2.2. Reagents
Deionized water (resistivity 18.2 MX cmÀ1) was obtained by means of a Millipore water purification system (Millipore RiOs-DITM134, Bedford, MA, USA). Standards of lutein, zeaxanthin, and a-carotene were purchased from Carotenature (Lupsingen,Switzerland). 20 -Azobis (2-amidinopropane) dihydrochloride,2,4,6-tripiridyl-s-triazine (TPTZ), Folin–Ciocalteu reagent, stan-dards of quercetin, kaempferol, isorhamnetin, myricetin, apigenin,luteolin, hesperitin, chlorogenic acid,caffeic acid, 5-a cholestane,campasterol, b-sitosterol, stigmasterol, cholesterol, b-cryptoxan-thin, lycopene, and bcarotene were obtained from Sigma (St. Louis,MO, USA). Ferulic acid and naringenin standards were purchased
from Aldrich chemistry (Milwaukee, WI, USA). Trolox (6-hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchroman-2-carboxylic acid), gallic acid, tertiary butylhydroquinone (tBHQ), trimethylchorosilane, and hexamethyl-disilazane were obtained from Fluka (Buchs, Switzerland). 2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) radical was purchased from Wako (Wako company, Japan). All other chemicals and solvents used were of analytical and HPLC grade.
2.3. Nutrient determination
Nutrient analysis was conducted using standard AOAC methods(AOAC, 2005). All samples were analysed at the Institute of Nutri-tion laboratory, which has been accredited by and complies with ISO 17025:2005 for proximate compositions, minerals, and vita-mins. All values are presented per 100 g fresh sample.
2.3.1. Proximate composition
Total nitrogen was determined using the Kjeldahl method,method no. 981.10 (AOAC, 2005) and calculated into protein con-tent (N Â 6.25). Moisture content was determined by drying the sample in a hot air oven at 100 °C until a constant weight was ob-tained, method no. 952.45 (AOAC, 2005). Crude fat content was determined by acid digestion prior to continuous extraction using petroleum ether in Soxtec system, method no. 945.16 (AOAC,2005). Ash content was analysed by incinerating all organic matter at 550 ± 5 °C, method no. 945.46 (AOAC, 2005). Carbohydrate per 100 g was calculated using the following formula: 100-moisture-protein-fat-ash; energy was calculated by Atwater factor (4 forprotein and carbohydrate and 9 for total fat). Total dietary fibre was analysed using the enzymatic gravimetric method, method
no. 991.43 (AOAC, 2005).2.3.2. Minerals and vitamins Microwave digestion was used for sample decomposition to determine magnesium, iron, copper, and zinc using an inductively coupled plasma optical emission spectrophotometer (ICP-OES),method no. 984.27 (AOAC, 2005). The acid solution dissolved from ash residue was used for calcium, sodium, and potassium analyses by flame atomic absorption spectrophotometer (AAS), method no.975.03 (AOAC, 2005). Phosphorus was determined by the gravi-metric method (AOAC, 2005). Vitamins C and E were determined using the HPLC method (Sanchez-Mata, Camara-Hurtado,Diez-Marques, & Torija-Isasa, 2000; AOAC, 2005, method no.992.03, respectively).
2.4. Bioactive compound determination
2.4.1. Carotenoids
Samples were saponified and extracted according to the proce-dures of Sungpuang, Tangchitpianvit, Chittchang, and Wasantwisut 1999) with slight modification. In brief, freeze-dried samples were boiled with ethanolic potassium hydroxide with the addition of 10% (w/v) ascorbic acid, before being extracted with hexane and then evaporated to dryness. The residue was reconstituted with mobile phase and then filtered through a 0.2 lm PTFE syringe fil-ter. Chromatographic separation of individual carotenoids was modified slightly from the method described by O’Connell, Ryan, and O’Brien (2007). It was carried out using an isocratic reverse-phase column, 0.5 lm Vydac 201TP54-C18 (4.6 Â 250 mm, CA,
USA) with a photodiode array detector (Agilent Technologies,USA). Mobile phase comprising acetronitrile:methanol:dichloro-methane (80:11:9 v/v/v) containing 0.01% (v/v) triethylamine and 0.01% (w/v) ammonium acetate was used at a constant flow rate at 0.7 ml/min at ambient temperature. Qualitative and quantitative evaluation of chromatograms was monitored at 450 nm using ChemStation (Agilent Technologies, USA). Individual carotenoids
(lutein, zeathantin, b-carotene, a-carotene, b-cryptoxanthin, and lycopene) were identified based on comparing retention time and the UV spectrum of unknown peaks to the authentic standards. Carotenoid contents were expressed as lg/100 g sample.
