DNA extraction and bulked segregant

DNA extraction and bulked segregant analysis
Genomic DNA was extracted from green leaves of tomato plants using the modified CTAB method
of Murray and Thompson (1980).
The DNA was quantified against lambda standards on agarose gels stained with ethidium bromide, and the concentration of DNA was then diluted to 10 ng • μL-1.
Resistant and susceptible bulks for bulk segregant analysis (BSA) were made by pooling equal amount of genomic DNA from 10 resistant F2 plant and 10 susceptible F2 plant, respectively, and both bulks were used along with the parents to identify markers showing polymorphisms between these samples.
These polymorphic markers were further used to analyze individual F2 plant to determine linkages between markers and the Cf-10 resistance gene.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

สกัดดีเอ็นเอและการวิเคราะห์ bulked segregantGenomic DNA ที่สกัดจากใบสีเขียวของพืชมะเขือเทศใช้วิธี CTAB แก้ไขเมอร์เรย์และทอมป์สัน (1980) ดีเอ็นเอถูก quantified กับมาตรฐานแลมบ์ดาบน agarose สีกับโบรไมด์ ethidium และความเข้มข้นของดีเอ็นเอถูกทำให้เจือจางแล้ว 10 ng • μL-1 Bulks ทน และไวต่อการวิเคราะห์ segregant จำนวนมาก (บีเอสเอ) เกิดขึ้น โดยการร่วมกันจำนวนเท่าของ genomic DNA จาก 10 ทน F2 โรงงานและโรงงาน F2 ไวต่อ 10 ตามลำดับ และ bulks ทั้งสองใช้กับผู้ปกครองเพื่อระบุเครื่องหมายที่แสดง polymorphisms ระหว่างตัวอย่างเหล่านี้ เพิ่มเติมเครื่องหมายเหล่านี้ polymorphic ที่ใช้วิเคราะห์แต่ละพืช F2 เพื่อกำหนดความเชื่อมโยงระหว่างเครื่องหมายและยีนต้านทาน Cf 10

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การสกัดดีเอ็นเอและมีเนื้อมีหนังวิเคราะห์ segregant
จีโนมดีเอ็นเอที่สกัดจากใบสีเขียวของพืชมะเขือเทศโดยใช้วิธี CTAB
การแก้ไขของเมอร์เรและธ อมป์สัน (1980).
ดีเอ็นเอถูกวัดกับมาตรฐานแลมบ์ดาในเจล agarose ย้อมด้วยสีโบรไมด์ ethidium และความเข้มข้นของดีเอ็นเอเป็น เจือจางแล้วถึง 10 นาโนกรัม•ไมโครลิตร-1.
bulks ทนและอ่อนไหวสำหรับกลุ่มการวิเคราะห์ segregant (บีเอสเอ) ที่ทำโดยรวมกำไรจำนวนเงินที่เท่ากันของดีเอ็นเอจากโรง F2 ทน 10 และ 10 ความไวต่อพืช F2 ตามลำดับและ bulks ทั้งสองถูกนำมาใช้พร้อมกับ พ่อแม่ผู้ปกครองในการระบุเครื่องหมายแสดงให้เห็นความหลากหลายระหว่างตัวอย่างเหล่านี้.
เหล่านี้บ่งชี้ polymorphic ถูกนำมาใช้ในการวิเคราะห์ต่อพืช F2 บุคคลที่จะตรวจสอบความเชื่อมโยงระหว่างเครื่องหมายและยีนต้านทาน Cf-10

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การสกัดดีเอ็นเอ และยก segregant การวิเคราะห์
genomic DNA สกัดจากใบสีเขียวของพืชมะเขือเทศโดยใช้วิธีที่ดัดแปลง ctab
ของ เมอร์เรย์ และ ทอมป์สัน ( 1980 )
ดีเอ็นเอวัดกับมาตรฐานแลมบ์ดาในเจล ( เปื้อนทิเดียมโบรไมด์และความเข้มข้นของดีเอ็นเอถูกเจือจาง 10 ของแต่ละμ L-1 .
ป้องกันไว bulks สำหรับการวิเคราะห์ segregant เป็นกลุ่ม ( BSA ) ถูกสร้างโดยการจํานวนเท่าของ genomic DNA จากพืชและ 10 ต่อ 10 ทน F2 F2 ต้น ตามลำดับ และทั้งสอง bulks ใช้พร้อมกับผู้ปกครองระบุเครื่องหมายแสดงความหลากหลายระหว่างตัวอย่างเหล่านี้
เครื่องหมายที่มีเหล่านี้ได้นำมาวิเคราะห์เพื่อศึกษาความเชื่อมโยงระหว่างบุคคล F2 พืชเครื่องหมายและ cf-10
ต้านทานของยีน