA) and incubated overnight at 37 ◦C. Pure mucoid colonies
were then added into the initial inoculum in a flask with 30 mL of
M17G medium [24]. After 3.5 h of growth at 37 ◦C and 100 rpm of
orbital shaker, the whole of this initial inoculum was transferred
into the secondary inoculum in a flask with 70 mL of VIG medium.
After 4 h of growth in the same conditions, this secondary inoculum
was gathered into the tertiary inoculum in a flask with 250 mL of
VIG and was incubated 4 h at 37 ◦C and 100 rpm. Finally, the tertiary
inoculum was added to the batch and fed-batch cultures at 10%
(v/v).
The compositions of the media are summarized in Table 1. Each
marine peptone was used at a level that replaced the Lowry protein
concentration present in the tryptone used for the complex
medium. The preparation and composition of the peptones solutions
from shark and thornback ray was described in a previous
work [25]. Moreover, in order to reduce the hyaluronidase activity
releases by S. zooepidemicus we have included 15 mg L−1 of
polystyrene (Mw = 990 kDa, Sigma) in the culture media. In all cases,
the initial pH was adjusted to 6.7 and the media were sterilised
at 121 ◦C for 15 min. Cultures were carried out in duplicate using
a glass 2 L-bioreactor with a working volume of 1.8 L. All fermentations
were performed without aeration at 37 ◦C, with agitation
of 500 rpm and the pH was automatically controlled with sterile
5 M NaOH. In the fed-batch cultures, the reducing sugars profiles
were always maintained above 10 g L−1 by repeated added of sterile
glucose solution of 500 g L−1.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2. วัสดุและวิธีการ2.1. จุลินทรีย์และสื่อวัฒนธรรมจุลินทรีย์ที่ใช้เป็น S. equi ถั่ว zooepidemicus ATCC35426 วัฒนธรรมหุ้นถูกเก็บไว้ที่ −80 ◦C ในซับซ้อน(กำหนดไว้ในตารางที่ 1) กับกลีเซอร 25% Inocula ได้เตรียมไว้themethodology ต่อไปนี้ที่อธิบายไว้โดยอาร์มสตรองและ al. [23] ดังนั้นบริการโทรศัพท์มือถือของ S. zooepidemicus จาก h 16 อายุในซับซ้อนปานกลาง มีการถ่ายโอนใน dilutions 10-fold ประจำของ peptonebufferedโซลูชั่น 0.1 มล.ตัวอย่างถูกนำมาชุบใน agar เลือดแกะแผ่น (SBA) และ incubated ที่ 37 ◦C ค้างคืน อาณานิคม mucoid บริสุทธิ์แล้วเพิ่มเป็น inoculum เริ่มต้นในหนาวด้วย 30 mL ของM17G กลาง [24] หลังจาก h 3.5 ของการเติบโตที่ 37 ◦C และ 100 รอบต่อนาทีของเชคเกอร์โคจร ทั้งหมดของ inoculum นี้เริ่มมีการโอนย้ายเป็น inoculum รองในหนาวกับ 70 mL ของกลาง VIGหลังจาก h 4 เจริญเติบโตในเงื่อนไขเดียวกัน inoculum นี้รองถูกรวบรวมเป็น inoculum ระดับตติยภูมิในหนาวกับ 250 mL ของVIG และถูก incubated 4 h 37 ◦C และ 100 รอบต่อนาที สุดท้าย ตติยinoculum ได้เพิ่มชุดและชุดงานเลี้ยงวัฒนธรรมที่ 10%(v/v)องค์ประกอบการสื่อจะถูกสรุปในตารางที่ 1 แต่ละใช้ peptone ทะเลระดับแทนที่โปรตีน Lowryความเข้มข้นใน tryptone ใช้ซับซ้อนสื่อ เตรียมการและองค์ประกอบของโซลูชั่น peptonesจากฉลามและ thornback