2.2 น้ำยา
น้ำกลั่นปราศจากไอออน (ความต้านทาน 18.2 ม. cmÀ1) ได้โดยการคระบบน้ำบริสุทธิ์ (ค rios-ditm134, Bedford, MA, USA) มาตรฐานของลูทีนซีแซนทีนและแคโรทีนที่ซื้อมาจาก carotenature (lupsingen, วิตเซอร์แลนด์) 20 azobis (2-amidinopropane) dihydrochloride ,2,4,6-tripiridyl-s-triazine (tptz) folin-ciocalteu รีเอเจนต์ข้างต้นมาตรฐานของ quercetin, kaempferol, isorhamnetin,, myricetin apigenin, luteolin, hesperitin กรด chlorogenic กรด caffeic, 5 cholestane, campasterol, b-sitosterol, stigmasterol คอเลสเตอรอลข cryptoxan บาง, ไลโคปีนและ bcarotene ได้ ที่ได้รับจากซิก (เซนต์หลุยส์, usa) กรดและ naringenin มาตรฐาน ferulic กำลังซื้อ
จากเคมี aldrich (มิลวอกี, usa)trolox (6-ไฮดรอกซี-2-,5,7,8 tetramethylchroman-2-คาร์บอกซิกรด), ฝรั่งเศสกรด, butylhydroquinone ตติยภูมิ (TBHQ) trimethylchorosilane และ hexamethyl-disilazane ที่ได้รับจากหนู (Buchs, วิตเซอร์แลนด์) 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) หัวรุนแรงถูกซื้อจาก Wako (บริษัท Wako, ญี่ปุ่น) สารเคมีอื่น ๆ ทั้งหมดและตัวทำละลายที่ใช้เป็นของการวิเคราะห์และ hplc เกรด.
2.3การวิเคราะห์การกำหนดสารอาหาร
สารอาหารได้ดำเนินการโดยใช้วิธีการมาตรฐาน AOAC (AOAC, 2005) ตัวอย่างทั้งหมดถูกนำมาวิเคราะห์ที่ห้องปฏิบัติการของสถาบัน Nutri-tion ซึ่งได้รับการรับรองโดยและสอดคล้องกับ iso 17025:2005 กับองค์ประกอบใกล้เคียงแร่ธาตุและ Vita-นาทีที่ ค่าทั้งหมดจะถูกนำเสนอต่อ 100 กรัมตัวอย่างสด.
