Immunofluorescence
Coronal free-floating sections (40 μm thick) were pretreated with 3% H2O2/3% methanol in Tris-buffered saline (TBS) for 30 min to block endogenous peroxide activity. After TBS wash, sections were incubated once in TBS with 0.1% Triton X-100 (TBST) for 15 min, and once in TBST with 2% bovine serum albumin (BSA, Sigma-Aldrich) for 30 min. Sec- tions were incubated with anti-MAP2 (1:1000, Abcam, Cambridge, MA); anti-PHF1 (Dr. Peter Davies, Albert Einstein College of Medicine, Manhasset, NY, USA) in TBS + 5% normal goat or horse serum over- night at 4 °C. Sections were then rinsed and incubated for 1 h with sec- ondary Alexa Fluor-conjugated antibody (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) at room temperature. Finally, sections were mounted onto gelatin- coated slides in Fluoromount-G (Southern Biotech, Birmingham, AL, USA) and examined under a Leica DM2500 confocal laser microscope.
immunofluorescence
เวียนฟรีลอยส่วน (40 ไมโครเมตรหนา) มีปรับสภาพ 3% H2O2 3% เมทานอล / ใน tris-buffered น้ำเกลือ (TBS) เป็นเวลา 30 นาทีเพื่อป้องกันกิจกรรมเปอร์ออกไซด์ภายนอก หลังจาก TBS ล้างส่วนที่ได้รับการบ่มหนึ่งครั้งใน TBS 0.1% ไทรทัน x-100 (tbst) เป็นเวลา 15 นาทีและครั้งเดียวใน tbst 2% วัวซีรั่มอัลบูมิ (BSA, Sigma-Aldrich) เป็นเวลา 30 นาทีวินาทีทั้งนี้บ่มด้วยการต่อต้าน map2 (1:1000, Abcam, เคมบริดจ์); ป้องกัน phf1 (ดร. ปีเตอร์เดวีส์, Albert Einstein วิทยาลัยการแพทย์ฮัสเซทนิวยอร์ก, สหรัฐอเมริกา) ใน TBS 5% แพะปกติหรือม้า ซีรั่มไปคืนที่ 4 องศาเซลเซียส ส่วนที่ถูกล้างแล้วและบ่มเป็นเวลา 1 ชั่วโมงด้วย Alexa Fluor-ผันแอนติบอดีวินาที ondary (Invitrogen, คาร์ลสแคลิฟอร์เนีย, usa) ที่อุณหภูมิห้อง ในที่สุดส่วนที่ได้รับการติดตั้งลงบนสไลด์เจลาตินเคลือบใน fluoromount-g (เทคโนโลยีชีวภาพใต้เบอร์มิงแฮม, usa) และตรวจสอบภายใต้กล้องจุลทรรศน์เลเซอร์ LEICA dm2500 confocal
การแปล กรุณารอสักครู่..