เรย์ถูกอธิบายในการก่อนหน้านี้ทำงาน [25] นอกจากนี้ เพื่อลดกิจกรรม hyaluronidaseออก โดย S. zooepidemicus เรารวม 15 มก. L−1โฟม (Mw = 990 kDa ซิก) สื่อวัฒนธรรม ในทุกกรณีปรับ pH เริ่มต้น 6.7 และสื่อถูก sterilisedที่ 121 ◦C สำหรับ 15 นาที วัฒนธรรมได้ดำเนินการใช้ซ้ำแก้ว 2 L-bioreactor ด้วยทำงาน 1.8 L. หมักแหนมทั้งหมดดำเนิน โดย aeration ที่ ◦C 37 มีอาการกังวลต่อ500 rpm และ pH ได้โดยอัตโนมัติควบคุม ด้วยกระบอก5 M NaOH ในวัฒนธรรมชุดงานเลี้ยง การลดน้ำตาลค่าถูกเสมอรักษาเหนือ 10 g L−1 โดยการทำซ้ำเพิ่มของกอซกลูโคสที่โซลูชั่น 500 กรัม L−1

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2. วัสดุและวิธีการ
2.1 จุลินทรีย์และสื่อวัฒนธรรมจุลินทรีย์ที่ใช้เป็นเอส subsp equi
zooepidemicus ATCC
35426 วัฒนธรรมหุ้นถูกเก็บไว้ที่ -80 ◦Cในสื่อที่ซับซ้อน
(ที่กำหนดไว้ในตารางที่ 1) กับกลีเซอรีน 25% inocula ได้จัดทำ
themethodology ต่อไปนี้จะอธิบายโดยอาร์มสตรอง et al. [23] ดังนั้นสารแขวนลอยเซลล์ของเอส zooepidemicus จาก 16 ชั่วโมงที่มีอายุในสื่อที่ซับซ้อนมีการถ่ายโอนในอนุกรมเจือจาง 10 เท่าของ peptonebuffered วิธีการแก้ปัญหา 0.1 มิลลิลิตรตัวอย่างที่ถูกชุบวุ้นในเลือดแกะแผ่น(SBA) และบ่มค้างคืนที่ 37 ◦C อาณานิคม mucoid บริสุทธิ์ที่ถูกเพิ่มเข้ามาแล้วเชื้อครั้งแรกในขวด30 มลกลาง M17G [24] หลังจากที่ 3.5 ชั่วโมงของการเจริญเติบโตที่ 37 ◦Cและ 100 รอบต่อนาทีของการปั่นวงทั้งเชื้อครั้งแรกนี้ถูกย้ายเข้ามาในหัวเชื้อรองในขวด70 มิลลิลิตรของกลาง VIG ได้. หลังจาก 4 ชั่วโมงของการเจริญเติบโตในสภาพเดียวกันนี้รอง หัวเชื้อถูกรวบรวมเข้ามาในหัวเชื้อในระดับอุดมศึกษาในขวด250 มิลลิลิตรของVIG และถูกบ่ม 4 ชั่วโมงที่ 37 ◦Cและ 100 รอบต่อนาที สุดท้ายในระดับอุดมศึกษาเชื้อถูกเพิ่มลงในชุดและวัฒนธรรมอาหารชุดที่ 10% (v / v). องค์ประกอบของสื่อที่มีรายละเอียดในตารางที่ 1 แต่ละเปปโตนทะเลถูกนำมาใช้ในระดับที่ถูกแทนที่ด้วยโปรตีนคอรีความเข้มข้นในปัจจุบันใน tryptone ที่ใช้สำหรับการที่ซับซ้อนขนาดกลาง ในการจัดทำและองค์ประกอบของการแก้ปัญหา peptones จากปลาฉลามและรังสี Thornback ได้อธิบายไว้ในก่อนหน้านี้ทำงาน[25] นอกจากนี้เพื่อลดกิจกรรม hyaluronidase เผยแพร่โดยเอส zooepidemicus เราได้รวม 15 มก. L-1 จากสไตรีน(Mw = 990 กิโลดาลตันซิก) ในสื่อวัฒนธรรม ในทุกกรณีค่า pH เริ่มต้นการปรับ 6.7 และสื่อที่ได้รับการฆ่าเชื้อที่121 ◦Cเป็นเวลา 15 นาที วัฒนธรรมได้ดำเนินการในที่ซ้ำกันโดยใช้กระจก 2 L-เครื่องปฏิกรณ์ชีวภาพที่มีปริมาณการทำงานของ 1.8 ลิตรหมักแหนมทั้งหมดได้ดำเนินการโดยไม่ต้องเติมอากาศที่37 ◦Cมีการกวน500 รอบต่อนาทีและมีค่า pH ที่ถูกควบคุมโดยอัตโนมัติด้วยหมัน5 M NaOH ในวัฒนธรรมอาหารชุด, น้ำตาลลดโปรไฟล์ถูกเก็บรักษามักจะสูงกว่า10 กรัม L-1 โดยซ้ำที่เพิ่มขึ้นของการฆ่าเชื้อแก้ปัญหาของน้ำตาลกลูโคส500 กรัม L-1

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2 . วัสดุและวิธีการ
2.1 . จุลินทรีย์ และจุลินทรีย์ที่ใช้คือวัฒนธรรมสื่อ
S . เท่ากัน subsp . ใน 35426 )
. หุ้นวัฒนธรรมอุณหภูมิ− 80 ◦ C
ขนาดกลางซับซ้อน ( ระบุไว้ในตารางที่ 1 ) กับ 25 % กลีเซอรอล . การ inocula เตรียม
ต่อไปนี้วิธีการที่อธิบายโดยอาร์มสตรอง et al . [ 23 ] ดังนั้น ในเซลล์แขวนลอยของ S .