2.3.1 ใกล้เคียงองค์ประกอบ
ปริมาณไนโตรเจนทั้งหมดถูกกำหนดโดยใช้วิธีการวิธี Kjeldahl ไม่ 981.10 (AOAC, 2005) และจากการคำนวณเป็นโปรตีน con-เต็นท์ (n ย 6.25) ความชื้นถูกกำหนดโดยการอบแห้งตัวอย่างในเตาอบลมร้อนที่อุณหภูมิ 100 องศาเซลเซียสจนน้ำหนักคงที่ก็อบปรากฏในวิธีการใด ๆ 952.45 (AOAC, 2005)ปริมาณไขมันดิบถูกกำหนดโดยการย่อยอาหารกรดก่อนที่จะมีการสกัดอย่างต่อเนื่องโดยใช้อีเธอร์ปิโตรเลียมในระบบ soxtec วิธีไม่ 945.16 (AOAC, 2005) ปริมาณเถ้าได้รับการวิเคราะห์โดยการเผาทั้งสารอินทรีย์ที่ 550 ± 5 องศาเซลเซียสวิธีการใด ๆ 945.46 (AOAC, 2005) คาร์โบไฮเดรตต่อ 100 กรัมได้รับการคำนวณโดยใช้สูตรต่อไปนี้: 100 ความชื้นโปรตีนไขมันเถ้า;พลังงานที่คำนวณได้จากปัจจัย ATWATER (4 forprotein และคาร์โบไฮเดรตและ 9 เพื่อไขมันทั้งหมด) ใยอาหารทั้งหมดได้รับการวิเคราะห์โดยใช้เอนไซม์ gravimetric วิธีวิธี
ไม่มี 991.43 (AOAC, 2005) .2.3.2 แร่ธาตุและวิตามินย่อยอาหารไมโครเวฟที่ใช้ในการสลายตัวอย่างเพื่อตรวจสอบแมกนีเซียมเหล็ก, ทองแดง,และสังกะสีโดยใช้พลาสม่า inductively คู่ spectrophotometer ที่ปล่อยแสง (ICP OES) วิธีการไม่มี 984.27 (AOAC, 2005) สารละลายกรดที่ละลายจากสารตกค้างเถ้าใช้สำหรับแคลเซียมโซเดียมและโพแทสเซียมวิเคราะห์ด้วยเปลวไฟ spectrophotometer ที่ดูดซึมอะตอม (AAS) วิธี no.975.03 (AOAC, 2005) ฟอสฟอรัสถูกกำหนดโดยวิธีการ Gravi-เมตริก (AOAC, 2005)วิตามินซีและอีได้รับการพิจารณาโดยใช้วิธี HPLC (sanchez-mata, กล้อง-Hurtado, diez-Marques, & Torija-Isasa, 2000; AOAC, 2005 วิธี no.992.03 ตามลำดับ).
2.4 สารออกฤทธิ์ทางชีวภาพที่กำหนด
2.4.1 carotenoids
ตัวอย่างถูกสะและสกัดตาม proce dures ของ sungpuang, tangchitpianvit, chittchang และ wasantwisut 1999) ที่มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย ในช่วงสั้น ๆตัวอย่างแช่แข็งแห้งต้มกับเอทานอลไฮดรอกไซโพแทสเซียมด้วยนอกเหนือจาก 10% (w / v) วิตามินซีก่อนที่จะถูกสกัดด้วยเฮกเซนและจากนั้นจะระเหยความแห้งกร้าน ส่วนที่เหลือได้รับการสร้างขึ้นด้วยเฟสเคลื่อนที่แล้วกรองผ่าน 0.2 LM PTFE เข็มฉีดยาเพ็ญ-ตรีแยกโครมานอยด์ของบุคคลที่มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อยจากวิธีการที่อธิบายโดยคอนเนลล์, ไรอันและโอไบรอัน (2007) จะได้รับการดำเนินการโดยใช้คอลัมน์ isocratic กลับเฟส, 0.5 LM vydac 201tp54-c18 (4.6 ย 250 มิลลิเมตรแคลิฟอร์เนีย
usa) ที่มีเครื่องตรวจจับอาร์เรย์ photodiode (เทคโนโลยี agilent, usa) เฟสเคลื่อนที่ประกอบด้วย acetronitrile: เมทานอล: ไดคลอโรมีเทน (80:11:9 v / v / v) ที่มี 0.01% (v / v) triethylamine และ 0.01% (w / v) แอมโมเนียมอะซิเตทถูกนำมาใช้ที่อัตราการไหลคงที่ที่ 0.7 มล. / นาทีที่อุณหภูมิห้อง การประเมินผลเชิงคุณภาพและเชิงปริมาณของ chromatograms ได้รับการตรวจสอบที่ 450 นาโนเมตรโดยใช้ ChemStation (เทคโนโลยี agilent, usa) carotenoids บุคคล
(ลูทีน, zeathantin ขแคโรทีนแคโรทีน b-cryptoxanthin,และไลโคปีน) ถูกระบุขึ้นอยู่กับการเปรียบเทียบเวลาการเก็บรักษาและยูวีสเปกตรัมของยอดเขาไม่รู้จักกับมาตรฐานของแท้ เนื้อหา carotenoid ถูกแสดงเป็นตัวอย่าง lg/100 กรัม
.
