cAMP is one of the most important s

cAMP is one of the most important second messengers involved in a variety of physiological responses and is thus widely measured in HTS. Present methods for cAMP measurement include fluorescence polarization (FP)19, HitHunter EFC technology based on β-galactosidase activity complementation, cyclic-nucleotide-gated ion channel (CNGC) coupled cAMP assay based on membrane potential20, as well as cAMP-Glo assay developed by Promega. All of them reflect a decline of fluorescent signals in response to an increase in cAMP concentration. Other cAMP assays, based on reporter gene by splicing the reporter luciferase coding sequence under the control of Cre (causes recombination), measure elevations of cAMP levels exhibited as an increase in fluorescence/luminescence intensity. Obviously, this approach is labor intensive (requires more than 4 hours) and reflects cAMP concentration indirectly. Although cAMP measurements tend to offer more accurate and physiologically relevant results with low false positive hits, some of them require special apparatus/fittings (e.g., optical filters) and expensive regents (e.g., engineered antibodies fused with compensatory enzyme or fluorescent indicators).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ค่ายเป็นหนึ่งในสารสองที่สำคัญที่สุดที่เกี่ยวข้องกับความหลากหลายของการตอบสนองทางสรีรวิทยาและจึงวัดกันอย่างแพร่หลายใน HTS วิธีการในปัจจุบันสำหรับการวัดค่ายรวมขั้วเรืองแสง (FP) 19 เทคโนโลยี hithunter EFC ตาม complementation กิจกรรมβ-galactosidase ช่องไอออนวงจร-เบื่อหน่าย-รั้วรอบขอบชิด (cngc) ทดสอบค่ายคู่บนพื้นฐานของเมมเบรน potential20,เช่นเดียวกับการทดสอบค่าย GLO-พัฒนาโดย Promega ทั้งหมดของพวกเขาสะท้อนให้เห็นถึงการลดลงของสัญญาณเรืองแสงในการตอบสนองการเพิ่มขึ้นในค่ายกักกัน ตรวจค่ายอื่น ๆ บนพื้นฐานของยีนนักข่าวตามประกบ luciferase นักข่าวเข้ารหัสลำดับภายใต้การควบคุมของ CRE (recombination สาเหตุ), เอนไซม์ไลวัดระดับค่ายแสดงเป็นเพิ่มขึ้นในการเรืองแสงความเข้ม / แสงเรืองเห็นได้ชัดว่าวิธีการนี​​้เป็นแรงงานเข้มข้น (ต้องใช้มากกว่า 4 ชั่วโมง) และสะท้อนให้เห็นถึงความเข้มข้นของค่ายทางอ้อม แม้ว่าวัดค่ายมีแนวโน้มที่จะให้ผลถูกต้องมากขึ้นและทางสรีรวิทยาที่เกี่ยวข้องกับฮิตบวกในระดับต่ำเท็จบางส่วนของพวกเขาจำเป็นต้องมีอุปกรณ์พิเศษ / อุปกรณ์ (เช่นกรองแสง) และผู้สำเร็จราชการมีราคาแพง (เช่นแอนติบอดีวิศวกรรมผสมกับเอนไซม์ชดเชยหรือตัวชี้วัดเรืองแสง)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ค่ายเป็นหนึ่งในสืบสองสำคัญที่เกี่ยวข้องในหลากหลายตอบสนองสรีรวิทยา และจึงแพร่หลายวัดใน HTS. นำเสนอวิธีการวัดค่ายรวม fluorescence โพลาไรซ์ (FP) 19, HitHunter EFC เทคโนโลยีตามβ-galactosidase กิจกรรม complementation ทุกรอบนิวคลีโอไทด์-gated ไอออนแชนเนล (CNGC) ควบคู่การวิเคราะห์ค่ายตามที่ potential20 เมมเบรน ตลอดจนวิเคราะห์ว่าค่ายที่พัฒนา โดย Promega ทั้งหมดสะท้อนปฏิเสธสัญญาณฟลูออเรสตอบสนองต่อการเพิ่มความเข้มข้นที่แคมป์ ค่ายอื่น ๆ assays ตามโปรแกรมรายงานยีน โดย splicing luciferase โปรแกรมรายงานรหัสลำดับภายใต้การควบคุมของ Cre (สาเหตุ recombination), วัด elevations ระดับแคมป์ที่จัดแสดงเป็นการเพิ่มความเข้ม fluorescence/luminescence การ อย่างชัดเจน วิธีการนี้จะแรงมาก (ต้องมากกว่า 4 ชั่วโมง) และสะท้อนถึงความเข้มข้นของค่ายโดยทางอ้อม แม้ว่าค่ายวัดมักจะ มีผลถูกต้องมากขึ้น และ physiologically ที่เกี่ยวข้องกับชมบวกเท็จต่ำ บางส่วนของพวกเขาต้องการเครื่องมือพิเศษอุปกรณ์ (เช่น กรองแสง) และรีเจนท์แพง (เช่น แอนตี้ออกแบบ fused เอนไซม์ชดเชยหรือเรืองแสงตัวบ่งชี้)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ค่ายเป็นหนึ่งในผู้ที่สองที่มีความสำคัญเกี่ยวข้องกับในความหลากหลายของการตอบกลับในทางสรีรศาสตร์และได้รับการยอมรับอย่างกว้างขวางโดยวัดใน HTS ดังนั้น วิธีใดวิธีหนึ่งปัจจุบันสำหรับการวัดค่ายแบ่งขั้วรวมถึงคุณสมบัติฟลูเรซ - เซ็นซ( FP ) 19 hithunter efc ซึ่งใช้เทคโนโลยีบน complementation กิจกรรมเฉพาะ - galactosidase วน - nucleotide - ประตูไอออน Channel ( cngc )ประกอบสอบค่ายที่ใช้เยื่อ ศักยภาพ 20และพยายามค่าย - glo พัฒนาโดย promega พวกเขาทั้งหมดได้สะท้อนให้เห็นถึงการปฏิเสธของสัญญาณแสงฟลูออเรสเซนต์ในการตอบสนองในการเพิ่มขึ้นในการระดมค่าย assays ค่ายอื่นๆตามนักข่าวยีนโดยฟื้นฟูตามลำดับการเข้ารหัส luciferase ผู้สื่อข่าวที่อยู่ ภายใต้ การควบคุมของ cre (เป็นสาเหตุให้เกิด recombination )วัดเขาชะเมาในระดับค่ายมาเป็นการเพิ่มความเข้มคุณสมบัติฟลูเรซ - เซ็นซใน/ luminescenceเห็นได้ชัดว่าวิธีการนี้คือต้องใช้แรงงาน(ต้องใช้มากกว่า 4 ชั่วโมง)และสะท้อนถึงความเข้มข้นค่ายโดยอ้อม แม้ว่าการวัดค่ายมีแนวโน้มที่จะจัดให้บริการได้ผลลัพธ์ที่แม่นยำยิ่งขึ้นและที่เกี่ยวข้องในทางสรีรศาสตร์พร้อมด้วย Hits ผิดพลาดต่ำบางคนต้องใช้เครื่องพิเศษ/การตกแต่ง(เช่นฟิลเตอร์ออปติคัล)และ Regents ราคาแพง(เช่นเมื่อเส้นเลือดถูกออกแบบมาผสมผสานเข้ากับเอนไซม์ค่าชดเชยหรือไฟแสดงสถานะฟลูออเรสเซนต์)