The PCR reaction mixture (25 μl total) consisted of 50 mM KCl and 10 mM Tris–HCl (pH 8.8), 2 mM MgCl2, 125 mM of dNTP, 50 ng of each primer, 1.0 unit of Taq polymerase (Promega, Madison, WI), and 20 ng of genomic DNA. Amplification was carried out in C1000 Touch™ Thermal Cycler (Bio-Rad Laboratories Inc., Hercules, CA), using a program that consisted of initial denaturation for 1 min at 94 °C, followed by 32 cycles of 30 s at 94 °C, 50 s at 53 °C, 50 s at 72 °C, and final extension for 5 min at 72 °C.
ส่วนผสมปฏิกิริยา PCR (25 μl รวม) ประกอบด้วย KCl 50 มม.และ 10 มม.ตรี – HCl (pH 8.8), 2 มม. MgCl2, 125 มม.ของ dNTP, 50 ng แต่ละพื้น Taq พอลิเมอเรส (Promega เมดิสัน WI) 1.0 หน่วย และ 20 ng ของ genomic DNA ขยายได้ดำเนินในสัมผัส C1000 ™ร้อน Cycler (Bio Rad Laboratories Inc. เฮอร์คิวลิส CA), โดยใช้โปรแกรมที่ประกอบด้วย denaturation เริ่มต้นใน 1 นาทีที่ 94 ° C ตามรอบ 32 30 s ที่ 94 ° C, 50 s ที่ 53 ° C, 50 s ที่ 72 ° C และส่วนขยายสุดท้ายสำหรับ 5 นาทีที่ 72 องศาเซลเซียส
การแปล กรุณารอสักครู่..
ส่วนผสม PCR ปฏิกิริยา (ทั้งหมด 25 ไมโครลิตร) ประกอบด้วย 50 มิลลิโพแทสเซียมคลอไรด์และ 10 มิลลิ Tris-HCl (pH 8.8), 2 มิลลิ MgCl2, 125 มิลลิของ dNTP 50 ศึกษาของแต่ละไพรเมอร์, 1.0 หน่วยของ Taq โพลิเมอร์ (Promega เมดิสัน WI) และ 20 จำนวนของดีเอ็นเอ ขยายได้ดำเนินการใน C1000 สัมผัส™ Cycler ความร้อน (Bio-Rad Laboratories Inc, ดาว, CA) โดยใช้โปรแกรมที่ประกอบด้วยการสูญเสียสภาพธรรมชาติเริ่มต้นสำหรับ 1 นาทีที่ 94 ° C ตามด้วย 32 รอบที่ 30 s ที่ 94 ° C 50 s ที่ 53 ° C, 50 s ที่ 72 ° C และขยายสุดท้ายเป็นเวลา 5 นาทีที่ 72 ° C
การแปล กรุณารอสักครู่..
การตรวจปฏิกิริยาผสม ( 25 μ L ทั้งหมด ) จำนวน 50 mm . และ 10 มม. นอกจากนี้ – HCl ( พีเอช 8.8 มม. ) 2 ชุด , 125 มม. dntp 50 ของแต่ละหน่วย โดยไพรเมอร์สำหรับแท็ก ( promega เมดิสัน , WI ) , และ 20 ng ของ genomic DNA การเพิ่มข้อมูลใน c1000 สัมผัส™ความร้อนรอบ ( ไบโอ ราดห้องปฏิบัติการอิงค์ , Hercules , CA ) , การใช้โปรแกรม ซึ่งประกอบด้วย เริ่มต้น ( 1 นาทีที่ 94 ° Cตามด้วย 32 รอบ 30 s ที่ 94 ° C 50 s 53 ° C 50 s 72 ° C และส่วนขยายสุดท้ายสำหรับ 5 นาทีที่ 72 ° C
การแปล กรุณารอสักครู่..