การแปล กรุณารอสักครู่..
2.2. Reagents
น้ำ Deionized (cmÀ1 MX สภาพต้านทาน 18.2) กล่าว โดยมากน้ำ purification ระบบ (มากริออส DITM134 กลาสโกว์ MA สหรัฐอเมริกา) มาตรฐาน ของลูทีน zeaxanthin นสูงได้ถูกซื้อจาก Carotenature (Lupsingen สวิตเซอร์แลนด์) 20 - Azobis (2-amidinopropane) dihydrochloride, 2, 4, 6-tripiridyl-s-triazine (TPTZ), รีเอเจนต์ Folin–Ciocalteu สแตน-dards quercetin, kaempferol, isorhamnetin, myricetin, apigenin, luteolin, hesperitin กรด chlorogenic กรด caffeic, 5 ที่ cholestane, campasterol, b-sitosterol, stigmasterol ไขมัน บี-cryptoxan-บาง lycopene และ bcarotene ได้รับมาจากซิกมา (เซนต์หลุยส์ MO สหรัฐอเมริกา) ซื้อกรด ferulic และมาตรฐาน naringenin
จากเคมี Aldrich (มิลวอกี WI สหรัฐอเมริกา) Trolox (6-hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchroman-2-carboxylic กรด), กรด gallic, butylhydroquinone ระดับตติยภูมิ (tBHQ), trimethylchorosilane และ hexamethyl disilazane ได้รับมาจาก Fluka (Buchs สวิตเซอร์แลนด์) 2,2-ฟีนิลได-1-picrylhydrazyl (DPPH) รัศมีถูกซื้อจาก Wako (บริษัท Wako ญี่ปุ่น) ทั้งหมดเคมีภัณฑ์อื่น ๆ และหรือสารทำละลายที่ใช้มีการวิเคราะห์ HPLC เกรดได้
2.3 กำหนดธาตุอาหาร
วิเคราะห์ธาตุอาหารที่ดำเนินการโดยใช้มาตรฐานวิธี AOAC (AOAC, 2005) ตัวอย่างทั้งหมดมี analysed ในห้องปฏิบัติการสเตสถาบันของ Nutri-รชัน ซึ่งได้รับการรับรองโดยสอดคล้องกับ ISO 17025:2005 เคียงองค์ แร่ธาตุ และวีตานาที ค่าทั้งหมดจะนำเสนอต่อ 100 กรัมสดอย่างนั้น
2.3.1 องค์ประกอบที่เคียง
ไนโตรเจนถูกกำหนดโดยวิธี Kjeldahl วิธีหมายเลข 981.10 (AOAC, 2005) และคำนวณเป็นโปรตีนคอนเต็นท์ (N Â 6.25) กำหนดเนื้อหาความชื้น โดยการอบแห้งอย่างในเตาอบอากาศร้อนที่ 100 ° C จนน้ำหนักคงคือ ob tained หมายเลข 952.45 (AOAC, 2005) วิธีการ น้ำมันไขมันที่ถูกกำหนด โดยกรดย่อยอาหารก่อนใช้ปิโตรเลียมอีเทอร์ในระบบ Soxtec หมายเลข 945.16 (AOAC, 2005) วิธีการสกัดอย่างต่อเนื่อง เถ้าเนื้อหาถูก analysed โดย incinerating อินทรีย์ทั้งหมดที่ 550 ± 5 ° C วิธีหมายเลข 945.46 (AOAC, 2005) มีคำนวณโดยใช้สูตรต่อไปนี้คาร์โบไฮเดรตต่อ 100 กรัม: 100-ความชื้นโปรตีนไขมันเถ้า พลังงานคำนวณ โดยคูณ Atwater (4 forprotein และคาร์โบไฮเดรต และ 9 สำหรับไขมันทั้งหมด) fibre รวมอาหารที่ analysed ใช้วิธีต้องการเอนไซม์ในระบบ วิธี
