High-throughput sequencingHigh-thro

High-throughput sequencing
High-throughput sequencing was used to analysis the microbial
communities in the anaerobic granular sludge, to see how the
microbial community changes under the high NH4 + –N environment.
Anaerobic granular sludge samples were collected from
the reactor on day 0, 60 and 186 when the performance of the reactor
was stable. Genomic DNA was extracted using an E.Z.N.A. Soil
DNA Kit (OMEGA).
For each sample, we amplified the V4 region 16S rRNA genes
using a broadly conserved primer set (515F/806R, 50-GTGCCAGC
MGCCGCGGTAA-30/50-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-30). The PCR
primers were constructed as follow: forward primer = 454
Titanium Lib-l Primer A/5-base barcode/forward 16S primer and
reverse primer = 454 Titanium Lib-l Primer B/reverse 16S primer
(Peiffer et al., 2013). PCR reactions were carried out in triplicate
20-lL reactions with 0.4 lM forward and reverse primers, 1-lL
template DNA, 250 nM dNTP and a 1 FastPfu buffer. All dilutions
were carried out using certified DNA-free PCR water. Thermal
cycling consisted of initial denaturation at 95 C for 2 min followed
by 25 cycles of denaturation at 95 C for 30 s, annealing at 55 C for
30 s, an extension at 72 C for 30 s, with a final extension of 5 min
at 72 C. Replicate amplicons were pooled and visualized on 2.0%
agarose gels using a SYBR Safe DNA gel stain in 1 TAE.
After purification using a spin column (QIAGEN, Düsseldorf,
Germany), DNA fragments with ligated adapter molecules on both

0/5000

จาก: -

เป็น: -

ผลลัพธ์ (ไทย) 1: [สำเนา]

คัดลอก!

ลำดับอัตราความเร็วสูงใช้อัตราความเร็วสูงลำดับการวิเคราะห์จุลินทรีย์ที่ชุมชนในตะกอน granular ไม่ใช้ออกซิเจน การดูวิธีการเปลี่ยนแปลงชุมชนจุลินทรีย์ภายใต้สูง NH4 + – N สิ่งแวดล้อมตัวอย่างตะกอน granular ไม่ใช้ถูกเก็บรวบรวมจากปล่อยในวันที่ 0, 60 และ 186 เมื่อประสิทธิภาพการทำงานของระบบมีเสถียรภาพ Genomic DNA ถูกสกัดโดยใช้การ E.Z.N.A. ดินชุดดีเอ็นเอ (โอเมก้า)สำหรับตัวอย่างแต่ละ เราขยายยีน V4 ภูมิภาค 16S rRNAใช้รองพื้นทั่วไปนำชุด (515F/806R, 50-GTGCCAGCMGCCGCGGTAA-30/50-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-30) การ PCRไพรเมอร์ถูกสร้างดังต่อไปนี้: ส่งต่อรองพื้น = 454รองพื้นไปบาร์โค้ด 16S Lib l พื้น A/5-ฐานไทเทเนียม และกลับพื้น = 454 พื้นไทเทเนียม Lib l พื้น B/กลับ 16S(Peiffer et al., 2013) ปฏิกิริยา PCR ได้ดำเนินการ triplicate20 จะปฏิกิริยากับ 0.4 lM ไปข้างหน้า และย้อนกลับไพรเมอร์ 1 จะดีเอ็นเอต้นแบบ 250 nM dNTP และบัฟเฟอร์ FastPfu 1 ทั้งหมด dilutionsได้ดำเนินการใช้น้ำฟรี DNA PCR ได้รับการรับรอง ความร้อนจักรยานประกอบด้วย denaturation เริ่มที่ 95 C ใน 2 นาทีด้วยโดยรอบ 25 ของ denaturation ที่ 95 C สำหรับ 30 s การอบเหนียวที่ 55 C สำหรับ30 s ส่วนขยายที่ 72 C สำหรับ 30 s ขยายสุดท้าย 5 นาทีค. 72 Replicate amplicons ถูกทางถูกพู และ visualized บน 2.0%ใช้ดีเอ็นเอปลอดภัย SYBR เจ agarose เจคราบในเต้ 1หลังจากฟอกโดยใช้คอลัมน์หมุน (QIAGEN ดึสเซลดอร์ฟเยอรมนี), ชิ้นส่วนดีเอ็นเอกับโมเลกุลการ์ดควบทั้งสองอย่าง

การแปล กรุณารอสักครู่..