16 H อายุในสื่อที่ซับซ้อนโอนแบบเจือจาง 10 เท่าของ peptonebuffered
สารละลาย 0.1 มิลลิลิตร จำนวนชุบแกะเลือดวุ้น
แผ่น ( SBA ) และบ่มค้างคืนที่ 37 ◦ C อาณานิคมน้ำลายบริสุทธิ์
แล้วเพิ่มเป็นเชื้อเริ่มต้นในกระติกกับ 30 มล. ขนาดกลาง m17g
[ 24 ] หลังจาก 3.5 H ของการเจริญเติบโตที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส และ 100 รอบต่อนาที◦
เครื่องปั่นโคจรทั้งเชื้อเริ่มต้นนี้ถูกโอน
เป็นเชื้อรองในกระติก 70 มล. vig ปานกลาง
หลังจาก 4 H ของการเจริญเติบโตในเงื่อนไขเดียวกันนี้รองเชื้อ
ได้มาเป็นเชื้อตติยในกระติกกับ
งั้น 250 ml และบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส และ◦ 4 h 100 รอบต่อนาที ในที่สุด เชื้อตติย
ถูกเพิ่มชุดและเลี้ยงชุดวัฒนธรรมที่ 10 %
( v / v )
องค์ประกอบของสื่อ สรุปได้ในตารางที่ 1แต่ละ
ทางทะเลเปปโตนถูกใช้ที่ระดับความเข้มข้นโปรตีน
เปลี่ยนเบสอยู่ในทริพโทนใช้สำหรับสื่อที่ซับซ้อน

การเตรียมการและองค์ประกอบของโซลูชั่นจากปลาฉลาม thornback
เพปโทนและเรย์ได้อธิบายไว้ในก่อนหน้านี้
งาน [ 25 ] นอกจากนี้ เพื่อลดกิจกรรม
ไฮอะลูโรนิเดสเผยแพร่โดยสหรัฐอเมริกาในขณะนี้มีรวม 15 mg L − 1
สไตรีน ( Mw = 990 ( ซิกมา ) ในสังคมสื่อ ในทุกกรณี ,
pH เริ่มต้นปรับ 6.7 และสื่อได้ sterilised
ที่ 121 ◦ C เป็นเวลา 15 นาที วัฒนธรรม ได้ดำเนินการในที่ซ้ำกันใช้
แก้ว 2 l-bioreactor กับปริมาณการทำงานของ 1.8 ลิตร ทั้งหมด fermentations
การไม่ให้อากาศที่อุณหภูมิ 37 ◦ C ด้วยการกวน 500 รอบต่อนาทีและ
pH โดยอัตโนมัติควบคุมด้วยเป็นหมัน
5 M NaOH ในชุดวัฒนธรรมอาหาร , ลดน้ำตาลโปรไฟล์
มักจะรักษาข้างต้นเพิ่ม 10 g L − 1 โดยซ้ำของสารละลายกลูโคสเป็นหมัน
500 g L − 1