หมายเลข 991.43 (AOAC, 2005) .2.3.2 วิตามินและเกลือแร่ย่อยอาหารไมโครเวฟใช้สำหรับแยกส่วนประกอบตัวอย่างการกำหนดแมกนีเซียม เหล็ก ทอง แดง และสังกะสีโดยใช้เครื่องทดสอบกรดเป็นพลาสม่าที่ท่านปล่อยก๊าซแสงด่าง (วิจัย), วิธีหมายเลข 984.27 (AOAC, 2005) ใช้โซลูชันกรดส่วนยุบจากเถ้าสารตกค้าง สำหรับแคลเซียม โซเดียม โพแทสเซียมวิเคราะห์ โดยเครื่องทดสอบกรด flame อะตอมดูดซึมด่าง (AAS), วิธี no.975.03 (AOAC, 2005) ฟอสฟอรัสที่ถูกกำหนด โดยวิธีวัด gravi (AOAC, 2005) วิตามิน C และ E ถูกกำหนดโดยใช้วิธี HPLC (ภะรัตมะแซนเชซตะ Camara Hurtado, Diez Marques & Torija-Isasa, 2000 AOAC ปี 2005 วิธี no.992.03 ตามลำดับ)
2.4 กำหนดผสมกรรมการก
2.4.1 Carotenoids
ตัวอย่าง saponified และสกัดตาม proce-dures Sungpuang, Tangchitpianvit แจ้ง และ 1999 ศิริจักรวาล) มี modification เล็กน้อย สังเขป ตัวอย่างกรอบถูกต้ม ด้วย ethanolic โพแทสเซียมไฮดรอกไซด์กับการเพิ่มของกรดแอสคอร์บิค 10% (w/v) ก่อนที่จะถูกสกัดด้วยเฮกเซน และหายไปแล้ว กับความแห้งกร้าน สารตกค้างถูก reconstituted กับเฟสเคลื่อนที่ และ filtered ผ่านเป็น 0.2 lm PTFE เข็ม fil-เธอ แบ่งแยกแต่ละ carotenoids chromatographic modified เล็กน้อยจากวิธีการอธิบาย โดยโอคอนเนลสต ไรอัน และโอไบรอัน (2007) ได้ มันถูกทำโดยใช้คอลัมน์เพิ่ม isocratic คิดกลับเฟส 0.5 lm Vydac 201TP54-C18 (4.6 Â 250 มม. CA,
สหรัฐอเมริกา) กับ a photodiode เรย์จับ (Agilent เทคโนโลยี สหรัฐอเมริกา) ระยะเคลื่อนที่ประกอบด้วย acetronitrile:methanol:dichloro-มีเทน (80:11:9 v/v/v) ที่ประกอบด้วย 0.01% (v/v) triethylamine และ acetate แอมโมเนีย 0.01% (w/v) ใช้ในอัตราคง flow ที่ 0.7 ml/min ที่อุณหภูมิการ การประเมินเชิงคุณภาพ และเชิงปริมาณของ chromatograms ถูกตรวจสอบที่ 450 nm โดยใช้ ChemStation (Agilent เทคโนโลยี สหรัฐอเมริกา) แต่ละ carotenoids
(ลูทีน zeathantin, b-แคโรทีน a นสูง บี-cryptoxanthin และ lycopene) มี identified ตามเปรียบเทียบสเปกตรัม UV ของยอดไม่ทราบมาตรฐานแท้จริงและรักษาเวลา Carotenoid เนื้อหาถูกแสดงเป็นตัวอย่าง lg/100 g.
การแปล กรุณารอสักครู่..