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:[สำเนา]

คัดลอก!

ลำดับสูงผ่านลำดับสูงผ่านได้ถูกใช้ในการวิเคราะห์จุลินทรีย์ในชุมชนตะกอนเม็ดแบบไม่ใช้ออกซิเจนเพื่อดูว่าการเปลี่ยนแปลงชุมชนของจุลินทรีย์ภายใต้สภาพแวดล้อมที่สูงNH4 + -N. Anaerobic ตัวอย่างตะกอนเม็ดที่ถูกเก็บรวบรวมจากเครื่องปฏิกรณ์ในวันที่0, 60 และ 186 เมื่อประสิทธิภาพการทำงานของเครื่องปฏิกรณ์ที่มีเสถียรภาพ ดีเอ็นเอถูกสกัดโดยใช้ดิน EZNA ดีเอ็นเอ Kit (OMEGA). สำหรับแต่ละตัวอย่างเราขยายภูมิภาค V4 16S ยีน rRNA โดยใช้ชุดไพรเมอร์อนุรักษ์ในวงกว้าง (515F / 806R 50 GTGCCAGC MGCCGCGGTAA-30/50 GGACTACHVGGGTWTCTAAT-30) . PCR ไพรเมอร์ที่ถูกสร้างขึ้นดังต่อไปนี้ไปข้างหน้าไพรเมอร์ = 454 ไทเทเนียมรองพื้น Lib ลิตร A / 5 ฐานบาร์โค้ด / ไปข้างหน้า 16S ไพรเมอร์และไพรเมอร์กลับ= 454 ไทเทเนียม Lib ลิตรรองพื้น B / กลับ 16S ไพรเมอร์(. Peiffer et al, 2013) . ปฏิกิริยา PCR ได้ดำเนินการเพิ่มขึ้นสามเท่าในปฏิกิริยาที่20 จะมี 0.4 LM ไปข้างหน้าและไพรเมอร์ย้อนกลับ 1 LL ดีเอ็นเอแม่แบบ 250 นาโนเมตรและ dNTP 1 บัฟเฟอร์ FastPfu เจือจางทั้งหมดถูกดำเนินการโดยใช้น้ำที่ผ่านการรับรอง PCR ดีเอ็นเอฟรี ความร้อนขี่จักรยานประกอบด้วย denaturation เริ่มต้นที่ 95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 2 นาทีตามมา 25 รอบของการสูญเสียสภาพธรรมชาติที่ 95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 วินาที, การอบที่ 55 องศาเซลเซียสเป็นเวลา30 วินาทีซึ่งเป็นส่วนขยายที่ 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 วินาที, ที่มีนามสกุลสุดท้าย 5 นาทีที่72 องศาเซลเซียส ทำซ้ำ amplicons ถูกรวบรวมและมองเห็นบน 2.0% เจล agarose ใช้ SYBR คราบเจลดีเอ็นเอตู้นิรภัยที่ 1? TAE. หลังจากการทำให้บริสุทธิ์โดยใช้คอลัมน์หมุน (QIAGEN, Düsseldorf, เยอรมนี) ดีเอ็นเอกับโมเลกุลอะแดปเตอร์ ligated ทั้ง

การแปล กรุณารอสักครู่..

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:[สำเนา]

คัดลอก!

สูง throughput sequencing
ลำดับ throughput สูงถูกใช้ในการวิเคราะห์จุลินทรีย์
ชุมชนในตะกอนเม็ดจุลินทรีย์แบบไม่ใช้ออกซิเจนเพื่อดูวิธีการของการเปลี่ยนแปลงในชุมชน

