A glycosyl hydrolase family 5 endo-β-mannanase gene (man5F63) was cloned from Penicillium freii F63 and overexpressed in Pichia pastoris. man5F63 contained an open reading frame of 1260 bp that encoded a polypeptide of 419 amino acids including a putative 18-residue signal peptide. The recombinant enzyme (rMan5F63) was secreted into the culture supernatant to near electrophoretic homogeneity with a high yield (1.1 g l–1 in flask). Its apparent molecular weight was approximately 72.0 kDa, 29.0 kDa higher than the theoretical molecular mass. rMan5F63 was optimal at pH 4.5 and 60°C and exhibited good stability over a broad pH range from acidic to alkaline (N85.0% activity at pH 4.0–9.0, N70.0% activity at pH 10.0 and 43.7% even at pH 12.0). The activity of rMan5F63 was significantly enhanced in the presence of Co2 +, Cu2 +, Mn2 + and β-mercaptoethanol and was strongly inhibited by Hg2 + and SDS. The specific activity, Km and Vmax values were 47.5 U mg− 1, 7.8 mg ml− 1 and 70.4 μmol min− 1 mg− 1, respectively, for locust bean gum, and 40.3 U mg− 1, 2.3 mg ml− 1 and 61.7 μmol min− 1 mg− 1, respectively, for konjac flour. All these favorable enzymatic properties make it cost-effective to commercialization and valuable in various industries.
ครอบครัวไฮโดรเลส glycosyl 5 ยีน Endo-β-mannanase (man5f63) ถูกโคลนจากเพนนิซิ freii f63 และ overexpressed ใน Pichia pastoris man5f63 มี open reading frame ที่ 1260 bp ที่เข้ารหัส polypeptide จาก 419 กรดอะมิโนรวมทั้งสมมุติสัญญาณ peptide 18 ตกค้างrecombinant enzyme ที่ (rman5f63) จะถูกหลั่งเข้ากับวัฒนธรรมสารละลายที่เป็นเนื้อเดียวกัน electrophoretic ใกล้มีอัตราผลตอบแทนสูง (1.1 GL-1 ในขวด) น้ำหนักโมเลกุลของตนเห็นได้ชัดคือประมาณ 72.0 กิโลดาลตัน, 29.0 กิโลดาลตันสูงกว่ามวลโมเลกุลทฤษฎี rman5f63 เป็นที่ดีที่สุดที่ pH 4.5 และ 60 ° C และแสดงเสถียรภาพที่ดีในช่วง pH กว้างจากความเป็นกรดด่างที่ (n85.กิจกรรม 0% ที่ pH 4.0-9.0 กิจกรรม n70.0% ที่ pH 10.0 และ 43.7% แม้ที่ 12.0 ph) กิจกรรมของ rman5f63 ได้เพิ่มอย่างมีนัยสำคัญในการปรากฏตัวของ CO2, CU2, Mn2 และβ-mercaptoethanol และถูกยับยั้งโดย HG2 และ SDS กิจกรรมเฉพาะค่า กม. และ VMAX เป็น 47.5 mg U-1, 7.8 มก. ml-1 และ 70.4 ไมโครโมลนาที-1 mg-1 ตามลำดับสำหรับเหงือกถั่วตั๊กแตน, และ 40มิลลิกรัม 3 U-1, 2.3 มก. มล. -1 และ 61.7 ไมโครโมลนาที-1 mg-1 ตามลำดับสำหรับแป้งบุก ทั้งหมดเหล่านี้คุณสมบัติของเอนไซม์ที่ดีทำให้ค่าใช้จ่ายที่มีประสิทธิภาพในการดำเนินการเชิงพาณิชย์และมีคุณค่าในอุตสาหกรรมต่างๆ
การแปล กรุณารอสักครู่..
เป็น glycosyl hydrolase ครอบครัว 5 endo-β-mannanase ยีน (man5F63) ถูก cloned จาก Penicillium freii F63 และ overexpressed ใน Pichia pastoris man5F63 ประกอบด้วยกรอบการเปิดอ่านของ bp 1260 ที่ polypeptide ของกรดอะมิโน 419 เปป putative ตกค้าง 18 สัญญาณรวมทั้งการเข้ารหัส เอนไซม์ recombinant (rMan5F63) ที่ secreted ใน supernatant วัฒนธรรมให้ใกล้ homogeneity ด้วยมีมากผล (1.1 g l–1 ในหนาว) น้ำหนักของโมเลกุลชัดเจนถูกประมาณ 72.0 kDa, 29.0 kDa ที่สูงกว่ามวลโมเลกุลทฤษฎี rMan5F63 ดีที่สุดที่ค่า pH 4.5 และ 60 ° C และจัดแสดงเสถียรภาพดีกว่าช่วง pH กว้างจากกรดกับด่าง (N85กิจกรรม 0% ที่ pH 4.0–9.0, N70.0% กิจกรรมที่ pH 10.0 และ 43.7% แม้ค่า pH 12.0) กิจกรรมของ rMan5F63 ถูกปรับปรุงอย่างมีนัยสำคัญในต่อหน้าของ Co2, Cu2, Mn2 และβ-mercaptoethanol และถูกห้ามอย่างยิ่ง โดย Hg2 และ SDS กิจกรรม ค่า Km และ Vmax 47.5 U mg− 1, 7.8 มิลลิกรัม ml− 1 และ 70.4 μmol min− 1 mg− 1 ตามลำดับ โลคัสท์ถั่วหมากฝรั่ง และ 40Mg− U 3 1, 2.3 มิลลิกรัม ml− 1 และ 61.7 μmol min− 1 mg− 1 ตามลำดับ สำหรับ konjac แป้ง ทั้งหมดดีเอนไซม์ในระบบคุณสมบัติเหล่านี้ทำให้มันคุ้มค่ากับ commercialization และมีคุณค่าในอุตสาหกรรมต่าง ๆ
การแปล กรุณารอสักครู่..