( NH4 ไนโตรเจนสูง สิ่งแวดล้อม ระหว่างเม็ดตะกอนตัวอย่างจาก
เตาปฏิกรณ์ในวันที่ 0 , 60 และเมื่อประสิทธิภาพของเครื่องปฏิกรณ์
เป็นมั่นคง . จีโนมดีเอ็นเอโดยใช้ e.z.n.a.ดีเอ็นเอ ( โอเมก้า ) ชุดดิน
.
สำหรับแต่ละตัวอย่าง เราขยายเขต / เบส 16S rRNA ยีน
ใช้วงกว้างเพื่อรองพื้นชุด ( 515f / 806r 50-gtgccagc
, mgccgcggtaa-30 / 50-ggactachvgggtwtctaat-30 ) pcr
โดยสร้างตาม : ส่งต่อรองพื้น = 454
ไทเทเนียม lib-l รองพื้น / 5-base บาร์โค้ด / ไปข้างหน้าและย้อนกลับใช้ไพรเมอร์รองพื้น
= 454 ไทเทเนียม lib-l รองพื้นใช้รองพื้นแบบ B /
( ไพเฟอร์ et al . ,2013 ) ปฏิกิริยา PCR พบว่าทั้งสามใบ
20 จะมีปฏิกิริยากับ 0.4 LM ไปข้างหน้าและย้อนกลับไพรเมอร์ 1-ll
แม่แบบดีเอ็นเอ , 250 nm dntp และ 1 fastpfu บัฟเฟอร์ วิธีการทดลองใช้ทั้งหมด
รับรองตรวจดีเอ็นเอฟรีน้ำ ความร้อน
จักรยานเป็นครั้งแรก ( ที่ 95 C 2 นาทีตาม
25 รอบ ( 95 เป็นเวลา 30 วินาที annealing ที่ 55 C
30 วินาทีส่วนขยายที่ 72 เป็นเวลา 30 วินาที ด้วยส่วนขยายสุดท้าย 5 นาทีที่ 72 C
เลียนแบบ amplicons ถูก pooled และภาพปรากฏการณ์ที่ 2.0 %
( เจลใช้ SYBR ปลอดภัยดีเอ็นเอเจลคราบใน 1 แท .
หลังจากฟอกใช้ปั่นคอลัมน์ ( QIAGEN ดึสเซลดอร์ฟเยอรมนี , ,
) ดีเอ็นเอกับผูกอะแดปเตอร์โมเลกุลทั้งสอง

การแปล กรุณารอสักครู่..

ภาษาอื่น ๆ

การสนับสนุนเครื่องมือแปลภาษา: กรีก, กันนาดา, กาลิเชียน, คลิงออน, คอร์สิกา, คาซัค, คาตาลัน, คินยารวันดา, คีร์กิซ, คุชราต, จอร์เจีย, จีน, จีนดั้งเดิม, ชวา, ชิเชวา, ซามัว, ซีบัวโน, ซุนดา, ซูลู, ญี่ปุ่น, ดัตช์, ตรวจหาภาษา, ตุรกี, ทมิฬ, ทาจิก, ทาทาร์, นอร์เวย์, บอสเนีย, บัลแกเรีย, บาสก์, ปัญจาป, ฝรั่งเศส, พาชตู, ฟริเชียน, ฟินแลนด์, ฟิลิปปินส์, ภาษาอินโดนีเซี, มองโกเลีย, มัลทีส, มาซีโดเนีย, มาราฐี, มาลากาซี, มาลายาลัม, มาเลย์, ม้ง, ยิดดิช, ยูเครน, รัสเซีย, ละติน, ลักเซมเบิร์ก, ลัตเวีย, ลาว, ลิทัวเนีย, สวาฮิลี, สวีเดน, สิงหล, สินธี, สเปน, สโลวัก, สโลวีเนีย, อังกฤษ, อัมฮาริก, อาร์เซอร์ไบจัน, อาร์เมเนีย, อาหรับ, อิกโบ, อิตาลี, อุยกูร์, อุสเบกิสถาน, อูรดู, ฮังการี, ฮัวซา, ฮาวาย, ฮินดี, ฮีบรู, เกลิกสกอต, เกาหลี, เขมร, เคิร์ด, เช็ก, เซอร์เบียน, เซโซโท, เดนมาร์ก, เตลูกู, เติร์กเมน, เนปาล, เบงกอล, เบลารุส, เปอร์เซีย, เมารี, เมียนมา (พม่า), เยอรมัน, เวลส์, เวียดนาม, เอสเปอแรนโต, เอสโทเนีย, เฮติครีโอล, แอฟริกา, แอลเบเนีย, โคซา, โครเอเชีย, โชนา, โซมาลี, โปรตุเกส, โปแลนด์, โยรูบา, โรมาเนีย, โอเดีย (โอริยา), ไทย, ไอซ์แลนด์, ไอร์แลนด์, การแปลภาษา.